一种山药多糖、其制备方法及应用

本发明属于医药，涉及一种山药多糖、其制备方法及应用。

背景技术：

1、山药是一种常用的药食两用中药，富含薯蓣皂苷、尿囊素、氨基酸、蛋白质、多糖等多种有效成分。以往的研究证实，植物多糖不仅是能量资源，而且在许多生命过程中发挥着关键作用，如具有抗炎、抗肿瘤、抗补体、抗凝血、抗氧化和免疫调节等多种药理作用。山药多糖被认为是山药的主要功能成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎、免疫调节、降血糖等生物活性。例如，有研究表明，在tnf-ɑ诱导的胰岛素抵抗细胞模型中，山药粗多糖能有效增加细胞的葡萄糖摄取和葡萄糖转运体(glut2)的表达，同时刺激胰岛素受体底物(irs)的酪氨酸磷酸化，增加p-akt水平，从而缓解胰岛素抵抗。目前，已分离、纯化出多种不同分子量、不同单糖组成、不同酸碱性等特征的山药多糖。如，zhao等采用四种不同的方法，纯化得到分子量和糖醛酸含量均有明显差异的4种山药多糖(uae、cwe、wwe和hwe)，其中分子量较低、糖醛酸含量较高的山药多糖具有较强的抗氧化活性。由此可见，山药多糖的结构和性质因提取方法的不同而存在一定的差异(zhao c,xia l,jing m,et al.the effect ofdifferent extraction techniques on property and bioactivity ofpolysaccharides from dioscorea hemsleyi[j].international journal ofbiological macromolecules,2017,102:847-856.)。此外，从来源不同的山药或采用不同的分离纯化方法制备的山药多糖在结构和功效方面多少也存在一些差异。

2、溃疡性结肠炎(uc)是一种慢性且具有复发性的胃肠道炎症性疾病，发病率逐年上升，严重影响患者的生活质量。致病因素的多样性以及病理作用机制的复杂性，使得uc的治疗变得棘手。大量的临床病例揭示了粘膜愈合与患者良好预后之间的紧密联系，粘膜愈合正逐渐成为溃疡性结肠炎(uc)等肠道疾病的一个治疗终点。目前，在临床上治疗uc的目标正在从患者达到临床缓解向实现患者粘膜愈合转变。多种常规疗法包括5-氨基水杨酸盐、硫锉嘌呤、抗tnf-ɑ单抗药物等均对粘膜愈合起到一定的作用，但这些药物只能短暂的诱导或维持缓解，45％左右的患者仍需手术治疗干预，部分患者甚至由于药物副作用而发生并发症。因此，寻找安全有效的治疗uc的替代药物尤为重要。

技术实现思路

1、本发明的一个目的在于提供一种山药多糖及其制备方法，以解决上述技术问题中的至少一个。

2、本发明的另一个目的在于提供上述山药多糖在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。

3、根据本发明的另一个方面，提供了一种山药多糖，其制备方法包括如下步骤：

4、s1：预处理：取山药粗多糖进行脱脂、脱色素和脱蛋白处理，将处理后得到的多糖水溶液进行透析处理，干燥，得山药粗多糖ⅲ；

5、s2：阴离子交换柱层析分离：将山药粗多糖ⅲ配制成山药粗多糖ⅲ水溶液，然后用阴离子交换柱分离，收集用0.05m氯化钠洗脱得到的洗脱液，干燥，即得山药多糖。

6、通过本发明提供的分离方法可从山药粗多糖中分离出一种山药多糖。本发明提供的山药多糖由1,4和1,3或其他糖苷键连接形式的d-glcp残基组成。

7、在一些实施方式中红，步骤s2中，在对收集到洗脱液进行干燥前，还包括对洗脱液进行纯化的步骤，具体的纯化方法可以为：将洗脱液进行透析处理。在一些实施方式中，进行透析处理时，截留分子量为3500da。

8、在一些实施方式中，步骤s1中，取山药粗多糖进行脱脂、脱色素和脱蛋白处理可以包括如下步骤：

9、(1)取山药粗多糖用由甲醇和氯仿按体积比8:1混合得到的溶剂在温度为80℃的条件下回流提取24h，除去溶剂，干燥，即得山药粗多糖i；山药粗多糖和混合溶剂的料液比为1:(5-12)g/ml；

