促进甜菜的再生和转化的制作方法

技术特征：
1.一种促进甜菜(beta vulgaris)的体细胞胚发生或器官发生的方法，包括以下步骤：(a1)(a)从至少一个甜菜植物细胞诱导愈伤组织形成，和(b)将包含选自以下的编码核苷酸序列的表达盒引入到步骤(a)中使用的至少一个植物细胞或在步骤(a)中获得的愈伤组织的至少一个细胞中：(i)seq id no:1的核苷酸序列，或与seq id no:1的序列至少80％相同的序列；和(ii)编码多肽的核苷酸序列，所述多肽具有seq id no:2的氨基酸序列或与seq id no:2的序列至少80％相同的序列，其中所述核苷酸序列可操作地连接到异源组成型调节元件或异源诱导型调节元件；或(a2)提供外植体，其来自甜菜植物的组织并且包含至少一个细胞，所述细胞包含具有选自以下编码核苷酸序列的表达盒：(i)seq id no:1的核苷酸序列或与seq id no:1的序列至少80％相同的序列；和(ii)编码多肽的核苷酸序列，所述多肽具有seq id no:2的氨基酸序列或与seq id no:2的序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述核苷酸序列可操作地连接到异源组成型调节元件；或(a3)提供外植体，其来自甜菜植物的组织并且包含至少一个细胞，所述细胞包含具有选自以下编码核苷酸序列的表达盒：(i)seq id no:1的核苷酸序列或与seq id no:1的序列至少80％相同的序列；和(ii)编码多肽的核苷酸序列，所述多肽具有seq id no:2的氨基酸序列或与seq id no:2的序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述核苷酸序列可操作地连接到异源诱导型调节元件；和(b1)在促进从所述愈伤组织中生长出胚和/或枝芽的条件下培养步骤(a1)中获得的愈伤组织，其中在所述愈伤组织中，所述多肽从所述表达盒组成型表达或在异源诱导型表达系统的诱导时从所述表达盒表达；或(b2)在促进从外植体中生长出胚的条件下培养步骤(a2)的外植体，其中在所述外植体中，所述多肽从所述表达盒组成型表达；或(b3)在促进从外植体中生长出枝芽的条件下培养步骤(a3)的外植体，其中在所述外植体中，所述多肽在异源诱导型表达系统诱导时从所述表达盒表达。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述异源组成型调节元件是组成型启动子。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述异源诱导型调节元件是诱导型启动子或诱导型表达系统。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在步骤(b1)和(b2)中，胚从所述愈伤组织或外植体直接生长。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在步骤(b1)和(b3)中，枝芽从所述愈伤组织或外植体直接生长。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中步骤(a1)的所述至少一个甜菜植物细胞是体细胞或胚细胞，并且优选是分离自植物的外植体或其一部分。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中步骤(a2)或(a3)的外植体获得自叶组织、下胚轴组织、花组织、枝芽组织、茎尖分生组织或根尖组织。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在步骤(a1)(b)中，引入所述表达盒导
致其稳定整合到所述至少一个植物细胞的基因组中或其后代细胞中；和/或其中步骤(a2)和/或(a3)的至少一个植物细胞中的表达盒稳定地整合到所述至少一个植物细胞的基因组中或其后代细胞中。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(b1)、(b2)和/或(b3)中的培养在不含植物激素的培养基中进行。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，还包括步骤(c1)将至少一个感兴趣的核苷酸序列引入到步骤(a1)(a)中使用的所述至少一个植物细胞或其前体中；引入到步骤(al)(a)中获得的愈伤组织的至少一个细胞中，其自身或其后代随后用于步骤(a1)(b)中或已经用于步骤(a1)(b)中；引入到步骤(a2)或(a3)的至少一个植物细胞中，和/或(c2)修饰步骤(a1)(a)中使用的至少一个植物细胞或其前体的基因组，修饰步骤(a1)(a)中获得的愈伤组织的至少一个细胞的基因组，其自身或其后代随后用于步骤(a1)(b)中或已经用于步骤(a1)(b)中，修饰步骤(a2)或(a3)的至少一个植物细胞的基因组，通过在所述细胞中引入单链dna断裂(ssb)诱导酶或双链dna断裂(dsb)诱导酶，所述酶优选识别所述细胞基因组中预定位点，和任选存在的修复核酸分子，或者引入单链dna断裂(ssb)诱导酶，所述酶优选识别所述细胞基因组中预定位点并与碱基编辑器酶融合，其中所述基因组修饰选自：i.至少一个核苷酸的置换；ii.至少一个核苷酸的缺失；iii.至少一个核苷酸的插入；或iv.i.至iii.的任何组合。11.产生甜菜植物的方法，包括根据权利要求1至9中任一项的方法的体细胞胚发生或器官发生，任选地根据权利要求10(c1)或(c2)的转化或基因组修饰，以及从权利要求1至9中任一项方法的步骤(b1)、(b2)或(b3)获得的胚和/或枝芽中再生甜菜植物，特别是从权利要求10的方法的步骤(c1)获得的转基因植物和/或权利要求10的方法的步骤(c2)获得的修饰的植物。12.通过权利要求11的方法获得或可获得的转基因甜菜植物或其后代植物。13.通过权利要求11的方法获得或可获得的修饰的甜菜植物或其后代植物。14.根据权利要求12所述的植物的植物细胞或种子，其中所述植物细胞或种子包含作为转基因的至少一个感兴趣的核苷酸序列。15.根据权利要求13所述的植物的植物细胞或种子，其中所述植物细胞或种子包含基因组中的修饰。

技术总结
本发明涉及植物再生和体细胞胚发生诱导的技术领域，优选在甜菜和玉米中的植物再生和体细胞胚发生诱导。体细胞胚发生诱导。


技术研发人员：孔吉祥 S
受保护的技术使用者：瓦赫宁恩研究基金会
技术研发日：2021.12.22
技术公布日：2023/9/13