一种多分散液滴数字核酸检测方法及其应用

技术特征：
1.一种多分散液滴数字核酸检测方法，包括如下步骤：将油相溶液、检测样品和检测试剂混合孵育后，根据阳性液滴的数量和体积，定量检测样品中的目标核酸分子。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测试剂为恒温扩增检测试剂，所述恒温扩增检测试剂包括引物、酶、显色液、dntp。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测试剂为crispr-cas反应体系试剂，所述crispr-cas反应体系试剂包括cas蛋白、crrna。4.根据权利要求1～3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述油相溶液包括氟油、碳油。5.根据权利要求1～3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述油相溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂包括span 80、tween 20、abil em90、abil em180。6.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，通过如下式(1)～(4)中的至少一个定量计算目标核酸分子，个定量计算目标核酸分子，个定量计算目标核酸分子，个定量计算目标核酸分子，其中，各式中，n代表液滴总数，b代表阴性液滴总数，v代表液滴的体积，λ代表待测样品的浓度，p表示阳性液滴的概率，m代表液滴尺寸种类，x代表阳性液滴尺寸种类，n
i
代表某一体积液滴的总数，b
i
代表某一体积液滴中阴性的总数，v
i
代表某一液滴的体积，v
j
代表体积唯一化后的液滴体积。7.根据权利要求1～3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括在油相溶液、检测样品和检测试剂混合后进行分散，所述分散包括振荡分散、吹吸分散、搅拌分散、超声分散。8.根据要求7所述的检测方法，其特征在于，振荡频率为2000-2500rpm，振荡时间为1-5s，吹吸次数为4-7次。9.一种计算机可读存储介质，其特征在于，所述计算机可读存储介质存储有计算机可执行指令，用于执行权利要求1～8中所述检测方法。10.一种核酸检测系统，其特征在于，所述系统中输入有权利要求1～8所述的检测方法。

技术总结
本发明公开了一种多分散液滴数字核酸检测方法及其应用，包括如下步骤：将油相溶液、检测样品和检测试剂混合，通过简单方法生成液滴并孵育后，根据阳性液滴的数量与体积，定量检测样品中的目标核酸分子。该方法通过简易的分散操作快速地将反应试剂分割成独立的液滴，从而降低了对环境以及仪器的要求，同时，也使样品和检测试剂的需求量得到的显著的下降。而且通过快速的乳液分割，有效地避免在试剂分割之前进行的核酸扩增或Cas蛋白对靶标的切割，并基于液滴尺寸计算目标核酸浓度，检测灵敏度可达到aM水平。达到aM水平。


技术研发人员：王佳思 薛莹莹 王珂 周建华
受保护的技术使用者：中山大学
技术研发日：2022.05.05
技术公布日：2022/7/15