一种慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于慢性肾功能衰竭治疗药物技术领域，具体涉及一种慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.慢性肾功能衰竭(chronic renal failure，crf)是指各种原发性或继发性慢性肾脏疾病晚期，由于肾单位进行性破坏，残存肾单位不能充分排出代谢废物和维持内环境稳定，出现一系列临床综合征的病理过程，主要表现为血清肌酐(scr)、尿素氮(bun)含量升高，多饮、多尿。
3.爬沙虫在四川、云南等地是广为人知的药食两用型滋补品，被誉为“动物人参”，其入药首载于《西昌中草药》，药用主流品种为广翅目昆虫属模巨齿蛉等的大型幼虫，具有温肾止溺作用，广泛用于治疗小儿遗尿、溺床、尿频、老年人体虚夜尿。药理学研究表明，爬沙虫具有抗利尿、促进大鼠繁殖、增强果蝇的繁殖力、提高果蝇寿命等作用；但目前尚未发现爬沙虫在慢性肾功能衰竭方面的研究报道。


技术实现要素：

4.针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物及其制备方法和应用，将爬沙虫提取物应用到慢性肾功能衰竭治疗中，能够有效治疗慢性肾功能衰竭引起的各种症状。
5.为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物的制备方法，依次包括以下步骤：
6.(1)将爬沙虫用超纯水洗净，沥干，在
‑
80℃温度下冻存；
7.(2)将步骤(1)所得冻爬沙虫在
‑
80℃温度下冷冻干燥，然后加入液氮研磨，得爬沙虫干粉；
8.(3)向步骤(2)所得爬沙虫干粉中加入等体积的75vt％乙醇溶液，回流提取4
‑
6次，每次2
‑
3h，合并提取液，冷冻干燥，得慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物。
9.上述的慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物的制备方法制得的慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物。
10.上述的慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物在制备慢性肾功能衰竭治疗药物中的应用。
11.一种用于慢性肾功能衰竭治疗的药物，包括上述的慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物。
12.综上所述，本发明具备以下优点：
13.本发明制备得到了爬沙虫提取物，并将其用于慢性肾功能衰竭治疗药物中，能够有效治疗慢性肾功能衰竭引起的各种症状，具体包括降低慢性肾功能衰竭大鼠血清肌酐、
尿素氮的含量，降低饮水量、尿量，降低肾脏系数，降低肾脏病理损伤；并评价了爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用，为爬沙虫的深入开发利用提供了数据支撑。而爬沙虫对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用可能是通过提高下丘脑
‑
垂体
‑
肾上腺皮质系统功能实现的。本发明还提供了对慢性肾功能衰竭大鼠有治疗作用的爬沙虫提取物的制备方法，填补了这一领域的空白。
附图说明
14.图1为正常组与模型组大鼠肾脏外观形态图；
15.图2为爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用的肾脏外观形态图；
16.图3为爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用的肾脏病理切片图。
具体实施方式
17.实施例1
18.一种慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物，其制备方法依次包括以下步骤：
19.(1)将新鲜爬沙虫用超纯水洗净，沥干，在
‑
80℃温度下冻存；
20.(2)将步骤(1)所得冻爬沙虫在
‑
80℃温度下冷冻干燥，然后在加入液氮研磨，得爬沙虫干粉；
