司盘60含量的检测方法与流程

1.本技术属于药物分析技术领域，尤其涉及一种司盘60含量的检测方法。


背景技术：

2.司盘60又名硬脂山梨坦，为山梨坦和硬脂酸形成酯的混合物。司盘60可由山梨醇脱水，在碱性催化下，与硬脂酸酯化而制得，或者由山梨醇与硬脂酸在180～280℃下直接酯化而制得。山梨坦酯作为亲脂型非离子表面活性剂，广泛应用于化妆品、食品和药品中。山梨坦酯是水/油型优良乳化剂，具有很强的乳化作用和分散、湿润等效果，可与各种类型表面活性剂混合使用，可用于制备局部应用的乳膏、乳剂及软膏。
3.司盘60结构中一端含有亲水的羟基，另一端为亲油的长链烷烃，具有表面活性剂的特性。在药物制剂中，乳膏、乳剂及软膏往往含有鲸蜡醇等硬化剂、乳化剂，以及聚山梨酯等表面活性剂、润湿剂。目前司盘60的含量检测方法，分别有气相色谱法和高效液相色谱法(uv检测器)，但因为司盘60为复杂的混合物，所以在气相色谱和液相色谱中均会出多个峰。在液相色谱中，鲸蜡醇峰与司盘60中含亲水基团多的组分峰难以分离，聚山梨酯峰与司盘60中含亲油基团多的组分峰难以分离，专属性差。并且在药物制剂中司盘60的添加量一般较低，而司盘60结构中仅有一个羰基有较弱的紫外吸收，高效液相色谱法(uv检测器)的灵敏度差。同样地，因药物制剂中司盘60的含量较低，且司盘60沸点较高为460℃左右，难以气化，所以气相色谱法的灵敏度也差。


技术实现要素：

4.本技术的目的在于提供一种司盘60含量的检测方法，旨在一定程度上解决现有司盘60含量的检测方法易受到其他组分干扰，难以精确测量，灵敏度低的技术问题。
5.为实现上述申请目的，本技术采用的技术方案如下：
6.第一方面，本技术提供一种司盘60含量的检测方法，包括以下步骤：
7.获取待测制剂溶液、司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液；
8.对所述待测制剂的溶液、所述司盘60标准曲线溶液和所述空白基质溶液，分别进行高效液相色谱分析，分别得到待测制剂色谱图、司盘60标准曲线色谱图和空白基质色谱图；
9.由所述司盘60标准曲线色谱图和所述空白基质色谱图确定司盘60代表峰；
10.以所述司盘60标准曲线溶液浓度的对数值和所述司盘60标准曲线色谱图中司盘60代表峰面积的对数值建立线性回归方程；
11.根据所述线性回归方程，及所述待测制剂色谱图中司盘60代表峰面积的对数值，计算待测制剂中司盘60含量。
12.本技术第一方面提供的司盘60含量的检测方法，分别获取待测制剂溶液、不同浓度的司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液，然后分别进行高效液相色谱检测。所述司盘60标准曲线色谱图和所述空白基质色谱图确定司盘60代表峰，即选取标准曲线色谱图中不同
于空白基质色谱图的色谱峰作为司盘60代表峰，以不同浓度的司盘60标准曲线溶液浓度的对数值和司盘60代表峰峰面积的对数值建立线性回归方程，将待测制剂色谱图中司盘60代表峰对应的色谱峰峰面积的对数值，代入所述线性回归方程中便可精确计算待测制剂中司盘60的含量。本技术司盘60含量的检测方法，可实现待测制剂中司盘60含量的准确检测，且检测灵敏度高，克服了待测制剂中其他组分干扰的问题，增强了专属性。
附图说明
13.为了更清楚地说明本技术实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
14.图1是本技术实施例1提供的空白基质色谱图；
15.图2是本技术实施例1提供的标准曲线溶液的参考色谱图；
16.图3是本技术实施例1提供的待测制剂色谱图；
17.图4是本技术实施例2提供的标准曲线溶液的参考色谱图；
18.图5是本技术实施例2提供的待测制剂色谱图。
具体实施方式
19.为了使本技术要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本技术，并不用于限定本技术。
20.本发明中，术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，a和/或b，可以表示：单独存在a，同时存在a和b，单独存在b的情况。其中a，b可以是单数或者复数。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
21.本发明中，“至少一个”是指一个或者多个，“多个”是指两个或两个以上。“以下至少一项(个)”或其类似表达，是指的这些项中的任意组合，包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。例如，“a，b或c中的至少一项(个)”，或，“a，b和c中的至少一项(个)”，均可以表示：a，b，c，a
‑
b(即a和b)，a
‑
c，b
‑
