一种户尘螨特异性IgE抗体检测试剂盒的制作方法

本发明属于医学免疫体外诊断领域，具体涉及一种户尘螨特异性ige抗体检测试剂盒。

背景技术：

1、过敏性疾病又称变应性疾病，大多为免疫球蛋白e(immunoglobulin e，ige)介导的i型变态反应性疾病。过敏的发生可分为致敏和过敏两个阶段：致敏阶段，机体首次接触过敏原(又称变应原)，触发b细胞产生过敏原特异性ige抗体，此期间机体无任何异常反应；过敏阶段，当相同过敏原再次或多次进入致敏机体时，细胞表面的ige受体与特异性ige抗体结合，特异性ige抗体再与过敏原结合引起过敏原交联，导致肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒并释放一系列生物活性物质，引起过敏反应(又称变态反应，allergy)的疾病及相关症状，如过敏性哮喘、枯草热、荨麻疹、过敏性鼻炎、湿疹、结膜炎及胃肠道i型过敏性疾病及严重过敏反应等。

2、过敏性疾病的发病率日益增高，已成为全球关注的公共卫生问题，世界卫生组织(who)将其列为21世纪重点研究和防治的疾病。过敏性疾病的病情呈复杂化趋势，研究表明单一过敏的儿童超五成存在进展成多重过敏的可能性，早期发生食物过敏或特应性皮炎的儿童将来可能发生其他更加难治性的过敏性疾病。针对过敏性疾病，who提出“四位一体”疗法：避免接触过敏原，对症药物治疗，特异性免疫治疗，医生及患者教育。其中，避免接触过敏原是指在查明过敏原的基础上，做好环境防控，尽量避免接触过敏原。在过敏性疾病的治疗过程中很好地避免接触过敏原不仅可以降低患者发生过敏的概率，还可提高药物疗效，帮助患者尽快脱敏。特异性免疫治疗，即脱敏治疗，是唯一可影响过敏性疾病自然进程，改变免疫应答机制的“对因”疗法，其通过对患者使用逐渐增加剂量的过敏原，提高患者对该过敏原的耐受性，减轻由暴露于该过敏原而引发的症状，最终达到耐受乃至免疫耐受的目的。可见，明确过敏原是防治过敏性疾病的关键，避免接触过敏原并开展特异性免疫治疗都离不开过敏原诊断。

3、过敏原种类繁多，根据进入机体的途径可分为吸入性过敏原、食入性过敏原、接触性过敏原、输注性过敏原等。常见的吸入性过敏原如尘螨、花粉、真菌、动物皮屑等，常见的食入性过敏原如牛奶、鸡蛋、花生、小麦、大豆等，常见的接触性过敏原如橡胶、金属、油漆、化妆品、防腐剂、染料等，常见的输注性过敏原有青霉素、链霉素、生物制剂等，此外，还有很多通过其他途径进入机体的过敏原。过敏患者可能对单一过敏原过敏，也可能同时对多种过敏原过敏。

4、在众多的过敏原中，尘螨和蒿属花粉是较为常见的过敏原。尘螨种类繁多，广泛存在于人类生活和工作环境中，其排泄物、代谢物及螨体均具有较强的变应原性，据统计全球约10％的人口对尘螨过敏，中国过敏性鼻炎患者约80％由尘螨引起，尘螨过敏性哮喘约占哮喘总人数的70～80％，尘螨已成为诱发过敏性疾病的重要过敏原。尘螨变应原组成复杂，约有30余种，其中户尘螨(学名dermatophagoides pteronyssinus)和粉尘螨(学名dermatophagoides farinae)的i型变应原(der p 1、der f 1)和ii型变应原(der p 2、derf 2)是最主要的致敏组分。蒿属(genus artemisia)花粉在空气中含量高，持续产生时间长，是引起夏秋季(从7月初到9月底)花粉症的重要变应原之一，全球约有300种以上的蒿属植物，广泛分布于北半球温带、温寒带及亚热带地区。国内一项2008-2010年215210次变应原特异性ige检测结果显示，在吸入性变应原中，阳性率最高的为蒿花粉。杨琼梁等2015年研究结果表明中国北方地区最主要的致敏花粉为蒿属花粉。蒿属中的黄花蒿(学名artemisia annua)和艾蒿(学名artemisia vulgaris，又名北艾)是常见的花粉致敏植物，其i型变应原(art a 1、art v 1)和iii型变应原(art a 3、art v 3)是主要致敏组分。

