一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法及应用

本发明属于药物制剂制备，具体涉及一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法及应用。

背景技术：

1、恶性肿瘤严重危害着人类健康和生命，其发病和死亡人数仍保持较高水平。据国际癌症研究机构公布的最新数据(globocan 2022)显示，女性乳腺癌发病人数占癌症总发病人数的11.5％，仅次于肺癌(12.4％)，乳腺癌死亡人数占癌症总死亡人数的6.9％，居第四位癌症的发生发展具有高度复杂性，癌症的治疗一直是亟待解决的世界难题。近年来，细胞死亡的机制以及调控癌症细胞死亡的治疗策略一直被广泛的研究。细胞死亡是一种基本的生物学过程，细胞死亡途径包括细胞凋亡(apoptosis)、坏死性凋亡(necroptosis)、自噬(autophagy)、铁死亡(ferroptosis)、细胞焦亡(pyroptosis)、坏死(necrosis)、免疫原性细胞死亡(immunogenic celldeath，icd)和双硫死亡(disulfidptosis)。双硫死亡作为一种非凋亡性细胞死亡机制，因其对癌细胞的细胞毒性作用而在癌症治疗领域受到了广泛关注。

2、双硫死亡是细胞内胱氨酸或其他二硫化物积累引起的二硫化物应激引起的细胞死亡模式。一般说来，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adeninedinucleotide phosphate，nadph)提供的还原能力抵消二硫键的压力并维持细胞内稳态。然而，在一定条件下，如氧化损伤、还原型谷胱甘肽(glutathione，gsh)的减少，细胞内nadph被过度消耗，导致二硫键积累，触发肌动蛋白细胞骨架蛋白之间二硫键的形成和肌动蛋白丝(f-actin)网络塌陷，细胞骨架收缩以及与细胞质膜的剥离，最终导致双硫死亡。在此过程中，细胞中过量活性氧(reactive oxygen species，ros)引起的脂质过氧化(lipidperoxidation，lpo)的积累被认为是nadph消耗的标志，胱氨酸的积累是诱导双硫死亡的主要因素。因此，采取有效的策略，提高癌细胞胞内ros水平，有效诱导双硫死亡，可能为抗癌研究提供另一种思路。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法及应用。

2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法，包括以下步骤，

4、s1、分别称量二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-2000(dspe-peg2000)、胆固醇、二氢卟吩e6(ce6)、索拉非尼(sora)；

5、s2、将二氢卟吩e6与索拉非尼溶解于甲醇溶液中，再将二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-2000(dspe-peg2000)，胆固醇溶解于三氯甲烷中；

6、s3、混合上述两种溶液，溶解后转移至圆底烧瓶中；

7、s4、将圆底烧瓶置于蒸发仪上，蒸发后圆底烧瓶底部形成墨绿色的薄膜；

8、s5、向烧瓶内加入磷酸盐缓冲液(pbs)，并震荡使薄膜脱落，而后转移至离心管中，向离心管内加入全氟正己烷(pfh)，并在冰浴条件下超声乳化形成均匀乳液；

9、s6、离心法去除未包载的药物，弃上清液后得成品，并用磷酸盐缓冲液(pbs)重悬于4℃条件下保存。

10、进一步地，所述步骤s1中，二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-2000(dspe-peg2000)、胆固醇、二氢卟吩e6、索拉非尼的质量比为3：1：1：1：1。

11、进一步地，所述步骤s2中，所述步骤s2中，甲醇含量为0.8-1.2ml；三氯甲烷含量为7-9ml。

12、进一步地，所述步骤s4中，蒸发仪的温度为42-48℃，转速为120rpm，旋转蒸发时间为30min。

13、进一步地，所述步骤s5中，磷酸盐缓冲液(pbs)含量为4-6ml；全氟正己烷(pfh)含量为190-210μl。

14、进一步地，根据权利要求5所述的一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s6中，酸盐缓冲液(pbs)含量为4-6ml；去除未包载药物时的离心条件为8000rpm，离心5min。

15、进一步地，所述的负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体，联合超声用于治疗乳腺癌。

16、本发明的有益效果在于：

17、1、本发明通过旋转蒸发-超声乳化法成功制备了共载索拉非尼和二氢卟吩e6脂质体，即sc@lip。可通过epr效应靶向肿瘤部位，减轻药物的全身毒性反应。

18、2、使用高效液相色谱证实sora和二氢卟吩e6在sc@lip中具有较高的包封效率，为后面进行体内体外抗肿瘤研究的提供了基本条件。

19、3、本发明通过1,3-二苯基异苯丙呋喃(dpbf)探针，证实了sc@lip在超声的照射下，能够产生1o2，而且1o2的产量随着超声辐照的时间延长而增加，说明sc@lip保留了二氢卟吩e6优异的声敏特性。

20、监测平均粒径至28天，发现平均粒径无明显改变，这进一步说明sc@lip具有良好的稳定性，有利于后续的实验研究。

21、本发明的其他优点、目标和特征将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上对本领域技术人员而言是显而易见的，或者本领域技术人员可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。

技术特征：

1.一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

2.根据权利要求1所述的一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中，二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-2000(dspe-peg2000)、胆固醇、二氢卟吩e6、索拉非尼的质量比为3：1：1：1：1。

3.根据权利要求2所述的一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中，所述步骤s2中，甲醇含量为0.8-1.2ml；三氯甲烷含量为7-9ml。

4.根据权利要求3所述的一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中，蒸发仪的温度为42-48℃，转速为120rpm，旋转蒸发时间为30min。

5.根据权利要求4所述的一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s5中，磷酸盐缓冲液(pbs)含量为4-6ml；全氟正己烷(pfh)含量为190-210μl。

6.根据权利要求5所述的一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s6中，酸盐缓冲液(pbs)含量为4-6ml；去除未包载药物时的离心条件为8000rpm，离心5min。

7.一种如权利要求1-6任意一项所述的负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体，联合超声用于治疗乳腺癌。

技术总结本发明公开了一种负载索拉非尼与二氢卟吩e6脂质体的制备方法及应用，属于药物制剂制备技术领域，将二氢卟吩e6与索拉非尼溶于甲醇中，将二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇‑2000、胆固醇溶解于三氯甲烷中；混合两种溶液溶解后转移至圆底烧瓶中；蒸发后圆底烧瓶底部形成薄膜；向烧瓶内加入磷酸盐缓冲液，并震荡使薄膜脱落，而后转移至离心管中，向离心管内加入全氟正己烷，冰浴条件下超声乳化形成乳液；离心法去除未包载的药物，弃上清液后得成品，并用磷酸盐缓冲液重悬于4℃条件下保存。本发明成功制备了共载索拉非尼和二氢卟吩e6脂质体，联合超声可放大氧化应激触发癌细胞双硫死亡，实验证明可以用于乳腺癌的治疗。技术研发人员：向宏伟,李锐,申斌,张春美受保护的技术使用者：重庆医科大学技术研发日：技术公布日：2024/9/2