c，或a
‑
b
‑
c，其中a，b，c分别可以是单个，也可以是多个。
22.应理解，在本发明的各种实施例中，上述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后，部分或全部步骤可以并行执行或先后执行，各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定，而不应对本发明实施例的实施过程构成任何限定。
23.在本发明实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本发明。在本发明实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。
24.本发明实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间重量的比例关系，因此，只要是按照本发明实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本发明实施例说明书公开的范围之内。具体地，本发明实施例说明书中的质量可以是μg、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。
25.本技术实施例第一方面提供一种司盘60含量的检测方法，包括以下步骤：
26.s10.获取待测制剂溶液、司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液；
27.s20.对待测制剂的溶液、司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液，分别进行高效液相色谱分析，分别得到待测制剂色谱图、司盘60标准曲线色谱图和空白基质色谱图；
28.s30.由司盘60标准曲线色谱图和空白基质色谱图确定司盘60代表峰；
29.s40.以司盘60标准曲线溶液浓度的对数值和司盘60标准曲线色谱图中司盘60代表峰面积的对数值建立线性回归方程；
30.s50.根据线性回归方程，及待测制剂色谱图中司盘60代表峰面积的对数值，计算待测制剂中司盘60含量。
31.本技术第一方面提供的司盘60含量的检测方法，分别获取待测制剂溶液、不同浓度的司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液，然后分别进行高效液相色谱检测。由司盘60标准曲线色谱图和空白基质色谱图确定司盘60代表峰，即选取标准曲线色谱图中不同于空白基质色谱图的色谱峰作为代表峰，以不同浓度的司盘60标准曲线溶液浓度的对数值和代表峰峰面积的对数值建立线性回归方程，将待测制剂色谱图中代表峰对应的色谱峰峰面积的对数值，代入线性回归方程中便可精确计算待测制剂中司盘60的含量。本技术实施例司盘60含量的检测方法，可实现待测制剂中司盘60含量的准确检测，且检测灵敏度高，克服了待测制剂中其他组分干扰的问题，增强了专属性。
32.在一些实施例中，上述步骤s10中，待测制剂中包含的组分及其含量可通过制剂性质或者简单测量获悉大概值。但其中司盘60含量的检测由于易受到其他组分干扰，其含量难以准确获悉，需要通过本技术实施例检测方法进一步检测。
33.在一些实施例中，待测制剂的剂型可以是乳膏剂、胶囊、片剂、粉剂等任何剂型，本技术实施例对待测制剂的剂型不做具体限定，本技术实施例方法可用于检测任意剂型的待测制剂中的司盘60的含量。
34.在一些实施例中，获取待测制剂溶液的步骤包括：将待测制剂溶解分散到体积比1:(0～1)的异丙醇和四氢呋喃的混合溶剂中，司盘60在该混合溶剂中有很好的溶解度以及稳定且良好的峰形，制得待测制剂溶液。在一些具体实施例中，取待测药物制剂适量，置量瓶中，用体积比1:(0～1)的异丙醇和四氢呋喃的稀释剂溶解，可超声助溶，并稀释至刻度。
35.在一些实施例中，上述步骤s10中，司盘60标准曲线溶液，以司盘60的浓度为变量制备司盘60标准曲线溶液，同时为证明待测制剂中除司盘60外其他组分不会干扰司盘60的检测灵敏度，并排除待测制剂中除司盘60外其他组分的干扰，在标准曲线溶液中同步添加待测制剂中除司盘60外其他组分。
36.在一些实施例中，为确保检测的灵敏度，司盘60标准曲线溶液设置5个以上的浓度梯度，从而确保后续建立的线性回归方程的可靠性。在一些具体实施例中，分别取司盘60对照品适量，加入与待测制剂处方量一致的其他组分，用稀释剂溶解，可超声助溶，并稀释制成每1ml中约含司盘60 0.3mg～1.2mg的系列标准曲线溶液，即浓度为0.3mg/ml～1.2mg/ml。
37.在一些实施例中，司盘60标准曲线溶液中溶剂采用体积比1:(0～1)的异丙醇和四氢呋喃的混合溶剂，司盘60在该混合溶剂中有很好的溶解度以及稳定且良好的峰形。