5、通过过敏原检测可以筛查出引发过敏的物质，从而为过敏原的确诊提供依据，进行有针对性的预防和治疗。目前，临床上过敏原检测包括体内试验和体外试验两类。体内试验包括皮内试验、皮肤点刺试验、斑贴试验等。体内试验具有灵敏性和特异性较高的优势，但是过敏原直接接触皮肤或进入体内，存在诱发全身性反应的风险。此外，体内试验还需要在皮肤表面形成创伤或者长时间贴敷测试物，容易给患者带来身体痛苦或心理恐惧。体外试验包括血清总ige抗体检测、过敏原特异性ige抗体检测、特异性igg4抗体检测、嗜碱性粒细胞活化试验等。体外试验取患者血液进行离体检测，过敏原并不直接作用于人体，可避免体内试验带来的危害和痛苦。临床诊断和治疗过敏性疾病通常需要结合体内体外试验，并连同临床病史和临床表现综合判断，以确定过敏原和致敏程度。

6、由于ige抗体在过敏性疾病的发生和发展中起着关键作用，因此ige抗体检测对过敏性疾病的诊断具有非常重要的临床意义。血清总ige抗体检测通过检测血中ige抗体的总含量，初步判断患者是否存在i型过敏反应，当总ige抗体水平超过正常指标时，提示患者处于高敏状态，可能患有ige介导的过敏性疾病。但是总ige抗体检测并不能用于确诊过敏性疾病，除过敏性疾病之外，自身免疫病、免疫系统缺陷病、寄生虫和微生物感染等也可导致血清总ige抗体水平显著升高。此外，也存在过敏性疾病患者总ige抗体水平正常的情况。过敏原特异性ige检测通过检测患者血液中的过敏原特异性ige含量来确定过敏物质，对过敏性疾病的确诊更具参考意义。过敏原特异性ige检测还可进一步对过敏原组分，即致敏蛋白进行检测，实现精准诊断。过敏原特异性ige检测具有特异性好、安全性高、耗时短、基本无创、痛苦小的优点，在临床上被广泛应用。

7、临床上采用的体外检测人ige抗体的方法主要有放射过敏原吸附试验法(rast)、荧光酶免疫分析法(feia)、酶联免疫吸附法(elisa)、免疫印迹法(immunoblot)、化学发光免疫检测(clia)等。rast法是最早使用的过敏原检测方法，该方法需要使用放射性同位素，存在放射污染，现已基本不再使用。elisa法具有灵敏度高的优点，广泛应用于免疫分析领域，但是其重复性不好，特异性不高，干扰因素较多。feia在荧光免疫分析法(fia)的基础上引入酶标记技术，具有灵敏度高、特异性强和不受主观因素影响的优点，但是，荧光酶免疫分析法目前主要依靠国外进口试剂，价格昂贵且耗时长。免疫印迹法和酶联免疫吸附法都存在耗时长，操作步骤复杂，对人员操作要求较高等不足。

8、化学发光免疫检测法是近年快速发展的免疫检测法，应用于人ige抗体检测具有自动化程度高、检测快速，灵敏度、精确度及特异性高，安全无害，血清用量更少等优点。化学发光法按反应类型可分为直接化学发光、酶促化学发光。直接化学发光的发光剂不需要酶催化作用，直接参与发光反应，其在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体，目前常用的直接化学发光标记物主要有吖啶酯、三联吡啶钌等。酶促化学发光为间接发光，所使用的发光剂自身不带发光基团，需要利用酶物质进行催化发光，虽然有一定的灵敏度，但发光速度较慢，酶活性容易受外界干扰，其代表性的试剂有鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺等，激活酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶等。

