具有增强的效应子功能的生物合成单价结合分子的制作方法

1.在某些方面，本文提供了具有增强的抗体依赖性细胞毒性(adcc)、增强的补体依赖性细胞毒性(cdc)和/或增强的抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)的单价结合分子。

背景技术：

0、2.背景技术

1、治疗性抗体可结合在免疫效应细胞(诸如自然杀伤(nk)细胞和巨噬细胞)上表达的fc受体，从而经由adcc和adcp产生抗肿瘤活性。治疗性抗体还可活化cdc并实现抗肿瘤功效。

2、3.技术实现要素：

3、在一个方面，本文提供了一种结合分子，该结合分子包含抗原结合结构域和fc区，其中(i)该抗原结合结构域是单价；并且(ii)该fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；其中该结合分子具有增加的在细胞表面上六聚化的能力，和/或增加的接合c1q的能力。

4、在一些实施方案中，抗原结合结构域包含vh区和/或vl区。在一些实施方案中，抗原结合结构域包含fab片段、scfv、单个vh结构域、单个vl结构域或对抗原具有特异性的蛋白结构域。

5、在一些实施方案中，经由其n297残基共价连接至fc区的低聚糖不包含核心岩藻糖残基。

6、在一些实施方案中，结合分子是单价抗体或抗体片段或工程化抗原结合蛋白。

7、在一些实施方案中，结合分子具有增强的adcc、增强的cdc和/或增强的adcp。

8、在另一方面，本文提供了一种结合分子群体，该结合分子群体包含本文所公开的结合分子。在一些实施方案中，结合分子群体的每个结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中：(i)该抗原结合结构域是单价；(ii)该fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；并且(iii)少于80％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

9、在另一方面，本文提供了一种结合分子群体，其中每个结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中群体中至少10％的结合分子的抗原结合结构域是单价；其中每个结合分子的fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；并且其中少于80％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

10、在一些实施方案中，群体中至少20％的结合分子的抗原结合结构域是单价。在一些实施方案中，群体中至少30％的结合分子的抗原结合结构域是单价。在一些实施方案中，群体中至少40％的结合分子的抗原结合结构域是单价。在一些实施方案中，群体中至少50％的结合分子的抗原结合结构域是单价。在一些实施方案中，群体中至少60％的结合分子的抗原结合结构域是单价。在一些实施方案中，群体中至少70％的结合分子的抗原结合结构域是单价。在一些实施方案中，群体中至少80％的结合分子的抗原结合结构域是单价。在一些实施方案中，群体中至少90％的结合分子的抗原结合结构域是单价。

11、在一些实施方案中，少于70％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。在一些实施方案中，少于60％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。在一些实施方案中，少于50％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。在一些实施方案中，少于40％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。在一些实施方案中，少于30％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。在一些实施方案中，少于20％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。在一些实施方案中，少于10％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

12、在一些实施方案中，抗原结合结构域包含vh区和/或vl区。在一些实施方案中，抗原结合结构域包含fab片段、scfv、单个vh结构域、单个vl结构域或对抗原具有特异性的蛋白结构域。

13、在一些实施方案中，结合分子是单价抗体或抗体片段或工程化抗原结合蛋白。

14、在一些实施方案中，通过在宿主细胞中表达编码结合分子或其片段的多核苷酸来产生结合分子，该宿主细胞不足以将岩藻糖添加到连接至抗体的fc区的低聚糖。在一些实施方案中，宿主细胞具有降低的gdp-甘露糖4,6-脱水酶(gmd)活性或降低的α-1,6岩藻糖基转移酶活性。在一些实施方案中，编码α-1,6岩藻糖基转移酶的基因突变，以低于正常水平表达，或在宿主细胞中敲除。在一些实施方案中，编码gdp-甘露糖4,6-脱水酶的基因突变，以低于正常水平表达，或在宿主细胞中敲除。

15、在一些实施方案中，结合分子群体具有增强的adcc、增强的cdc和/或增强的adcp。

16、在另一方面，本文提供了一种核酸，该核酸编码本文所公开的结合分子。

17、在另一方面，本文提供了一种载体，该载体包含本文所公开的核酸。

18、在又一方面，本文提供了一种药物组合物，该药物组合物包含结合分子和药学上可接受的赋形剂，其中该结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中：(i)该抗原结合结构域是单价；并且(ii)该fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；其中该结合分子具有增加的在细胞表面上六聚化的能力，和/或增加的接合c1q的能力。