38.在一些实施例中，上述步骤s10中，空白基质溶液，以待测制剂中除司盘60外的其他组分配制空白基质溶液。在一些具体实施例中，取与待测药物制剂处方量一致的其他组
分(除司盘60外)，用稀释剂溶解，可超声助溶，并稀释至刻度。
39.在一些实施例中，空白基质溶液中溶剂采用体积比1:(0～1)的异丙醇和四氢呋喃的混合溶剂。
40.在一些实施例中，待测制剂溶液、司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液中的溶剂均选自体积比1:(0～1)的异丙醇和四氢呋喃的混合溶剂，三种待测溶液中均采用相同的溶剂，该溶剂不但对司盘60有很好的溶解度，而且有利于司盘60在后续高效液相色谱中峰形稳定且良好。同时进一步排除溶剂类型的干扰。
41.在一些实施例中，待测制剂溶液、司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液中，含有相同浓度的待测制剂中除司盘60外的其他组分。本技术实施例待测制剂溶液、司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液中待测制剂除司盘60外的其他组分浓度保持相同，可更好的排除制剂中除司盘60外其他组分对司盘60检测的干扰。
42.在一些实施例中，上述步骤s20中，对待测制剂的溶液、不同浓度的司盘60标准曲线溶液和空白基质溶液，分别采用高效液相色谱法分离后，用蒸发光散射检测器进行检测，分别得到待测制剂色谱图、不同浓度的标准曲线色谱图和空白基质色谱图。本技术实施例通过采用高效液相色谱法，用蒸发光散射检测器检测，克服了司盘60紫外吸收弱导致的灵敏度差的问题。
43.在一些实施例中，高效液相色谱法分离的条件包括：采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，此类色谱柱对于含长链烷烃的极性较小的化合物有良好的保留效果；采用甲醇和四氢呋喃的混合溶剂作为流动相进行等度洗脱，解决了司盘60在水相体系中溶解性差的问题，且沸点低适合用于蒸发光散射检测器。该条件可将司盘60中各峰进行分离，可以简单快捷灵敏的检测药物制剂中司盘60的含量，具有不易受药物制剂中其他组分干扰的优点。
44.在一些实施例中，流动相中，甲醇与四氢呋喃的体积比(75～85):(25～15)，用该流动相进行等度洗脱，对司盘60有很好的洗脱效果。
45.在一些实施例中，流动相的流速为0.8～1.2ml/min。本技术实施例中高效液相色谱法常用色谱柱的内径为4.6mm，在流动相的流速为0.8～1.2ml/min范围内司盘60的峰形和分离效果良好。
46.在一些实施例中，色谱柱包括titank c18柱，具体规格可以是4.6mm
×
250mm，5μm。
47.在一些实施例中，色谱柱的柱温为25～45℃，在该柱温下流动相对司盘60有较好的洗脱效果。
48.在一些实施例中，蒸发光散射检测器的载气为空气或氮气，压力为30～50psi，增益值为1～100。在一些实施例中，蒸发光散射检测器的漂移管温度为60～80℃，喷雾器模式为加热。本技术实施例蒸发光散射检测器在上述实施例的条件下有更好的检测效果。
49.在一些实施例中，上述步骤s30中，由司盘60标准曲线色谱图和空白基质色谱图确定司盘60代表峰的步骤包括：选择标准曲线色谱图中不受空白基质干扰的色谱峰作为代表峰，即选取标准曲线色谱图中不同于空白基质色谱图中色谱峰的色谱峰作为代表峰，排除待测制剂中其他组分的干扰。
50.在一些实施例中，上述步骤s40中，以不同浓度的司盘60标准曲线溶液浓度的对数值和司盘60标准曲线色谱图中司盘60代表峰峰面积的对数值建立线性回归方程。
51.在一些实施例中，上述步骤s50中，将待测制剂色谱图中司盘60代表峰面积的对数值，代入线性回归方程中，即可计算出待测制剂中司盘60的准确含量。本技术实施例通过建立线性回归方程，以代表峰峰面积的对数值计算待测制剂中司盘60含量的检测方法，克服了待测制剂中其他组分干扰的问题，增强了专属性，检测方法简单高效，灵敏度高，结果准确，可满足药物制剂中司盘60含量检测的要求。
52.为使本技术上述实施细节和操作能清楚地被本领域技术人员理解，以及本技术实施例司盘60含量的检测方法的进步性能显著的体现，以下通过多个实施例来举例说明上述技术方案。
53.实施例1
54.一种药物制剂中司盘60含量的检测方法，包括如下步骤：
55.(1)待测制剂溶液配制：取盐酸特比萘芬乳膏(厂家：澳美制药)约600mg，精密称定，置20ml量瓶中，用异丙醇
‑
四氢呋喃(3:2)溶解并稀释至刻度，摇匀。
56.(2)标准曲线溶液配制：取司盘60(厂家：南京威尔)约300mg，精密称定，置100ml量瓶中，用异丙醇
‑
