一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的特异组合物及方法与流程

本发明涉及食品检测，具体涉及一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的特异组合物及方法。

背景技术：

1、蜡样芽孢杆菌能引起不同类型的食物中毒，腹泻类型综合症和呕吐类型综合症，而苏云金芽孢杆菌对人体危害较小。但蜡样芽孢杆菌和苏云金芽胞杆菌生化特征较为类似，难以区分，建立一种快速检测方法区分二者就十分必要。

2、目前，国标法gb 4789.14-2014主要采用生化培养的方法进行鉴定苏云金芽胞杆菌，虽然这种方法能够直观明确的观察到菌体的各种特征，技术要求不高，成本低，但这种方法费时费力，需要进行菌株的分离、培养和鉴定，过程可能需要几天到几周，并且灵敏度低，难以检测低浓度的苏云金芽胞杆菌，主观性强，菌落形态鉴定依赖操作者的经验，存在误判风险。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的特异组合物及方法，以解决现有技术鉴定苏云金芽孢杆菌耗时长、灵敏度低、主管判定性强、过于依赖操作者的经验存在误判风险的问题。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的特异组合物，所述组合物能够用于检测食品中苏云金芽孢杆菌；所述引物组包括引物组和探针，具体如下：

4、bt-f1引物：gattcatgcggcagataaacgt

5、bt-r1引物：ttcttcaaaaatagccgcattg

6、bt-p1探针：fam-cttatctgcctgagctgtctgtgattccg-tamrar。

7、本发明还提供了一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物组。

8、优选地，所述试剂盒的反应体系中，引物和探针的添加量分别为0.1～0.5μl，引物和探针的浓度均为10μmol/l，苏云金芽孢杆菌dna模板的浓度为0.001～100ng/μl。

9、优选地，所述试剂盒的反应体系中，引物和探针的添加量分别为0.2μl，引物和探针的浓度均为10μmol/l，苏云金芽孢杆菌dna模板的浓度为10ng/μl。

10、本发明提供了一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的方法，具体包括如下步骤：

11、步骤1：从待测样品中提取dna模板；

12、步骤2：将步骤1提取出的dna模板放入上述试剂盒中进行扩增处理；

13、步骤3：实时荧光检测系统记录步骤2得到的扩增产物的荧光信号强度变化，获取荧光曲线，确定设定的时间内达到设定阈值所需的扩增循环数ct值，判断待测样品中是否含有植物源性成分。

14、优选地，所述试剂盒的反应体系中，bt-f1引物的浓度为0.04～0.2μmol/l，bt-r1引物的浓度为0.04～0.2μmol/l，bt-p1探针的浓度为0.04～0.2μmol/l，苏云金芽孢杆菌dna模板的浓度为0.001～100ng/μl；所述特异组合物与荧光定量扩增预混液、双蒸水配置成25μl的反应体系。

15、优选地，所述试剂盒的反应体系中，bt-f1引物的浓度为10μmol/l，bt-r1引物的浓度为10μmol/l，bt-p1探针的浓度为10μmol/l。

16、优选地，所述扩增处理的反应条件如下：94.0℃30s；94.0℃5s，60.0℃30s，循环39次。

17、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

18、本发明设计并获得了特异引物组，通过所述引物组能够显著提高对苏云金芽胞杆菌鉴别的准确率，将检测时间由现有技术所需的4-7d，缩短至8h。本发明所述检测方法能够快速鉴别出食品中苏云金芽胞杆菌，从而区分苏云金芽胞杆菌和蜡样芽孢杆菌，为食品检测提供参考数据。

技术特征：

1.一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的特异组合物，其特征在于，所述特异组合物能够用于检测食品中苏云金芽孢杆菌；所述特异组合物包括引物组和探针，具体如下：

2.一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述特异组合物。

3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系中，引物和探针的添加量分别为0.1～0.5μl，引物和探针的浓度均为10μmol/l，苏云金芽孢杆菌dna模板的浓度为0.001～100ng/μl。

4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系中，引物和探针的添加量分别为0.2μl，引物和探针的浓度均为10μmol/l，苏云金芽孢杆菌dna模板的浓度为10ng/μl。

5.一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述试剂盒的反应体系中，bt-f1引物的浓度为0.04～0.2μmol/l，bt-r1引物的浓度为0.04～0.2μmol/l，bt-p1探针的浓度为0.04～0.2μmol/l，苏云金芽孢杆菌dna模板的浓度为0.001～100ng/μl；所述特异组合物与荧光定量扩增预混液、双蒸水配置成25μl的反应体系。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述试剂盒的反应体系中，bt-f1引物的浓度为10μmol/l，bt-r1引物的浓度为10μmol/l，bt-p1探针的浓度为10μmol/l。

8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述扩增处理的反应条件如下：94.0℃30s；94.0℃5s，60.0℃30s，循环39次。

技术总结本发明公开了一种快速检测食品中苏云金芽胞杆菌的特异组合物及方法，本发明设计并获得了特异引物组，通过所述引物组能够显著提高对苏云金芽胞杆菌鉴别的准确率，将检测时间由现有技术所需的4‑7d，缩短至8h。本发明所述检测方法能够快速鉴别出食品中苏云金芽胞杆菌，从而区分苏云金芽胞杆菌和蜡样芽孢杆菌，为食品检测提供参考数据。技术研发人员：袁磊,刘明明,张明娟,秦爱,王娟,余秋地,肖昭竟,周朝旭受保护的技术使用者：重庆市计量质量检测研究院技术研发日：技术公布日：2024/9/2