一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法与流程

本发明涉及乳胶微球标记抗体，更具体地说是涉及一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法。

背景技术：

1、免疫层析分析方法具有灵敏度高、操作简便、省时省力、成本低廉，适用于大量样本的快速现场筛选等优势，近年来在兽药残留检测领域得到了快速的发展。胶体金具有生物兼容性好，不同粒径可呈现不同的颜色，易于通过改性提高信号强度等优势，成为免疫层析分析方法中最常用的标记材料。但是胶体金价格昂贵，批间差异大，不利于实现试纸条的批量生产。胶体金免疫层析技术对抗体、包被原等材料的要求比较高，而且胶体金的信号较弱，限制了其应用。

2、乳胶微球又名聚苯乙烯微球，外观为蓝色液体状，其基本粒子尺寸在100-1000nm之间，表面功能化聚合物微球由于表面羧基、氨基或者羟基等活性基团的存在而易于与酶、蛋白质、核酸等结合反应，使之在生物、化学、材料、医学等方面应用广泛。当前，应用粒径可控、单分散性功能化聚合物微球已成为高分子材料领域的一个研究热点。单分散纳米级聚苯乙烯微球具有形貌规则、粒径均一、良好的表面反应能力和易于功能化等优点，在免疫技术和疾病早期诊断等领域具有很高的研究和应用价值。

3、胶微球的标记过程常常需要3次以上冷冻离心并伴随细胞粉碎机的超声分散。此过程不仅增强了标记过程的繁琐度，而且会造成超声过程中的损耗。

4、因此，如何提供一种无需分离的以乳胶微球标记抗体的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，特提出本发明。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明实施例第一方面在于提供一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法，过程包括：

4、1)向活化buffer中加入乳胶微球，使得微球固含量为1％-3％，得到分散后的乳胶微球；

5、2)按照edc与羧基活化比为10-0.5：1的比例向所述分散好的乳胶微球中加入edc和nhs的混合液，活化15-60min；

6、3)待标记crp抗体过滤、洗脱，浓缩至10-20mg/ml；

7、4)将浓缩过的抗体加入活化后的乳胶微球中，偶联2-4h；抗体的质量浓度为20-200ug/mg乳胶微球；

8、5)加入封闭剂，至终浓度为20％，封闭1h，然后分散；分散剂为10％海藻糖+1％casein+0.5％nacl+1％表面活性剂的tbs缓冲液。

9、在优选的实施方式中，步骤1)中的活化buffer包括mes溶液、mops溶液或hepes溶液，ph为6.0-9.0。

10、在优选的实施方式中，步骤2)中的edc与nhs的浓度均为20mg/ml。

11、在优选的实施方式中，步骤3)中的过滤为以超滤管过滤。

12、在优选的实施方式中，步骤3)中的洗脱为以mes溶液洗脱。

13、在优选的实施方式中，步骤5)中的封闭剂为casein。

14、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明采用非离子型表面活性剂，在保证反应体系内电荷不受影响的情况下以无需离心的方法标记crp抗体，且维持原有的灵敏度及稳定性。此外，减少离心法常有稳定性差等问题，本方法通过筛选非离子型表面活性剂，提高原有稳定性，无需分离，标记过程简单；节约成本，减少了超声离心造成的浪费，简化了工艺。

技术特征：

1.一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法，其特征在于，过程包括：

2.根据权利要求1所述的一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法，其特征在于，步骤1)中，所述活化buffer包括mes溶液、mops溶液或hep es溶液，ph为6.0-9.0。

3.根据权利要求1所述的一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法，其特征在于，步骤2)中，edc与nhs的浓度均为20mg/ml。

4.根据权利要求1所述的一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法，其特征在于，步骤3)中，所述过滤为以超滤管过滤。

5.根据权利要求1所述的一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法，其特征在于，步骤3)中，所述洗脱为以mes溶液洗脱。

6.根据权利要求1所述的一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法，其特征在于，步骤5)中，所述封闭剂为casein。

技术总结本发明公开了一种无需分离的乳胶微球标记抗体的方法，涉及乳胶微球标记抗体领域，过程包括：向活化buffer中加入乳胶微球，使得微球固含量为1％‑3％，得到分散后的乳胶微球；按照EDC与羧基活化比为10‑0.5：1的比例向所述分散好的乳胶微球中加入EDC和NHS的混合液，活化15‑60min；待标记CRP抗体过滤、洗脱，浓缩至10‑20mg/ml；浓缩过的抗体加入活化后的乳胶微球中，偶联2‑4h；加入封闭剂，至终浓度为20％，封闭1h，然后分散；分散剂为10％海藻糖+1％casein+0.5％NaCl+1％表面活性剂的TBS缓冲液。技术研发人员：张琬祺,郭佳,方晗峰,曲刚受保护的技术使用者：苏州谱佳新材料科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/2