四氢呋喃(3:2)溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、8ml，分置20ml量瓶中，依配方量加入盐酸特比萘芬乳膏中除司盘60外的其他组分：十六烷棕榈酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、十六烷醇、十八烷醇、聚山梨酯60、氢氧化钠、纯化水和苯甲醇，用异丙醇
‑
四氢呋喃(3:2)溶解并稀释至刻度，摇匀。
57.(3)空白基质溶液：依配方量取盐酸特比萘芬乳膏中除司盘60外的其他组分：十六烷棕榈酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、十六烷醇、十八烷醇、聚山梨酯60、氢氧化钠、纯化水和苯甲醇，置20ml量瓶中，用异丙醇
‑
四氢呋喃(3:2)溶解并稀释至刻度，摇匀。
58.(4)分别精密量取上述空白基质溶液、标准曲线溶液和待测制剂溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，采用如下色谱条件进行检测：
59.流动相：甲醇
‑
四氢呋喃(80:20)；
60.流速：1.0ml/min；
61.运行时间：30min；
62.色谱柱：titank c18(4.6mm
×
250mm,5μm)；
63.柱温：30℃；
64.检测器：waters 2424 elsd；
65.载气：空气；
66.增益值：10；
67.压力：40psi；
68.漂移管温度：70℃；
69.喷雾器模式：heating(100％)。
70.测得空白基质色谱图如附图1所示，浓度约为0.6mg/ml的标准曲线溶液的参考色谱图如附图2所示，待测制剂色谱图如附图3所示。
71.以空白基质色谱图为空白参照，选择标准曲线色谱图中不同于空白基质色谱图中的色谱峰作为代表峰，排除空白基质干扰，以标准曲线溶液浓度的对数值和代表峰峰面积的对数值建立线性回归方程，y＝1.3851x 12.9174(r＝0.9988)；将待测制剂色谱图中代表峰对应的色谱峰峰面积的对数值，代入线性回归方程中，计算出药物制剂中司盘60的准确
含量，测试结果如下表1所示：
72.表1
[0073][0074]
实施例2
[0075]
一种药物制剂中司盘60含量的检测方法，包括如下步骤：
[0076]
(1)待测制剂溶液配制：取盐酸特比萘芬乳膏(厂家：葛兰素史克)约600mg，精密称定，置20ml量瓶中，用异丙醇
‑
四氢呋喃(3:2)溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0077]
(2)标准曲线溶液配制：取司盘60(厂家：croda)适量，精密称定，用异丙醇
‑
四氢呋喃(3:2)溶解并稀释制成每1ml中约含3mg的溶液；分别精密量取上述溶液适量，置20ml量瓶中，依配方量加入盐酸特比萘芬乳膏中除司盘60外的其他组分：十六烷棕榈酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、十六烷醇、十八烷醇、聚山梨酯60、氢氧化钠、纯化水和苯甲醇，用异丙醇
‑
四氢呋喃(3:2)溶解并稀释制成每1ml约含司盘60 0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、1.2mg的系列标准曲线溶液。
[0078]
(3)空白基质溶液：依配方量取盐酸特比萘芬乳膏中除司盘60外的其他组分：十六烷棕榈酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、十六烷醇、十八烷醇、聚山梨酯60、氢氧化钠、纯化水和苯甲醇，置20ml量瓶中，用异丙醇
‑
四氢呋喃(3:2)溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0079]
(4)分别精密量取上述空白基质溶液、标准曲线溶液和待测制剂溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，采用实施例1中色谱条件进行检测和计算。建立的线性回归方程为y＝1.2442x 13.1204(r＝0.9993)。浓度约为0.6mg/ml的标准曲线溶液的参考色谱图如附图4所示，待测制剂色谱图如附图5所示。测试结果如下表2所示：
[0080]
表2
[0081][0082]
由上述实施例1和2可知，本技术实施例司盘60含量的检测方法，可精确测量待测制剂中司盘60的含量，检测方法可以简单快捷灵敏的检测待测制剂中司盘60的含量，具有
不易受待测制剂中其他组分干扰。
[0083]
以上所述仅为本技术的较佳实施例而已，并不用以限制本技术，凡在本技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本技术的保护范围之内。