19、在另一方面，本文提供了一种药物组合物，该药物组合物包含结合分子群体和药学上可接受的赋形剂，其中每个结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中(i)该抗原结合结构域是单价；(ii)该fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；并且(iii)少于80％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

20、在另一方面，本文提供了一种药物组合物，该药物组合物包含结合分子群体和药学上可接受的赋形剂，其中每个结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中群体中至少10％的结合分子的抗原结合结构域是单价；其中每个结合分子的fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；并且其中少于80％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

21、在又一方面，本文提供了一种制备结合分子群体的方法，该方法包括在宿主细胞中表达编码结合分子或其片段的多核苷酸，该宿主细胞不足以将岩藻糖残基添加到经由n297残基连接至抗体的低聚糖，其中该结合分子群体包含结合分子，该结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中(i)该抗原结合结构域是单价；并且(ii)该fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；其中该结合分子具有增加的在细胞表面上六聚化的能力，和/或增加的接合c1q的能力。

22、在另一方面，本文提供了一种制备结合分子群体的方法，该方法包括在宿主细胞中表达编码结合分子或其片段的多核苷酸，该宿主细胞不足以将岩藻糖残基添加到经由n297残基连接至抗体的低聚糖，其中每个结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中：(i)该抗原结合结构域是单价；(ii)该fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；并且(iii)少于80％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

23、在另一方面，本文提供了一种制备结合分子群体的方法，该方法包括在宿主细胞中表达编码结合分子或其片段的多核苷酸，该宿主细胞不足以将岩藻糖残基添加到经由n297残基连接至抗体的低聚糖，其中每个结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中群体中至少10％的结合分子的抗原结合结构域是单价；其中每个结合分子的fc区包含k248e和t437r突变(re 突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；并且其中少于80％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

24、在又一方面，本文提供了一种用于增强系统中的cdc、adcp和/或adcc的方法，或一种调节宿主的免疫力的方法，或一种治疗受试者的疾病或障碍的方法，该方法包括使该系统与包含抗原结合结构域和fc区的结合分子接触，其中(i)该抗原结合结构域是单价；并且(ii)该fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；其中结合分子具有增加的在细胞表面上六聚化的能力，和/或增加的接合c1q的能力。

25、在另一方面，本文提供了一种用于增强系统中的cdc、adcp和/或adcc的方法，或一种调节宿主的免疫力的方法，或一种治疗受试者的疾病或障碍的方法，该方法包括使该系统与结合分子群体接触，其中每个结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中：(i)该抗原结合结构域是单价；(ii)该fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；并且(iii)少于80％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

26、在另一方面，本文提供了一种用于增强系统中的cdc、adcp和/或adcc的方法，或一种调节宿主的免疫力的方法，或一种治疗受试者的疾病或障碍的方法，该方法包括使该系统与结合分子群体接触，其中每个结合分子包含抗原结合结构域和fc区；其中群体中至少10％的结合分子的抗原结合结构域是单价；其中每个结合分子的fc区包含k248e和t437r突变(re突变)，其中氨基酸残基编号根据eu编号系统；并且其中少于80％的经由fc区的n297残基共价连接至结合分子群体的低聚糖包含核心岩藻糖残基。

27、在又一方面，本文提供了一种结合分子，该结合分子包含用于增强cdc的第一构件和用于增强cdc的第二构件。在一些实施方案中，结合分子还包含用于增强adcc的第三构件。在一些实施方案中，结合分子还包含用于增强adcp的第四构件。在一些实施方案中，第一构件增加细胞表面上的结合分子的六聚化，和/或增加结合分子对c1q的接合。在一些实施方案中，第一构件增强cdc、adcp和/或adcc。

28、在另一方面，本文提供了一种制备结合分子群体的方法，该方法包括(i)用于在结合分子的fc区中引入k248e和t437r突变(re突变)的步骤；和(ii)用于产生在经由n297残基连接至结合分子的低聚糖中具有减少量的核心岩藻糖的结合分子群体的步骤；其中这些结合分子包含单价抗原结合结构域。

技术实现思路