一种噻唑磷半抗原、抗原合成方法及应用与流程

本发明涉及食品安全检测，特别涉及一种噻唑磷半抗原、抗原合成方法及应用。

背景技术：

1、噻唑磷是由日本石原产业公司开发的有机磷类杀线虫剂，主要作用方式为抑制根结线虫乙酰胆碱酯酶的合成，具有强烈的触杀活性，并对传统杀虫剂已产生抗性的一些害虫，也有很高的活性。噻唑磷主要用以防治线虫、蚜虫等，是为数不多的杀线虫产品之一，适用于无公害蔬菜的生产。对根结线虫、根腐线虫、茎线虫、胞囊线虫等各种线虫都有很好防效，具有很好的植物体传导作用，能防止侵入并对已侵入的线虫等有杀灭效果。在中国已取得了在黄瓜，番茄，西瓜上的登记，可广泛应用于蔬菜，香蕉，果树，药材等作物。可使用作物：胡萝卜、茄子、萝卜、山药、马铃薯、大蒜、甘薯、西瓜、香蕉和烟草等。

2、随着全社会对食品安全的关注，生产中防治根结线虫对杀虫剂的要求也越来越严格，而噻唑磷作为目前防治较好的高效低毒杀线虫剂，必将得到更好的推广应用。然而，噻唑磷长期连续使用可能会导致产生残留累积，对生态及食品安全产生潜在风险。目前我国已经建立番茄、黄瓜、西瓜、甘蔗等农产品中噻唑磷的残留限量标准。

3、一般传统上主要采用气相色谱(gc)、液质联用等物化方法对其残留进行检测。虽然这些传统的理化分析方法灵敏度较高，而且较为准确，但由于它们普遍操作繁琐复杂、成本较高、分析速度慢，所以难于满足实际分析的需要，因此迫切需要发展一种简单、快速、灵敏的分析技术。

4、而免疫分析技术正是一种快速、灵敏、操作简单、费用低的检测技术。其基本原理认为：抗原抗体的免疫反应涉及分子间的立体结构，电荷、氢键及范德华引力作用等诸多因素，具有极高特异性和灵敏性，遵循质量作用定律，不仅可体内进行，也可体外进行，这些特点使其能被利用建立免疫分析方法，可达到传统理化分析技术无法达到的选择性和灵敏度。所以，免疫分析为噻唑磷残留研究提供了一条新的分析检测途径。

技术实现思路

1、为了解决上述全部或部分问题，本发明目的在于合成了小分子目标分析物半抗原，并与载体蛋白质偶联，制备有效人工抗原，免疫动物制备对小分子分析物特异性抗体，利用抗原抗体的特异性免疫学反应和易被检测识别的标记物的放大作用，从而定性定量的检测样本中超微量小分子目标物，可用于样本测定。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种噻唑磷半抗原合成方法，包括如下步骤：

3、s1:在碱性条件下，将三氯氧磷与1,3-噻唑烷-2-酮发生反应，得到中间体1，中间体1具有结构式；

4、s2:碱性条件下，使中间体1与乙醇发生反应，得到中间体2，中间体2具有结构式；

5、s3:在碱性条件下，将中间体2与4巯基戊酸发生反应，得到噻唑磷半抗原。

6、进一步的，碱性条件由碳酸氢钠提供，三氯氧磷、乙醇、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.2:1.5；反应在溶剂中进行，溶剂为二氯甲烷；反应条件为0℃以下，搅拌反应2h。

7、进一步的，碱性条件由氢氧化钠提供，中间体1、1,3-噻唑烷-2-酮、氢氧化钠的摩尔比为1:1.2:1.5；反应条件为0~5℃，搅拌反应8h。

8、进一步的，s3中，碱性条件由koh提供，溶剂为甲苯，反应条件为室温搅拌反应4h。

9、进一步的，噻唑磷半抗原合成的噻唑磷半抗原合人工抗原方法，具体步骤如下：

10、s4:采用活性酯法将载体蛋白偶联于噻唑磷半抗原的羧基上。

11、进一步的，噻唑磷半抗原合成的噻唑磷半抗原合成抗原方法，载体蛋白为牛血清白蛋白或血蓝蛋白。

12、进一步的，识别噻唑磷的特异性抗体，噻唑磷人工抗原经动物免疫和细胞融合得到。

13、进一步的，噻唑磷抗体的食品安全检测上应用，用于检测农药噻唑磷食品中残留。

14、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

15、本发明提出的一种噻唑磷半抗原、抗原合成方法及应用，本合成了小分子目标分析物半抗原，并与载体蛋白质偶联，制备有效人工抗原，免疫动物制备对小分子分析物特异性抗体，利用抗原抗体的特异性免疫学反应和易被检测识别的标记物的放大作用，从而定性定量的检测样本中超微量小分子目标物，可用于样本测定，从头合成了一种保留其全部结构并能突出其立体空间结构的半抗原，进一步偶联不同载体蛋白分别作为人工免疫原和包被原，进而制备族特异性抗体，其具有灵敏度高，特异性好。

技术特征：

1.一种噻唑磷半抗原合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1的一种噻唑磷半抗原合成方法，其特征在于，s1中，碱性条件由碳酸氢钠提供，三氯氧磷、乙醇、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.2:1.5；反应在溶剂中进行，溶剂为二氯甲烷；反应条件为0℃以下，搅拌反应2h。

3.如权利要求1的一种噻唑磷半抗原合成方法，其特征在于，s2中，碱性条件由氢氧化钠提供，中间体1、1,3-噻唑烷-2-酮、氢氧化钠的摩尔比为1:1.2:1.5；反应条件为0~5℃，搅拌反应8h。

4.如权利要求1的一种噻唑磷半抗原、抗原合成方法，其特征在于，s3中，碱性条件由koh提供，溶剂为甲苯，反应条件为室温搅拌反应4h。

5.一种如权利要求1的噻唑磷半抗原合成的噻唑磷半抗原合人工抗原方法，其特征在于，具体步骤如下：

6.如权利要求5的一种噻唑磷半抗原合成的噻唑磷半抗原合成抗原方法，其特征在于，载体蛋白为牛血清白蛋白或血蓝蛋白。

7.一种如权利要求5的识别噻唑磷的特异性抗体，其特征在于，噻唑磷人工抗原经动物免疫和细胞融合得到。

8.一种如权利要求1-7的噻唑磷抗体的食品安全检测上应用，其特征在于，用于检测农药噻唑磷食品中残留。

技术总结一种噻唑磷半抗原、抗原合成方法及应用，涉及食品安全检测技术领域，本合成了小分子目标分析物半抗原，并与载体蛋白质偶联，制备有效人工抗原，免疫动物制备对小分子分析物特异性抗体，利用抗原抗体的特异性免疫学反应和易被检测识别的标记物的放大作用，从而定性定量的检测样本中超微量小分子目标物，可用于样本测定，从头合成了一种保留其全部结构并能突出其立体空间结构的半抗原，进一步偶联不同载体蛋白分别作为人工免疫原和包被原，进而制备族特异性抗体，其具有灵敏度高，特异性好。技术研发人员：朱永利,何秀平,马文娟,商佳琦,刘敏博,朱育先受保护的技术使用者：深圳市绿诗源生物技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/2