自组装多肽及其在制备线粒体膜电位检测产品中的应用

本发明属于生物医学领域，具体涉及自组装多肽及其在制备线粒体膜电位检测产品中的应用。

背景技术：

1、线粒体是细胞内的能量厂，除了红血细胞外，其存在于人体内的每一个细胞中，线粒体的主要功能是提供细胞所需要的能量，即我们俗知的atp。由于于线粒体在细胞内起着关键的作用，因此线粒体有时候和很多疾病的发病直接相关，比如癌症，癌细胞的增殖与线粒体密切相关，线粒体膜电位(δψm)的水平可反应癌细胞的状态，因此，开发特异性检测癌细胞δψm的产品至关重要。

2、线粒体膜电位检测试剂盒是目前使用较多的测定δψm的工具，其以jc-1为荧光探针，jc-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。但是该试剂盒无法区分正常细胞与癌细胞的膜电位，无选择性。

技术实现思路

1、有鉴于上述技术问题，本发明旨在提供一种能够特异性检测癌细胞δψm的产品。

2、第一方面，本发明提供一种自组装多肽，所述自组装多肽的序列结构为nbd-ffrfkrgdk。

3、第二方面，本发明提供所述的自组装多肽的制备方法，所述制备方法包括固相合成多肽的方法。

4、第三方面，本发明提供所述的自组装多肽在制备线粒体膜电位检测产品中的应用，所述线粒体是指癌细胞线粒体。

5、进一步的，所述产品包括试剂盒。

6、更进一步的，所述试剂盒包括所述自组装多肽、mitrotracker deep red fm线粒体深红色探针、细胞固定液和dapi。

7、更进一步的，所述细胞固定液为质量分数4％的甲醛溶液。

8、更进一步的，所述检测包括以下步骤：

9、s1、将所述自组装多肽与癌细胞共孵育；

10、s2、将mitrotracker deep red fm线粒体深红色探针与癌细胞共孵育30min；

11、s3、使用质量分数4％的甲醛溶液对癌细胞进行固定；

12、s4、使用dapi染色细胞核，在激光共聚焦显微镜下比较癌细胞的线粒体部位的所述自组装多肽产生的绿色荧光信号的变化。

13、本发明具有以下有益效果：

14、本发明提供的一种nbd偶联的多肽衍生物分子(nbd-ffrfkrgdk)，其可特异性检测肿瘤细胞内线粒体膜电位的变化。在本发明中，nbd-ffrfkrgdk分子主要由以下几部分构成：(1)4-丙氨酸-7-硝基-2,1,3-苯并二唑(nbd-α-ala)作为荧光分子，可反映检测部位的荧光变化；(2)arg-gly-glu-lys(rgdk)序列，可与肿瘤微环境过表达的ανβ3和nrp-1受体结合，因此具有双重肿瘤细胞靶向功能；(3)ffrfk集自组装与线粒体靶向功能于一体，既可依靠自身所带正电荷靶向至线粒体部位，亦可依靠自组装功能在线粒体部位富集。基于以上设计，首先，nbd-ffrfkrgdk在rgdk可特异性地与癌细胞表面的ανβ3受体结合而被摄取入癌细胞内。之后nbdffrfkrgdk依靠自身所带的正电荷及frfk的牵引下到达线粒体部位。nbdffrfkrgdk在线粒体部位依靠自身的组装能力，可形成纳米纤维结构，在线粒体部位富集发出强烈的绿色荧光。而当线粒体膜电位下降后，nbd-ffrfkrgdk靶向富集在线粒体部位的纤维易被释放到细胞质中，因而其绿色荧光强度下降。与肿瘤细胞相比，正常细胞的整合素αvβ3受体表达量均显著低于肿瘤细胞，因此nbd-ffrfkrgdk在正常细胞内聚集较少，在正常细胞的线粒体部位的绿色荧光强度也较低。因此，根据nbd-ffrfkrgdk的荧光变化，可特异性识别出癌细胞的线粒体膜电位变化。当癌细胞的膜电位发生下降时，线粒体内部的纳米纤维可解组装，释放到细胞质中，导致线粒体内部的绿色荧光变弱。

技术特征：

1.一种自组装多肽，其特征在于，所述自组装多肽的序列结构为nbd-ffrfkrgdk。

2.权利要求1所述的自组装多肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括固相合成多肽的方法。

3.权利要求1所述的自组装多肽在制备线粒体膜电位检测产品中的应用，其特征在于，所述线粒体是指癌细胞线粒体。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括所述自组装多肽、mitrotracker deep red fm线粒体深红色探针、细胞固定液和dapi。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述细胞固定液为质量分数4％的甲醛溶液。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测包括以下步骤：

技术总结本发明属于生物医学领域，具体涉及自组装多肽及其在制备线粒体膜电位检测产品中的应用。所述自组装多肽的序列结构为NBD‑FFRFKRGDK。所述自组装多肽的制备方法包括固相合成多肽的方法。本发明提供的自组装多肽可特异性识别出癌细胞的线粒体膜电位变化。当癌细胞的膜电位发生下降时，线粒体内部的纳米纤维可解组装，释放到细胞质中，导致线粒体内部的绿色荧光变弱。技术研发人员：吴灿,张效威,谢治深,张振强,王满满,李烁璇,贾永艳,关延彬,韩德恩,张飞受保护的技术使用者：河南中医药大学技术研发日：技术公布日：2024/8/20