一种评估样本中血液污染程度的方法与流程

本发明属于样本检测，具体涉及一种评估样本中血液污染程度的方法。

背景技术：

1、近年来，甲状腺癌的发病率逐渐上升，通过规范化治疗的早期甲状腺癌的治愈率达90%以上，因此甲状腺癌早筛显得尤为重要。明确诊断是肿瘤治疗的前提，甲状腺细针穿刺活检（fna)是甲状腺结节良恶性甄别的首选方法。该方法得到的fna样本是用细针穿刺甲状腺结节处并通过注射器抽取甲状腺结节部位的病理组织，其采集方式常伴有血液的产生，而血液污染会影响fna样本后续的检测结果。

2、目前市场上评估fna样本中血液含量占比或者组织样本占比的方法较少，fna样本的血液污染程度主要由经验丰富的病理学家进行分级，主要分级方式为：0=存在血凝块，1=红细胞污染，2=无血，也可根据血液污染程度进行高中低分类（血液污染比例＜25%—低，血液污染比例25～50%—中，血液污染比例＞25%—高)。现有技术基本上依赖于病理学家对fna样本的血量进行评估，且fna样本质量评估的准确性也跟病理学家的经验是否丰富有关。fna样本在前处理前通常会进行除血操作以降低血液污染带来的影响，但对除血充分性的判断主要靠实验人员的主观性，不具备统一的标准。而蛋白质谱检测无法从多肽产量的角度评估fna样本的占比或者血液含量的占比，若临床样本中血液占比较大，会因临床样本的投入量较少导致假阳性的结果，所以亟须一种评估血液含量占比或组织占比的方法。

3、前述背景技术知识的记载旨在帮助本领域普通技术人员理解与本发明较为接近的现有技术，同时便于对本发明的发明构思及技术方案的理解，应当明确的是，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日前已公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请技术方案的新创性。

技术实现思路

1、技术问题

2、为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种基于lc-ms/ms方法检测fna样本中的血液含量的方法，通过将特定肽段作为评估fna组织样本中的血液占比的方法的关键参照，即可仅需低至1μg的样本进样量完成样本血液含量的精确评估，进而辅助医生和检测机构评估fna样本的血液污染程度。

3、技术方案

4、为了实现上述目的，本申请发明人进行了深入研究，结果发现一条肽段（tvaapsvfifppsdeqlk，igkc蛋白——血液高丰度抗体蛋白的部分氨基酸序列，可简称为tvaa、tvaa肽段)与血液的含量具有极高的相关性，可以作为评估fna组织样本中的血液占比的方法的关键参照，进而确定fna样本中组织的投入量，建立临床样本的相关性研究。

5、方案1，一种评估样本中血液污染程度的方法，分别从样本和新鲜血液样本中提取包括目标肽段的肽段混合物，混合后检测目标肽段的含量，依据检测结果得到样本中所述目标肽段浓度与血液含量的关系，依据所述关系评估样本中血液的污染程度，所述目标肽段为tvaapsvfifppsdeqlk。

6、优选的，所述提取包括目标肽段的肽段混合物具体为采用制备多肽的前处理方法提取样本和新鲜血液样本中的肽段。

7、优选的，所述目标肽段浓度与血液含量的关系为线性相关方程。

8、优选的，所述检测目标肽段的含量时采用lc-ms/ms方法。

9、优选的，所述评估样本中血液的污染程度包括定性、定量检测样本中的血液含量。

10、方案2，检测肽段tvaapsvfifppsdeqlk的试剂在制备评估样本中血液污染程度的试剂盒中的应用。

11、方案3，评估样本中血液污染程度的试剂盒，包括检测肽段tvaapsvfifppsdeqlk的试剂。

12、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，得到具体实施方式。

13、本发明涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。

14、有益效果

15、根据本发明，通过在制备多肽的前处理方法，提取术中组织样本和新鲜血液样本中的肽段，然后将两种多肽按不同比例进行混合，再采用lc-ms/ms法检测混合肽段溶液中目标肽段tvaapsvfifppsdeqlk的含量，根据检测结果得到样本中目标肽段浓度与血液含量的线性相关方程，该方法仅需低至1μg的样本进样量即可评估量化血液的含量，进而辅助医生和检测机构评估fna样本的血液污染程度，在fna样本检测前对fna样本溶血情况提供判断，方便医生及检测机构做后续处理。

16、本发明为实现上述目的而采用了上述技术方案，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。

技术特征：

1.一种评估样本中血液污染程度的方法，其特征在于：分别从样本和新鲜血液样本中提取包括目标肽段的肽段混合物，混合后检测目标肽段的含量，依据检测结果得到样本中所述目标肽段浓度与血液含量的关系，依据所述关系评估样本中血液的污染程度，所述目标肽段为tvaapsvfifppsdeqlk。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

7.检测肽段tvaapsvfifppsdeqlk的试剂在制备评估样本中血液污染程度的试剂盒中的应用。

8.评估样本中血液污染程度的试剂盒，包括检测肽段tvaapsvfifppsdeqlk的试剂。

技术总结本发明提供一种评估样本中血液污染程度的方法，包括：分别从样本和新鲜血液样本中提取包括目标肽段的肽段混合物，混合后检测目标肽段的含量，依据检测结果得到样本中所述目标肽段浓度与血液含量的关系，依据所述关系评估样本中血液的污染程度，所述目标肽段为TVAAPSVFIFPPSDEQLK。通过将特定肽段作为评估FNA组织样本中的血液占比的方法的关键参照，即可仅需低至1μg的样本进样量完成样本血液含量的精确评估，进而辅助医生和检测机构评估FNA样本的血液污染程度。技术研发人员：司慧娟,裘钧陶,闫慧慧,葛伟刚,朱怡,高欢欢受保护的技术使用者：西湖欧米（杭州）生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/21