9、过敏原特异性ige抗体检测尚无国际标准，不同厂家的检测试剂所使用的过敏原和抗ige抗体原料不同，结合到载体的方法和检测方法也不同，所以检测结果存在一定差异。采用feia法的immunocap系统(thermo fisher)与皮肤试验结果具有良好的相关性，因其准确地定量测定和可靠的重复性能等被业内视为ige抗体体外检测的“金标准”，常被用作方法学的比对。此外，由于ige抗体在血清中的含量非常低，现有检测试剂盒难以提供足够的灵敏度，尤其是检测微量的特异性ige抗体时，检测结果的准确性普遍不高，难以达到“金标准”的水平。

10、鉴于化学发光法人ige抗体检测的应用前景以及现有人ige抗体检测试剂盒存在的问题，临床上有待开发检测性能优异，操作简便，通量高，检测耗时短，适合于各种过敏原特异性ige检测且能够降低检测成本的化学发光人ige抗体检测方法和检测试剂盒。

技术实现思路

1、为解决上述人ige抗体检测所面临的问题，本发明提供一种重组抗人ige抗体和另一种重组抗人ige抗体，组合应用于化学发光法人ige抗体检测以提高检测性能；本发明还提供一种使用上述重组抗人ige抗体的化学发光法人ige抗体检测试剂盒，具有良好的检测性能和质控属性，适用于各种过敏原特异性ige抗体的定量检测。

2、本发明提供的第一种重组抗人ige抗体，其重链可变区各互补决定区的氨基酸序列为：

3、seq id no：6所示的cdr1，seq id no：8所示的cdr2，seq id no：10所示的cdr3；轻链可变区各互补决定区的氨基酸序列为：seq id no：12所示的cdr1，cdr2序列为kvs(k、v、s分别代表赖氨酸、缬氨酸、丝氨酸)，seq id no：14所示的cdr3。优选地，该重组抗人ige抗体的重链氨基酸序列为seq id no：16，轻链氨基酸序列为seq id no：18。

4、本发明提供的第二种重组抗人ige抗体，其重链可变区各互补决定区的氨基酸序列为：seq id no：5所示的cdr1，seq id no：7所示的cdr2，seq id no：9所示的cdr3；轻链可变区各互补决定区的氨基酸序列为：seq id no：11所示的cdr1，cdr2序列为ras(r、a、s分别代表精氨酸、丙氨酸、丝氨酸)，seq id no：13所示的cdr3。优选地，该重组抗人ige抗体的重链氨基酸序列为seq id no：15，轻链氨基酸序列为seq id no：17。

5、本发明提供的一种化学发光法人ige抗体检测试剂盒，包括抗人ige抗体包被的磁性微球试剂、生物素标记的抗人ige抗体试剂、吖啶酯标记的链霉亲和素试剂、标准品和质控品，其中抗人ige抗体包被的磁性微球试剂使用上述第一种重组抗人ige抗体，生物素标记的抗人ige抗体试剂使用上述第二种重组抗人ige抗体。

6、优选地，所述抗人ige抗体包被的磁性微球试剂中抗人ige抗体包被的磁性微球的浓度为0.5～1.2mg/ml，所述生物素标记的抗人ige抗体试剂中生物素标记的抗人ige抗体浓度为0.05～0.2μg/ml，所述吖啶酯标记的链霉亲和素试剂中吖啶酯标记的链霉亲和素浓度为0.05～0.25μg/ml，所述标准品经过冷冻干燥，其复溶后包括6支不同浓度的人ige蛋白溶液：0iu/ml、0.45iu/ml、0.76iu/ml、3.6iu/ml、20.8iu/ml、94.8iu/ml，所述质控品经过冷冻干燥，其复溶后包括2支不同浓度的人ige蛋白溶液：1.0iu/ml、20.0iu/ml。

