制剂的制作方法

本发明涉及药物制剂领域。更具体地，本发明涉及包含抗tg2抗体的液体制剂和生产这样的制剂的方法。根据本发明的液体制剂在约2至25℃的温度储存适当时段后是稳定的。

背景技术：

1、组织转谷氨酰胺酶(tg2)是一种通过ε(γ-谷氨酰)赖氨酸桥在蛋白质之间形成交联的酶。tg2的增多表达导致与多种病理相关的异常的蛋白质交联，包括各种类型的组织瘢痕、在若干大脑疾病中的神经纤维纠缠的形成以及在一些癌症中对化疗的抗药性。已经公开了各种tg2抑制剂，如小分子、沉默rna或抗体(例如，wo2006100679、wo2012146901或wo2013175229)用于tg2介导的疾病的可能治疗。

2、尽管文献中已描述了针对tg2的抗体，但迄今为止尚未提出稳定的制剂。

3、当制备包含生物活性蛋白质(如抗体)的药物组合物时，所述组合物必须以使得蛋白质在适当时段内稳定的方式调配。蛋白质的活性/稳定性的损失可能是由于蛋白质的化学或物理不稳定性所引起，特别是由于变性、聚集或氧化。因此，所得产物可能是药学上不可接受的。尽管已知使用(一种或多种)赋形剂来提高给定蛋白质的稳定性，但这些赋形剂的稳定作用高度依赖于赋形剂的和生物活性蛋白质本身的特性。

4、仍然需要含有抗tg2抗体作为活性成分的制剂，其中所述制剂在适当时段内是稳定的并且适合用于注射，如用于静脉内或皮下注射。所述制剂可以用于在tg2介导的病症或疾病的治疗中施用。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供含有抗tg2抗体的新型制剂。更具体地，所述制剂是含有抗tg2抗体，优选高浓度的稳定的液体制剂。本发明还提供了用于制备根据本发明的液体制剂的方法。本文中描述的液体制剂可以用于在tg2介导病症或疾病的治疗中施用。

2、在第一方面，本发明提供了稳定的液体制剂，其包含或由以下组成：抗tg2抗体、将ph保持在5.0至6.0或约5.0至6.0的缓冲剂、氨基酸稳定剂和任选的聚山梨醇酯表面活性剂。在优选的实施方案中，缓冲剂是组氨酸，和氨基酸是精氨酸或精氨酸盐(如精氨酸hcl)。在另一优选的实施方案中，缓冲剂将ph保持在5.5或约5.5(如5.5±0.2)。在另一优选的实施方案中，抗tg2抗体的量为50mg/ml至300mg/ml或约50mg/ml至约300mg/ml。优选地，抗tg2抗体包含如seq id no:1中定义的轻链可变区和如seq id no:2中定义的重链可变区。

3、在第二方面，本发明提供了用于制备抗tg2抗体的稳定的液体制剂的方法，其包括以下步骤：形成抗tg2抗体的连同缓冲剂、氨基酸稳定剂和任选的聚山梨醇酯表面活性剂的混合物。在优选的实施方案中，缓冲剂是组氨酸，和氨基酸是精氨酸或精氨酸盐(如精氨酸hcl)。在另一优选的实施方案中，缓冲剂将ph保持在5.0至6.0或约5.0至6.0(如5.5±0.2)。在另一优选的实施方案中，抗tg2抗体的量为50mg/ml至300mg/ml或约50mg/ml至约300mg/ml。优选地，抗tg2抗体包含如seq id no:1中定义的轻链可变区和如seq id no:2中定义的重链可变区。

4、在第三方面，本文提供了用于药学或兽医学用途的制造品，其包括包含根据本发明的稳定的液体制剂的容器。

5、在第四方面，本发明提供了根据本发明的稳定的液体制剂，其用于治疗。

6、在第五方面，本发明提供了通过施用根据本发明的稳定的液体制剂来治疗疾病或病症的方法。

7、定义

8、-术语“约”意指大约或接近，并且在本文中所阐述数值的上下文中，优选地指定所记载或要求保护的数值周围的+/-10％。

9、-当记载或要求保护值的范围时，该范围旨在包括所记载的值。

10、-如本文中使用的术语“抗tg2抗体”旨在为结合组织谷氨酰胺转胺酶(tg2)蛋白质的抗体分子，tg2蛋白质是通过ε(γ-谷氨酰)赖氨酸桥在蛋白质之间形成交联的酶。wo2013175229中描述了这样的抗体的实例。不受任何限制，根据本发明可以使用的抗tg2抗体包括例如seq id no:1中定义的轻链可变区和seq id no:2中定义的重链可变区。