21.(3)向步骤(2)所得爬沙虫干粉中加入等体积的75vt％乙醇溶液，回流提取5次，每次2h，合并提取液，冷冻干燥，得慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物。
22.将上述制得的慢性肾功能衰竭治疗用爬沙虫提取物用于慢性肾功能衰竭治疗药物中，并以此进行大鼠试验，步骤如下：
23.(1)雄性spf级sd大鼠(200
‑
220g)，41只，适应性喂养1w；
24.(2)随机分为正常对照组、模型组，正常组11只，模型组30只，正常组给予0.5％cmcna溶液，其余各组灌胃200mg/kg/d腺嘌呤(0.5％cmcna混悬)，连续3w；
25.(3)造模结束后记录各组大鼠24h饮水量，采用大鼠代谢笼收集各组大鼠24h尿液，测量并记录体积。随机抽取3只正常组大鼠和6只模型组大鼠，禁食不禁水18h，称重，股动脉取血，静置30min，随后离心(4000r/min，5min)，制备血清，测定肌酐、尿素氮含量。剥离肾脏，用冷生理盐水洗涤，称重，计算肾脏系数。拍照后，置于4％多聚甲醛固定液中固定，制作病理切片，观察病变情况。以检验模型是否复制成功。
26.(4)将模型组24只大鼠按照体重随机分为3组，即模型组，阳性组，爬沙虫提取物组，每组8只；空白组和模型组给予0.5％cmcna，阳性组给予缩泉丸混悬液(1.5g/kg/d)(0.5％cmcna混悬)，爬沙虫提取物组给予爬沙虫提取物(生药量0.67g/kg/d)(0.5％cmcna混悬)，连续4w。
27.(5)给药结束后，记录24h饮水量，采用大鼠代谢笼收集24h尿液，测量并记录体积。禁食不禁水18h，称重，股动脉取血，静置30min，随后离心(4000r/min，5min)，制备血清，测定血清中指标含量。剥离肾脏，用冷生理盐水洗涤，称重，计算肾脏系数。拍照后，置于4％多聚甲醛固定液中固定，制作病理切片，观察病变情况，以考察爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用。
28.试验1：慢性肾功能衰竭大鼠模型评价
29.造模3w后，测定正常组和模型组大鼠饮水量和尿量，其结果见表1；然后随机抽取正常组大鼠3只和模型组大鼠6只，测定大鼠血清肌酐、尿素氮含量及肾脏系数，其结果见表2，且正常组与模型组大鼠肾脏外观形态见图1。图1中，a为正常组，b为模型组。
30.表1造模3w后大鼠饮水量、尿量
31.组别饮水量(ml/只)尿量(ml/只)正常组38.75
±
1.0614.5
±
4.43模型组66.06
±
4.52
**
42.37
±
4.84
**
32.注：**与正常组比较p＜0.01，表2同。
33.表2造模3w后大鼠血清肌酐、尿素氮含量及肾脏系数
34.组别肌酐(umol/l)尿素氮(umol/l)肾脏系数正常组139.51
±
4.687.55
±
0.640.70
±
0.01模型组204.49
±
11.08
**
19.3
±
2.26
**
1.34
±
0.09
**
35.由表1可知，模型组大鼠饮水量、尿量较正常组多(p＜0.01)。
36.由表2可知，模型组血清肌酐、尿素氮含量较正常组高(p＜0.01)，模型组肾脏系数较正常大(p＜0.01)；由图1可知，模型组肾脏外观出现表面凹凸不平、颜色灰白、质地较硬、体积增大。上述结果表明，慢性肾功能衰竭大鼠模型制备成功。
37.试验2：爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用
38.给药4w后，测定正常组、模型组、阳性组和爬沙虫提取物组大鼠饮水量和尿量，其结果见表3；股动脉取血，测定大鼠血清肌酐、尿素氮含量，剥离肾脏，称重，计算肾脏系数，其结果见表4，且大鼠肾脏外观形态见图2。图2中，a为正常组，b为模型组，c为阳性组，d为爬沙虫提取物组。
39.表3爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠饮水量、尿量的影响
40.组别饮水量(ml/只)尿量(ml/只)正常组45.50
±
8.4814.42
±
2.20模型组62.15
±
4.03
*
45.48
±
3.02
*
阳性组42.73
±
2.86
#
21.47
±
3.73
##
爬沙虫提取物组38.75
±
2.83
#
21.52
±
2.53