7、优选地，所述抗人ige抗体包被的磁性微球试剂还包括缓冲液、稳定剂、保护剂、防腐剂、螯合剂，所述生物素标记的抗人ige抗体试剂还包括缓冲液、防腐剂、稳定剂、保护剂、表面活性剂，所述吖啶酯标记的链霉亲和素试剂还包括缓冲液、防腐剂、稳定剂、保护剂，所述复溶后的标准品溶液还包括缓冲液、保护剂，所述复溶后的质控品溶液还包括缓冲液、保护剂。

8、在具体的实施例中，将抗人ige抗体包被的磁性微球试剂中还包括的上述试剂称为磁性微球保存缓冲液，将生物素标记的抗人ige抗体试剂中还包括的上述试剂称为生物素标记物保存缓冲液，将吖啶酯标记的链霉亲和素试剂中还包括的上述试剂称为吖啶酯标记物保存缓冲液，将复溶后的标准品溶液中还包括的上述试剂称为标准品稀释缓冲液，将复溶后的质控品溶液中还包括的上述试剂称为质控品稀释缓冲液。

9、优选地，所述抗人ige抗体包被的磁性微球试剂中：缓冲液为ph6.0～7.5的乙磺酸缓冲液或磷酸盐缓冲液，稳定剂为10～100g/l的蔗糖、海藻糖或葡萄糖，保护剂为5～40g/l牛血清白蛋白，防腐剂为0.003～0.2l/l的proclin 300，螯合剂为0.1～0.6g/l的edta；所述生物素标记的抗人ige抗体试剂中：缓冲液为ph6.0～7.5的乙磺酸缓冲液或磷酸盐缓冲液，防腐剂为0.003～0.2l/l的proclin 300，稳定剂为5～100g/l的蔗糖、葡萄糖或海藻糖，表面活性剂为0～2ml/l的tritonx 100，保护剂为5～40g/l牛血清白蛋白；所述吖啶酯标记的链霉亲和素试剂中：缓冲液为ph6.0～7.5的乙磺酸缓冲液或磷酸盐缓冲液，防腐剂为0.003～0.2l/l的proclin300，稳定剂为10～100g/l的蔗糖、葡萄糖或海藻糖，保护剂为5～40g/l牛血清白蛋白；所述复溶后的标准品中：缓冲液为ph6.0～7.5乙磺酸缓冲液或磷酸盐缓冲液，保护剂为1～10g/l的人血清白蛋白或牛血清白蛋白或0.05～0.1l/l的山羊血清；所述复溶后的质控品中：缓冲液为ph6.0～7.5的乙磺酸缓冲液或磷酸盐缓冲液，保护剂为1～10g/l的人血清白蛋白或牛血清白蛋白或0.05～0.1l/l的山羊血清。

10、优选地，所述抗人ige抗体包被的磁性微球试剂中磁性微球为羧基磁性微球或甲苯磺氨基磁性微球(粒径：1.5μm～3.0μm)。

11、优选地，所述抗人ige抗体包被的磁性微球的制备过程为：

12、用0.02m乙磺酸缓冲液(ph5.0)将第一种重组抗人ige抗体稀释至0.04mg/ml，制备成重组抗人ige抗体稀释液；用0.02m乙磺酸缓冲液(ph5.0)将羧基磁性微球稀释至1mg/ml，再加入0.5％(质量浓度)的碳二亚胺(edc)，在25℃下振荡反应30min，反应结束后通过磁分离器去除未反应的edc；然后加入1％(质量浓度)的上述重组抗人ige抗体稀释液，在30℃下振荡反应30min，反应结束后通过磁分离器去除未反应的抗体，再加入由缓冲液、防腐剂、稳定剂、表面活性剂(如吐温20、曲拉通100等)组成的终止反应液终止反应，在37℃下振荡反应120min，反应结束后通过磁分离器收集磁性微球；最后加入包含缓冲液、防腐剂、稳定剂、保护剂、螯合剂的磁性微球保存缓冲液混匀，调整磁性微球质量浓度为0.5～1.2mg/ml；