11、-如本文中使用的术语“抗体”包括但不限于，单克隆抗体、多克隆抗体和由本领域已知的重组技术产生的重组抗体。“抗体”包括任何物种，特别是哺乳动物物种的抗体；如任何同种型的人抗体，包括igg1、igg2a、igg2b、igg3、igg4、ige、igd和作为该基本结构的二聚体产生的抗体，包括igga1、igga2，或五聚体，如igm及其经修饰的变体；非人灵长类抗体，例如来自黑猩猩、狒狒、恒河猴或食蟹猴的抗体；啮齿类抗体，例如来自小鼠或大鼠的抗体；兔、山羊或马的抗体；骆驼科抗体(例如来自骆驼或美洲驼，如nanobodiestm)及其衍生物；鸟类抗体如鸡抗体；或鱼类抗体，例如鲨鱼抗体。术语“抗体”还指“嵌合”抗体，其中至少一个重链和/或轻链抗体序列的第一部分来自第一个物种，和重链和/或轻链抗体序列的第二部分来自第二个物种。本文中感兴趣的嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其包括源自非人灵长类动物(例如旧大陆猴，如狒狒、恒河猴或食蟹猴)的可变区抗原结合序列和人恒定区序列。“人源化”抗体是含有源自非人抗体的序列的嵌合抗体。在大多数情况下，人源化抗体是人抗体(受体抗体)，其中来自受体高变区的残基被来自非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠、兔、鸡或非人灵长类动物的高变区[或互补决定区(cdr)]的残基所取代，具有期望的特异性、亲和性及活性。在大多数情况下，在cdr外部(即在框架区(fr)中)的人(受体)抗体的残基另外被相应的非人残基取代。此外，人源化抗体可以包含未发现于受体抗体中或供体抗体中的残基。进行这些修饰以进一步完善抗体性质。人源化降低了非人抗体在人类中的免疫原性，从而促进了抗体在人类疾病治疗中的应用。人源化抗体和产生它们的若干不同技术在本领域中是众所周知的。术语“抗体”也指人抗体，其可作为人源化的替代产生。例如，有可能产生能够在没有产生内源性鼠抗体的情况下，在免疫后产生完整的人抗体库的转基因动物(例如小鼠)。体外获得人抗体/抗体片段的其他方法基于展示技术如噬菌体展示或核糖体展示技术，其中使用至少部分人工产生或来自供体的免疫球蛋白可变(v)区基因库的重组dna文库。用于产生人抗体的噬菌体及核糖体展示技术是本领域中众所周知的。人抗体也可以从分离的人类b细胞中产生，该b细胞用感兴趣的抗原进行离体免疫，且随后进行融合以产生杂交瘤，然后可以将其针对最佳人抗体进行筛选。术语“抗体”是指糖基化和无糖基化抗体二者。此外，如本文中使用的术语“抗体”不仅指全长抗体，而且还指抗体片段，更具体地是指其抗原结合片段。抗体的片段包含至少一个本领域已知的重链或轻链免疫球蛋白域，并与一种或多种抗原结合。根据本发明的抗体片段的实例包括fab、经修饰的fab、fab'、经修饰的fab'、f(ab')2、fv、fab-fv、fab-dsfv、fab-fv-fv、scfv和bis-scfv片段。所述片段还可以是双抗小分子抗体(diabody)、三价抗体(tribody)、三链抗体(triabody)、四链抗体(tetrabody)、微型抗体(minibody)、单域抗体(dab)如sdab、vl、vh、vhh或骆驼科抗体(例如来自骆驼或美洲驼，如nanobodytm)和vnar片段。根据本发明的抗原结合片段还可以包含连接到一个或两个scfv或dsscfv的fab，每个scfv或dsscfv结合相同或不同的靶标(例如，一个scfv或dsscfv结合治疗靶标和一个scfv或dsscfv通过结合，例如白蛋白来增加半衰期)。这样的抗体片段的实例为fabdsscfv(也称为)或fab-(dsscfv)2(也称为例如参见wo2015/197772)。本领域已知如上定义的抗体分子，包括其抗原结合片段。