##
41.注：*与正常组比较，p＜0.05；#与模型组比较，p＜0.05；##与模型组比较，p＜0.05。
42.表4爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠血清肌酐、尿素氮水平及肾脏系数的影响
43.组别肌酐(umol/l)尿素氮(umol/l)肾脏系数正常组134.70
±
9.487.86
±
1.270.57
±
0.04模型组188.52
±
13.03
**
18.77
±
2.95
**
1.06
±
0.18
**
阳性组128.83
±
12.53
##
3.89
±
0.55
##
0.76
±
0.12
##
爬沙虫提取物组128.27
±
9.79
##
8.27
±
1.54
##
0.77
±
0.08
##
44.注：**与正常组比较，p＜0.01；##与模型组比较，p＜0.01。
45.由表3可知，与模型组相比，阳性组和爬沙虫提取物组均能降低大鼠饮水量、尿量
(p＜0.05)。
46.由表4可知，与模型组相比，阳性组和爬沙虫提取物组均能降低血清肌酐、尿素氮含量(p＜0.01)，减小肾脏系数p＜0.01)；由图2可知，肾脏外观形态较模型组有明显改善，见图2。
47.并获取各组大鼠的肾脏病理切片，如图3所示。
48.由图3可知，正常组肾实质为浅层皮质和深层髓质；肾小球毛细血管清晰，结构未见明显改变；肾小管数量丰富，排列紧密；间质无明显增生；未见明显的炎性改变。模型组肾小管可见大量咖啡色腺嘌呤代谢物结晶，部分被巨噬细胞及多核巨细胞包裹；较多肾小管扩张，管腔形状不规则，上皮扁平化；偶见肾小管上皮细胞水肿，胞质淡染或呈空泡状；偶见肾小管管腔内充满嗜酸性蛋白样液，形成蛋白管型。阳性组及爬沙虫提取物组相对于模型组病变程度明显改善。因此，爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠具有显著治疗作用。
49.给药4w后，股动脉取血，测定各组大鼠血清促肾上腺皮质激素释放激素(crh)、促肾上腺皮质激素(acth)、环磷酸腺苷(camp)、醛固酮(ald)含量，其结果见表5。
50.表5爬沙虫提取物对慢性肾功能衰竭大鼠血清crh、acth、camp、ald水平的影响
51.组别crh(ng/ml)acth(pg/ml)camp(ng/ml)ald(pg/ml)正常组2.30
±
0.4693.80
±
8.908.31
±
0.43225.31
±
17.41模型组1.54
±
0.16
**
42.70
±
6.98
**
6.52
±
0.43
**
122.83
±
9.04
**
阳性组2.53
±
0.41
##
89.35
±
7.25
##
10.20
±
1.20
##
182.41
±
36.00
##
爬沙虫提取物组2.43
±
0.38
##
83.54
±
6.23
##
8.16
±
0.61
##
172.66
±
31.16
##
52.注：**与正常组比较，p＜0.01；##与模型组比较，p＜0.01。
53.研究表明，慢性肾功能衰竭出现的多饮、多尿等症状与下丘脑
‑
垂体
‑
肾上腺皮质系统功能低下密切相关。慢性肾功能衰竭会导致下丘脑
‑
垂体
‑
肾上腺皮质系统受到抑制，具体表现为下丘脑crh的合成和释放减少，进而引起垂体分泌acth减少，acth减少一方面可直接使肾上腺皮质分泌的ald减少导致多饮、多尿；另一方面，acth减少会抑制肾上腺皮质细胞膜上腺苷酸环化酶(ac)，降低camp生成，camp含量的减少会抑制其与细胞内ca
2
的协同作用，增加k

内流，进而抑制ald的分泌，导致多饮、多尿。由表5可知，与模型组相比，阳性组和爬沙虫提取物组均能升高大鼠血清促肾上腺皮质激素释放激素(crh)、促肾上腺皮质激素(acth)、环磷酸腺苷(camp)、醛固酮(ald)含量(p＜0.01)。因此，爬沙虫对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用可能是通过提高下丘脑
‑
垂体
‑
肾上腺皮质系统功能实现的。
54.虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了详细地描述，但不应理解为对本专利的保护范围的限定。在权利要求书所描述的范围内，本领域技术人员不经创造性劳动即可作出的各种修改和变形仍属本专利的保护范围。