一种细胞离心分离方法与流程

本发明涉及细胞分离，尤其涉及一种细胞离心分离方法。

背景技术：

1、pbmc是外周血单个核细胞，人外周血中包含淋巴细胞、单核细胞、树突状细胞和其它少量细胞，通过对pbmc的分离、筛选、培养，可获得大量的免疫细胞用于细胞治疗，而传统的pbmc分离方式主要是在洁净环境下通过科研人员采用离心管和离心机进行手工分离，对操作人员的技术水平提出了较高的要求，且效率低下，开放式的操作带来极大的污染风险，同时产品质量存在人为因素影响而导致的参差不齐。

2、也有一种通过驱动离心杯旋转分离的方式，离心杯的底部内腔呈圆锥空间，在离心力的作用下，样本中的目的细胞向锥底沉降。但是，目的细胞在离心分离过程中，直接挤压在杯壁上，容易造成细胞变形、损伤等，从而使得收集目的细胞的得率低、浓缩体积小。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种能够减少细胞损伤以及使得收集目的细胞的得率高、浓缩体积大的细胞离心分离方法。

2、为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

3、作为上述技术方案的进一步改进：

4、所述步骤s2与步骤s3之间设有步骤s21和步骤s22，所述s21为排出上清液：离心速度下降到给定速度后，通过管道排出离心后的上清液；s22为吹打混匀：停止离心，通过管道对分离腔内剩余液体进行吹打混匀。

5、所述步骤s22与s3之间的s23、s24和s25，所述s23为通过管道向分离腔内加入缓冲液，所述s24为通过管道对分离腔内液体再次进行吹打混匀，所述s25为重复s2至s22。

6、所述s1中，分离腔中加满带目的细胞的细胞液，所述s23中，加入缓冲液的量使分离腔处于满载状态。

7、所述s2中离心分层后，沉降组分穿透隔离液层到分离腔的底部；然后，通过管道排出离心后的沉降组分。

8、所述分离腔呈锥形，所述分离腔的锥尖部设有收集腔。

9、所述管道包括延伸至收集腔的第一管体以及延伸至分离腔中部的第二管体。

10、所述离心容器包括离心杯和杯盖，所述分离腔形成于离心杯内，所述杯盖盖设有离心杯的开口处，所述离心杯设于旋转架上，所述离心杯和杯盖之间设有密封垫。

11、所述旋转架上设有可竖向旋转的摆动套，所述离心杯和杯盖均套设于摆动套内。

12、所述杯盖上设有透气膜，所述第一管体穿设于杯盖的中部，所述第二管体穿设于杯盖中并位于第一管体的一侧。

13、与现有技术相比，本发明的优点在于：

14、本发明的细胞离心分离方法，本细胞离心分离方法由于在离心分层前，在分离腔内加入带目的细胞的细胞液和隔离液，使隔离液在细胞液的下方形成隔离液层，这样在离心分层过程中，隔离液层垫于细胞液与分离腔的内壁之间，避免了目的细胞在离心分离过程中，直接挤压在分离腔的内壁上，从而大幅度降低细胞离心过程中对目的细胞造成的物理损伤，使得收集目的细胞的得率高、浓缩体积大。

技术特征：

1.一种细胞离心分离方法，其特征在于：包括旋转架和离心容器(2)，所述离心容器(2)可转动地设置在旋转架上，所述离心容器(2)内设有分离腔(3)以及延伸至分离腔(3)内的管道；所述细胞离心分离方法还包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述步骤s2与步骤s3之间设有步骤s21和步骤s22，所述s21为排出上清液：离心速度下降到给定速度后，通过管道排出离心后的上清液；s22为吹打混匀：停止离心，通过管道对分离腔(3)内剩余液体进行吹打混匀。

3.根据权利要求2所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述步骤s22与s3之间的s23、s24和s25，所述s23为通过管道向分离腔(3)内加入缓冲液，所述s24为通过管道对分离腔(3)内液体再次进行吹打混匀，所述s25为重复s2至s22。

4.根据权利要求3所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述s1中，分离腔(3)中加满带目的细胞的细胞液(7)，所述s23中，加入缓冲液的量使分离腔(3)处于满载状态。

5.根据权利要求1所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述s2中离心分层后，沉降组分(9)穿透隔离液层(8)到分离腔(3)的底部；然后，通过管道排出离心后的沉降组分(9)。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述分离腔(3)呈锥形，所述分离腔(3)的锥尖部设有收集腔(31)。

7.根据权利要求6所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述管道包括延伸至收集腔(31)的第一管体(4)以及延伸至分离腔(3)中部的第二管体(5)。

8.根据权利要求7所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述离心容器(2)包括离心杯(21)和杯盖(22)，所述分离腔(3)形成于离心杯(21)内，所述杯盖(22)盖设有离心杯(21)的开口处，所述离心杯(21)设于旋转架上，所述离心杯(21)和杯盖(22)之间设有密封垫(6)。

9.根据权利要求8所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述旋转架上设有可竖向旋转的摆动套(1)，所述离心杯(21)和杯盖(22)均套设于摆动套(1)内。

10.根据权利要求8所述的细胞离心分离方法，其特征在于：所述杯盖(22)上设有透气膜(221)，所述第一管体(4)穿设于杯盖(22)的中部，所述第二管体(5)穿设于杯盖(22)中并位于第一管体(4)的一侧。

技术总结本发明公开了一种细胞离心分离方法，包括旋转架和离心容器，离心容器可转动地设置在旋转架上，离心容器内设有分离腔以及延伸至分离腔内的管道；细胞离心分离方法还包括以下步骤：加目的细胞和隔离液：通过管道向离心容器的分离腔内加入带目的细胞的细胞液和隔离液，使隔离液在细胞液的下方形成隔离液层；离心分层：旋转架旋转，离心容器受离心力作用处于分离腔的锥尖部朝外的离心状态，细胞液在离心力作用下分离成上清液层和目的细胞层，目的细胞层位于上清液层与隔离液层之间；目的细胞取出：通过管道将分离腔内全部的目的细胞取出收集。本细胞离心分离方法具有能够减少细胞损伤以及使得收集目的细胞的得率高、浓缩体积大等优点。技术研发人员：胡璧梁,江宏伟,梁秋彬受保护的技术使用者：楚天思为康基因科技（长沙）有限公司技术研发日：技术公布日：2024/7/18