10、(2)将山药粗多糖i用质量分数不小于95％的乙醇回流提取3次，每次60min，除去乙醇，干燥，即得山药粗多糖ii；山药粗多糖i和乙醇的料液比为1:10g/ml；

11、(3)山药粗多糖ii采用sevag法进行脱蛋白，得多糖水溶液。

12、在一些实施方式中，山药粗多糖和溶剂的料液比可以为1:10g/ml。脱脂试剂加入量的多少，直接影响脱脂的效果。过少，脱脂不完全，过多，造成试剂的浪费。

13、在一些实施方式中，用95％的乙醇对山药粗多糖i进行回流提取。用于对山药粗多糖i进行回流提取的乙醇的质量分数小于95％，可能会导致色素的脱除不完全，以及造成一些低分子量多糖的损失。

14、在一些实施方式中，通过sevag法对山药粗多糖ii进行脱蛋白的方法具体可以为：将山药粗多糖ii配制成50mg/ml的水溶液，按体积比5:1加入由氯仿和正丁醇按体积比4:1混合得到的混合液，混匀后离心取上层多糖水溶液重复上述步骤，直至蛋白层不明显。

15、山药粗多糖进行脱脂、脱色素和脱蛋白处理后，得到的产物溶解度较差，杂质含量仍然较多，需要进一步进行透析处理。在一些实施方式中，步骤s1中，透析处理具体可以为：利用截留分子量为3500da的透析袋对多糖水溶液进行透析处理。

16、在一些实施方式中，阴离子交换柱可以选用deae sephadex fast flow。

17、在一些实施方式中，步骤s2中，山药多糖ⅲ水溶液的浓度可以为100-150mg/ml。用deae sephadex fast flow(1.6cm×16cm)阴离子交换柱分离山药多糖ⅲ时，上样量低于100mg/ml，影响效率，上样量大于150mg/ml，可能会导致分离不完全。

18、在构建的小鼠溃疡性结肠炎粘膜恢复模型中，本发明提供的山药多糖能明显改善dss导致的小鼠体重下降、结肠缩短、粘膜组织损伤、炎性浸润、隐窝结构紊乱或破坏等症状，降低dai指数，使其趋于正常。此外，本发明提供的山药多糖能在一定程度上能提高小鼠血浆中的tnf-ɑ水平，逆转dss导致的结肠组织中tnf-ɑ、il-1β、il-6、tgf-1β、mmp-9、plaur基因表达水平的降低，通过下调dss诱导的cleaved-caspase-3蛋白表达来抑制肠上皮细胞凋亡等，通过调控多种细胞因子、生长因子、抑制肠上皮细胞凋亡，重构紧密连接完整性等途径促进dss诱导的小鼠溃疡性结肠炎粘膜损伤修复。同时，体外实验表明，其具有明显的免疫调节作用。

19、因此，本发明提供的山药多糖或包含本发明提供的山药多糖以及药学上可接受的一种或多种辅料的药物组合物，可用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物。

技术特征：

1.山药多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s2中，干燥前，还包括如下步骤：将洗脱液进行透析处理。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述取山药粗多糖进行脱脂、脱色素和脱蛋白处理包括如下步骤：

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述透析处理中，截留分子量为3500da。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述山药粗多糖ⅲ水溶液的浓度为100-150mg/ml。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述阴离子交换柱为deae sephadexfast flow。

7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法制得的山药多糖。

8.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求7所述的山药多糖以及药学上可接受的一种或多种辅料。

9.权利要求7所述的山药多糖或权利要求8所述的药物组合物在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。

技术总结本发明公开一种山药多糖、其制备方法及应用。本发明通过对山药粗多糖依次进行脱脂、脱色素、脱蛋白、透析处理后，用阴离子交换柱进行分离，收集用0.05M氯化钠洗脱得到的洗脱液，干燥，得到一种山药多糖。动物实验结果表明，在构建的小鼠溃疡性结肠炎粘膜恢复模型中，本发明提供的山药多糖可能通过调控多种细胞因子、生长因子、抑制肠上皮细胞凋亡等途径促进DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎粘膜损伤修复。同时，体外细胞实验表明，其具有明显的免疫调节作用。本发明提供的山药多糖可用于治疗溃疡性结肠炎。技术研发人员：果德安,刘博,吴云山,郑作亮,钟瑜萍,陈伟英,徐方方,梁微红,李建龙,钟金浪受保护的技术使用者：广东省中医院（广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院）技术研发日：技术公布日：2024/6/13