13、所述生物素标记的抗人ige抗体的制备过程为：

14、将第二种重组抗人ige抗体以1：28摩尔比的比例加入到溶于二甲基甲酰胺的生物素中，37℃条件下振荡反应30min，反应后的溶液用磷酸盐缓冲液(0.005m，ph7.0～7.4)透析，bca法测定标记物的浓度，并用包含缓冲液、防腐剂、稳定剂、保护剂、表面活性剂的生物素标记物保存缓冲液，调整其浓度到0.05～0.2μg/ml；

15、所述吖啶酯标记的链霉亲和素的制备过程为：

16、将链霉亲和素以1：5摩尔比的比例加入到溶于二甲基甲酰胺的吖啶酯中，37℃条件下振荡反应30min，反应后的溶液用硫酸铵盐析法纯化，将沉淀反应液离心，取沉淀物，用磷酸盐缓冲液(0.005m，ph7.0～7.4)重悬沉淀物(即吖啶酯标记的链霉亲和素)，bca法测定标记物的浓度，并用包含缓冲液、防腐剂、稳定剂、保护剂的吖啶酯标记物保存缓冲液，调整其浓度到0.05～0.25μg/ml。

17、本发明还涉及化学发光法人ige抗体检测试剂盒定量检测人ige抗体的方法，包括以下步骤：

18、(1)将所述抗人ige抗体包被的磁性微球、生物素标记的抗人ige抗体与复溶后的标准品或者质控品或者检测样本，振荡混匀后，置于37℃反应20min，得到第一溶液，在外加磁场作用下，磁分离洗涤去除第一溶液中未反应的生物素标记的抗人ige抗体，得到第二溶液，形成抗人ige抗体1-ige-抗人ige抗体2的双抗体夹心结构；

19、(2)向上述第二溶液中加入一定体积吖啶酯标记的链霉亲和素，振荡混匀后，置于37℃反应20min，得到第三溶液；在外加磁场作用下，磁分离洗涤去除第三溶液中未反应的吖啶酯标记的链霉亲和素和杂质，得到第四溶液；

20、(3)向上述第四溶液中加入化学发光底物，测定发光强度；

21、(4)根据标准品标示浓度和标准品发光强度绘制标准曲线；

22、(5)根据步骤(4)所得标准曲线将质控品或检测样本的发光值换算成相应的浓度。

23、本发明中，只要是适用于吖啶酯发光体系的化学发光底物液均可使用，如碱性过氧化氢溶液等。

24、本发明还涉及化学发光法人ige抗体检测试剂盒在全自动化学发光免疫分析仪上的应用，包括以下步骤：

25、(1)将所述抗人ige抗体包被的磁性微球试剂、生物素标记的抗人ige抗体试剂、吖啶酯标记的链霉亲和素试剂放入全自动化学发光免疫分析仪试剂仓的对应位置，仪器自动识别或者通过仪器配套软件设定；

26、(2)将所述复溶后的标准品放入仪器全自动化学发光免疫分析仪样本仓，仪器自动识别或者通过仪器配套软件编辑对应检测信息，仪器识别标准品信息；

27、(3)将所述复溶后的质控品或其他待测样本放入全自动化学发光免疫分析仪样本仓，仪器自动识别或者通过仪器配套软件编辑对应检测信息，仪器识别质控品或待测样本信息；

28、(4)启动运行程序，仪器自动执行检测样本的检测，并根据标准品的发光值和标示浓度自动绘制标准曲线，利用标准曲线自动检测计算质控品或检测样本的浓度。

29、本发明还提供一种化学发光法过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，与上述化学发光法人ige抗体检测试剂盒相比，本过敏原特异性ige抗体检测试剂盒还包括生物素标记的过敏原溶液试剂，其余试剂及制备工艺参见前述。