12、-如本文中使用的术语“稳定性”是指根据本发明的抗tg2抗体制剂的物理、化学及构象稳定性(并且包括生物学效力的维持)。所述抗体制剂的不稳定性可能由抗体的化学降解或聚集形成较高阶聚合物、去糖基化、糖基化修饰、氧化或降低抗体的至少一种生物活性的任何其他结构修饰所引起。

13、-术语“稳定的制剂”是指其中感兴趣的蛋白质(本文中的抗tg2抗体)在储存时基本上保留其物理、化学及生物学性质的制剂。为了测量制剂中抗体的稳定性，各种分析方法均完全属于技术人员的知识范围内(参见实施例部分中的一些实例)。典型地在选定的温度(例如≤-60℃、2-8℃、25℃、35℃或更高)、选定的时段(例如，3个月、6个月、12个月或更长)评估稳定性。作为抗体，一旦配制，就典型地储存在冰箱(典型地为2-8℃)中或在室温(典型地为15-25℃)，然后施用至患者，重要的是，所述配制的抗体至少在2至25℃的温度范围(如本文所示，例如在2-8℃和25℃)随时间流逝是稳定的。可以使用各种值来总结经给定时段的稳定性，如(并且不限于)：1)不小于90％的抗体的单体形式、2)不大于10％的抗体单体形式的改变(与初始数据相比)、3)不大于5％的高分子量物类(hmw或hmws；在本文中也称为聚集体)、或4)不大于+/-0.2单位的ph变化(与初始数据相比)。

14、-如本文中使用的术语“缓冲剂”是指已知在药学或兽医学用途的制剂中安全的化合物溶液，且其具有将制剂的ph维持或控制在制剂所期望的ph范围内的效果。用于将ph控制在中等酸性ph至中等碱性ph的可接受的缓冲剂包括但不限于，磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、精氨酸、组氨酸和tris(2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇，该术语包括其任何药理学上可接受的盐)缓冲剂。

15、-如本文中使用的术语“表面活性剂”是指可溶性化合物，其可以尤其用于提高疏水性、油性物质的水溶性或以其他方式提高具有不同疏水性的两种物质的混溶性。出于该原因，这些聚合物通常用于工业应用、化妆品和药物中。它们也被用作药物递送应用的模型系统，尤其是为了改变药物的吸收或其到靶标组织的递送。熟知的表面活性剂包括聚山梨醇酯类(聚氧乙烯衍生物；吐温)和泊洛沙姆(即基于氧化乙烯和氧化丙烯的共聚物，也称为)。

16、-本文所使用的术语“稳定化试剂”、“稳定剂”或“等张剂(isotonicity agent)”是生理学耐受并赋予制剂适当的稳定性/张力的化合物。它尤其防止了水跨越与制剂接触的细胞膜的净流动。化合物如甘油通常用于这样的目的。其他合适的稳定性试剂包括但不限于，氨基酸或蛋白质(例如甘氨酸或白蛋白)、盐(例如氯化钠)和糖(例如右旋糖、甘露醇、蔗糖和乳糖)。

17、-如本文中使用的术语“小瓶”或“容器”广义上是指适合以液体形式保留抗tg2抗体制剂的储器。可以用于本发明中的小瓶的实例包括安瓿、管、瓶、注射器(如预填充注射器)、药筒或其他这样的适合于通过注射，优选通过静脉内或皮下注射来将抗tg2抗体制剂递送至患者的储器。

18、-如本文中使用的术语“溶剂”是指水性或非水的液体溶剂。溶剂的选择尤其取决于药物化合物在所述溶剂中的溶解度和施用方式。水性溶剂可以仅由水组成，或可以由水加上一或多种可混溶的溶剂组成，并且可以含有溶解的溶质，如糖、缓冲剂、盐或其他赋形剂。更常用的非水溶性溶剂是短链有机醇如甲醇、乙醇、丙醇，短链酮如丙酮和多元醇如甘油。根据本发明，优选的溶剂是水性溶剂如水或盐水溶剂。

19、-疾病状态的术语“治疗(treating/treatment)”包括：(i)抑制疾病状态，即阻止疾病状态或其临床症状的发展，或(ii)缓解疾病状态，即致使疾病状态或其临床症状的暂时性或永久性消退。

20、-疾病状态的术语“预防(preventing/prevention)”包括使受试者不发展疾病状态的临床症状，该受试者可能暴露于或易患该疾病状态，但尚未经历或显示疾病状态的症状。

21、-在本发明的所有实施方案中，“药物组合物”也可被称为“稳定的药物组合物”，而无任何区别。