一种治疗CD7阳性T细胞恶性血液肿瘤的药物

本发明属于生物医药，具体涉及一种治疗cd7阳性t细胞恶性血液肿瘤的药物。

背景技术：

1、胞外囊泡(extracellular vesicles，evs)是一类由细胞主动释放的异质性纳米级膜结构颗粒。evs可以携带多种生物活性物质，包括核酸、蛋白质、脂质和代谢产物等，通过其表面或管腔内传递，成为细胞间通讯的重要机制。此外，evs还具有理化稳定性、良好的生物相容性、低免疫原性、可生物降解性和生物屏障可渗透性等优点。因此，evs被视为一种卓越的天然药物递送和纳米治疗平台，被广泛应用于多种疾病的诊断和治疗。

2、近年来，研究的重点逐渐转向对evs的工程化改造，以提高其靶向能力、装载效率和治疗效果。主要涉及两种优化技术：(1)对供体细胞进行遗传或代谢重编程以产生工程化evs；(2)通过多种途径直接修饰纯化的evs。根据文献报道(xiu,h.；nan,x.；guo,d.,etal.,gp350-anchored extracellular vesicles:promising vehicles for deliveringtherapeutic drugs of b cell malignancies.asian j pharm sci 2022,17(3),462-474.)，负载阿霉素(doxorubicin，dox)、锚定gp350的红细胞来源evs对b细胞恶性肿瘤具有治疗作用1。因此，evs药物递送系统在t细胞恶性肿瘤治疗中具有相当大的潜力

3、t细胞恶性肿瘤，包括t细胞淋巴瘤和t细胞白血病，是一类高度侵袭性和快速进展的肿瘤，其儿童发病率为10％～15％，成人发病率为20％～25％。这类肿瘤预后通常较差，特别是复发或难治性t细胞恶性肿瘤，其5年总生存率低于20％。

4、目前，高剂量化疗和造血干细胞移植是治疗t细胞恶性肿瘤的主要手段。然而，这些治疗可能导致化疗耐药、移植物抗宿主病和全身感染等治疗相关并发症，增加死亡风险。除了上述两种传统疗法外，嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)t细胞免疫疗法在过去几十年中发展迅速。

5、cd7是一种跨膜糖蛋白，在超过90％的t细胞急性淋巴细胞白血病(t-cell acutelymphoblastic leukemia，t-all)和t细胞淋巴瘤中表达，使其成为治疗t细胞恶性肿瘤的一个新的免疫靶点。然而，cd7分子也在大多数正常t细胞上表达，导致靶向cd7的car-t细胞发生自相残杀，影响治疗效果。为了克服这一问题，研究人员采用了多种cd7敲除技术来构建自身cd7缺失的car-t细胞，如利用crispr-cas9技术敲除cd7基因或通过intrablock技术抑制cd7表面表达。最近还有研究关注于筛选cd7天然缺失的t细胞来制备cd7特异性car-t细胞。尽管car-t疗法具有巨大的潜力，但也面临着一系列挑战，包括t细胞活性有限，持续car信号导致t细胞过度分化，以及可能出现的移植物抗宿主病和细胞因子风暴综合征等副作用。此外，car-t的生产需要较高的制造成本和高质量的原始材料。

6、因此，为克服现有治疗的局限性和不足之处，开发针对t细胞恶性肿瘤的创新疗法怕迫在眉睫。

技术实现思路

1、本技术研究发现抗cd7单链可变片段(anti-cd7 single-chain variablefragments,αcd7)表面修饰的293t细胞来源的evs(αcd7/evs)可特异靶向cd7+人t细胞急性淋巴白血病(t-cell acute lymphoblastic leukemia,t-all)细胞系molt-4细胞。通过电穿孔技术和共孵育的方式，细胞色素c(cytochrome c,cytc)和胆固醇修饰的bcl2sirna(sibcl2)成功地被装载到αcd7/evs内(αcd7/evs/cytc/sibcl2)。

2、αcd7/evs/cytc/sibcl2可显著诱导molt-4细胞凋亡，从而达到抑制肿瘤生长的效果。

3、本发明首先提供了cd7蛋白作为靶点在制备治疗cd7阳性t细胞恶性血液肿瘤的药物的应用。cd7阳性t细胞恶性血液肿瘤为cd7+人t细胞急性淋巴白血病和cd7+人t细胞淋巴瘤中的至少一种，这两种肿瘤主要依据肿瘤细胞聚集位置进行划分，如果入血就是白血病，如果定植到淋巴结，就是淋巴瘤。

4、本发明又提供了靶向cd7蛋白的分子在制备治疗cd7阳性t细胞恶性血液肿瘤的药物的应用。

5、优选的，靶向cd7蛋白的分子为抗cd7抗体或者至少包括抗cd7抗体的vh和vl片段的抗体片段。

6、更优选的，所述药物还包括胞外囊泡以及具有细胞毒性的分子，靶向cd7蛋白的分子表达在胞外囊泡的表面，所述具有细胞毒性的分子通过胞外囊泡递送到肿瘤细胞内并引起肿瘤细胞死亡。

7、进一步优选的，所述靶向cd7蛋白的分子一端连接有用于锚定在胞外囊泡表面的锚定区，所述锚定区为富含疏水氨基酸的跨膜序列。

8、所述胞外囊泡为外泌体、凋亡小体、癌小体或核外颗粒。

9、所述具有细胞毒性的分子为cytc(细胞色素c)、dox(阿霉素)或ptx(紫杉醇)等。

10、所述药物还包括用于抑制bcl2蛋白活性或编码基因表达的抑制剂，该抑制剂为以下至少一种：

11、干扰bcl2蛋白编码基因表达的sirna序列、shrna序列，

12、小分子抑制剂venetoclax、navitoclax、sonrotoclax。

13、本发明还提供了一种治疗cd7阳性t细胞恶性血液肿瘤的药物，包括靶向cd7蛋白的分子、胞外囊泡以及具有细胞毒性的分子，靶向cd7蛋白的分子表达在胞外囊泡的表面，所述具有细胞毒性的分子通过胞外囊泡递送到肿瘤细胞内并引起肿瘤细胞死亡。

14、优选的，所述靶向cd7蛋白的分子为抗cd7抗体或者至少包括抗cd7抗体的vh和vl片段的抗体片段；

15、所述胞外囊泡为外泌体、凋亡小体、癌小体或核外颗粒；

16、所述具有细胞毒性的分子为cytc(细胞色素c)、dox(阿霉素)或ptx(紫杉醇)。

17、优选的，所述的药物，还包括用于抑制bcl2蛋白活性或编码基因表达的抑制剂，该抑制剂为以下至少一种：干扰bcl2蛋白编码基因表达的sirna序列、shrna序列。

18、本发明的有益效果：

19、本发明研究发现，将靶向cd7蛋白的分子表达在胞外囊泡的表面后，这种胞外囊泡能够在cd7阳性的细胞中更容易富集。再载入具有细胞毒性的分子后，具有细胞毒性的分子能够被这种胞外囊泡更多地带入到cd7阳性的细胞中，从而更好地起到杀伤作用，从而能够起到更好的抗肿瘤作用。进一步再装载入抑制bcl2蛋白活性或编码基因表达的抑制剂，通过联合抑制bcl2蛋白表达，能够进一步提高抗肿瘤作用。利用αcd7/evs/cytc/sibcl2可以实现cd7+molt-4细胞和肿瘤的精准靶向，通过其装载的cytc和sibcl2可诱导molt-4细胞凋亡，抑制肿瘤生长。