30、优选地，所述过敏原为户尘螨、粉尘螨、艾蒿、黄花蒿过敏原。

31、优选地，所述生物素标记的过敏原溶液试剂中过敏原溶液的浓度为0.025μg/ml～0.2μg/ml。

32、优选地，所述生物素标记的户尘螨过敏原溶液试剂中包含等质量比混合的重组户尘螨主要过敏原蛋白der p 1和der p 2；所述生物素标记的粉尘螨过敏原溶液试剂中包含等质量比混合的重组粉尘螨主要过敏原蛋白der f 1和der f 2；所述生物素标记的艾蒿过敏原溶液试剂中包含等质量比混合的重组艾蒿主要过敏原蛋白art v 1和art v 3，所述生物素标记的黄花蒿过敏原溶液试剂中包含等质量比混合的重组黄花蒿主要过敏原蛋白arta 1和art a 3。

33、优选地，所述生物素标记的过敏原溶液试剂中还包括缓冲液、防腐剂、稳定剂、保护剂、表面活性剂。

34、在具体的实施例中，将生物素标记的过敏原溶液试剂中还包括的上述试剂称为生物素标记物保存缓冲液，其组成与上述生物素标记的抗人ige抗体试剂的生物素标记物保存缓冲液相同。

35、优选地，所述生物素标记的过敏原溶液试剂中：缓冲液为ph6.0～7.5的乙磺酸缓冲液或磷酸盐缓冲液，防腐剂为0.003～0.2l/l的proclin 300，稳定剂为5～100g/l的蔗糖、葡萄糖或海藻糖，表面活性剂为0～2ml/l的tritonx 100，保护剂为5～40g/l牛血清白蛋白。

36、优选地，所述生物素标记的过敏原按以下方法制备：将重组过敏原蛋白以1：15～33摩尔比的比例加入到溶于二甲基甲酰胺的生物素中，25～37℃条件下振荡反应，反应后的溶液用磷酸盐缓冲液透析，bca法测定标记物的浓度，并用包含缓冲液、防腐剂、稳定剂、保护剂、表面活性剂的生物素标记物保存缓冲液调整其浓度到0.025μg/ml～0.2μg/ml。

37、本发明还提供了化学发光法过敏原特异性ige抗体检测试剂盒定量检测过敏原特异性ige抗体的方法，包括以下步骤：

38、(1)将所述抗人ige抗体包被的磁性微球、生物素标记的抗人ige抗体与复溶后的标准品或者质控品，振荡混匀后，置于37℃反应20min，得到第一溶液，在外加磁场作用下，磁分离洗涤去除第一溶液中未反应的生物素标记的抗人ige抗体，得到第二溶液，形成抗人ige抗体1-ige-抗人ige抗体2的双抗体夹心结构；

39、(2)向上述第二溶液中加入一定体积吖啶酯标记的链霉亲和素，振荡混匀后，置于37℃反应20min，得到第三溶液；在外加磁场作用下，磁分离洗涤去除第三溶液中未反应的吖啶酯标记的链霉亲和素和杂质，得到第四溶液；

40、(3)向上述第四溶液中加入化学发光底物，测定标准品及质控品的发光强度；

41、(4)根据标准品标示浓度和标准品发光强度绘制标准曲线；

42、(5)根据步骤(4)所得标准曲线将质控品的发光值换算成相应的浓度，获得质控结果；

43、(6)将所述抗人ige抗体包被的磁性微球、生物素标记的过敏原溶液、检测样本，振荡混匀后，置于37℃反应20min，在外加磁场作用下，磁分离洗涤去除中未反应的生物素标记的过敏原；

44、(7)向步骤(6)所得溶液中加入一定体积的所述吖啶酯标记的链霉亲和素，振荡混匀后，置于37℃反应20min，形成抗人ige抗体-过敏原特异性ige-过敏原的复合物；在外加磁场作用下，磁分离洗涤去除未反应的吖啶酯标记的链霉亲和素和杂质；

45、(8)向步骤(7)所得溶液中加入化学发光底物，测定检测样本的发光强度；

46、(9)根据标准曲线将检测样本发光值换算成相应的浓度，获得检测样本中过敏原特异性ige抗体的浓度。

47、优选地，本发明过敏原特异性ige抗体检测试剂盒用于全自动化学发光免疫分析仪进行过敏原特异性ige抗体的检测，包括以下步骤：

48、(1)将所述抗人ige抗体包被的磁性微球试剂、生物素标记的抗人ige抗体试剂、吖啶酯标记的链霉亲和素试剂放入全自动化学发光免疫分析仪试剂仓的对应位置，仪器自动识别或者通过仪器配套软件设定；

49、(2)将所述标准品、质控品放入全自动化学发光免疫分析仪样本仓，仪器自动识别或通过仪器配套软件编辑对应检测信息，按照程序自动检测，形成校准曲线和质控结果；

50、(3)将生物素标记的过敏原溶液放入全自动化学发光免疫分析仪试剂仓的对应位置，仪器自动识别或通过仪器配套软件设定；

51、(4)将检测样本放入全自动化学发光免疫分析仪样本仓，通过仪器配套软件编辑对应检测信息，仪器识别待测样本信息后，按照程序自动检测，并根据校准曲线计算样品中过敏原特异性ige浓度。

52、本发明相比现有技术具有以下优势：

53、本发明的重组抗人ige抗体用于人ige抗体检测，能够很好地识别和匹配人ige蛋白表位，抗干扰能力强，均一性佳，组合使用不仅提高了检测性能，而且更具质量可控性，有利于人ige抗体检测以及人ige抗体检测试剂盒的制备。

54、本发明基于磁性微球化学发光法的人ige抗体检测方法及人ige抗体检测试剂盒，采用特定的重组抗人ige抗体包被磁性微球以及采用生物素标记特定的重组抗人ige抗体，能够更好地匹配人ige蛋白表位，抗干扰能力强且均一性佳，提高了试剂盒的检测性能和质控属性，具有很好的精密度、线性范围和准确度，操作简单，检测耗时短，且具有很强的通用性，适用于各种过敏原特异性ige抗体的定量检测，临床实用性高，其配合过敏原溶液制备的过敏原特异性ige抗体检测试剂盒在准确度、精密度、线性以及特异性方面表现优越，检测结果稳定可靠，与临床过敏原特异性ige检测“金标准”immunocap系统具有很好的一致性，还可应用于全自动化学发光检测仪器，具有很好的临床应用前景。

55、本发明还优化了试剂盒的组成体系，进一步提高了人ige抗体检测试剂盒的检测性能和稳定性。

56、说明书附图

57、图1：抗人ige杂交瘤细胞基因pcr扩增结果。其中，图1(a)是puc57-ige10-lc及puc57-ige22-lc的pcr结果，泳道1为dna marker，泳道2为puc57-ige10-lc，泳道3为puc57-ige22-lc；图1(b)是puc57-ige10-hc及puc57-ige22-hc的pcr结果，泳道1为dna marker，泳道2为puc57-ige10-hc，泳道3为puc57-ige22-hc。

58、图2：纯化后的嵌合抗体进行还原性sds-page凝胶电泳的分析结果。其中，泳道1为蛋白marker；泳道2为本发明第二种重组抗人ige抗体(来自抗人ige杂交瘤细胞株e10的嵌合抗体)；泳道3为本发明第一种重组抗人ige抗体(来自抗人ige杂交瘤细胞株e22的嵌合抗体)。

59、图3：对照试剂盒1、对照试剂盒2、本发明人ige抗体检测试剂盒的人ige标准品检测结果。图4：本发明过敏原特异性ige抗体检测试剂盒户尘螨特异性ige检测结果与thermofisher immunocap系统户尘螨d1过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的一致性评价。

60、图5：本发明过敏原特异性ige抗体检测试剂盒粉尘螨特异性ige抗体检测结果与thermo fisher immunocap系统粉尘螨d2过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的一致性评价。

61、图6：本发明过敏原特异性ige抗体检测试剂盒艾蒿特异性ige抗体检测结果与thermo fisher immunocap系统艾蒿w6过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的一致性评价。

62、图7：本发明过敏原特异性ige抗体检测试剂盒黄花蒿特异性ige抗体检测结果与thermo fisher immunocap系统艾蒿w6过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的一致性评价。