中药材中黄曲霉毒素检测方法与流程

本发明涉及检测方法领域，具体涉及中药材中黄曲霉毒素检测方法。

背景技术：

1、黄曲霉毒素(aft)是已知的化学物质中致癌性最强的一种,对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。延胡索、全蝎、柏子仁等多种药材及饮片中黄曲霉毒素较为多见，在国家药品监督抽检和企业内控中，都需要开展检测。

2、《中华人民共和国药典》2020版四部通则2351黄曲霉毒素测定第二法(液相色谱-串联质谱法)在前处理中的净化步骤需要使用免疫亲和柱进行加液，过柱洗脱，先弃去水洗脱液，再收集甲醇洗脱液等。

3、标准上净化过程缺陷较为明显：1、需要使用免疫亲和柱、真空泵等，目前市场上免疫亲和柱需要60元左右一根，平行双样需要120元，成本较高；2、用免疫亲和柱过柱容易损耗，回收率偏低；3、净化过程的时间较长，无法快速净化，影响检测效率。4、净化步骤较多且复杂，对检验人员的技术要求高，容易导致结果偏差大。

4、为了解决上述问题，申请人提出中药材中黄曲霉毒素检测方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供中药材中黄曲霉毒素检测方法，以解决现有技术中的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：中药材中黄曲霉毒素检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

3、s1、取供试品粉末精密称量后置于均质瓶中；

4、s2、加入氯化钠和70％甲醇溶液并进行高速搅拌，并离心五分钟；

5、s3、静置，取上清液15ml置入50ml量瓶，用水稀释至刻度，再离心十分钟，取上清液备用；

6、s4、对上清液容器中加入吸附剂，并进行离心；所述吸附剂包括psa50mg、c18色谱柱填料50mg，无水硫酸镁900mg

7、s5、取s4步骤净化后上清液于试管中，过0.22μm滤膜过滤，取滤液用流动相定容1.00ml；

8、s6、设置质谱条件，上机检测。

9、可选的所述的供试品粉末与氯化钠重量比例为5:1。

10、可选的所述的高速搅拌速度为大于11000r/min，所述的离心速度为4000r/min。

11、可选的，所述的质朴条件设置为：离子源：esi+，雾化气流量：10l/min，雾化器温度：300℃，鞘气流量：12l/min，鞘气温度：350℃；

12、色谱柱类型：agilent c183.0×50mm，2.7μm，柱温：25℃，进样体积5μl，流速：0.3ml/min流动相a：10mmol/l醋酸铵铵，流动相b：甲醇。

13、可选的，所述s6步骤还需要制作标准溶液用于进行质谱检测，具体步骤如下:

14、s7、精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(1μg/ml)0.50ml至50ml容量瓶，用70％甲醇溶液定容；

15、s8、储备溶液可用棕色试剂瓶保存,在-20℃下避光保存；

16、s9、准确移取标准储备溶液(10ng/ml)0.5ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml、10.0ml、至10ml容量瓶中,用70％甲醇溶液定容,配制完成浓度点为0.50μg/l、1.00μg/l、2.00μg/l、4.00μg/l、10.00μg/l的系列工作溶液。

17、有益效果：本前处理方法采用快速净化过程，将黄曲霉毒素用70％甲醇溶液提取后，用吸附剂(psa，c18，无水硫酸镁)净化，涡旋，离心，取净化液过有机相滤膜，上机测试。避免了免疫亲和柱，不但时间较原来缩短很多，而且由于过程简单，降低结果偏离的几率并提高回收率，并且由于过程简单，一般检验人员就能准确掌握。同时由于不用使用免疫亲和柱和真空泵，大大降低了检测的成本。

技术特征：

1.中药材中黄曲霉毒素检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的中药材中黄曲霉毒素检测方法，其特征在于，所述的供试品粉末与氯化钠重量比例为5:1。

3.根据权利要求1所述的中药材中黄曲霉毒素检测方法，其特征在于，所述的高速搅拌速度为大于11000r/min，所述的离心速度为4000r/min。

4.根据权利要求1所述的中药材中黄曲霉毒素检测方法，其特征在于，所述的质朴条件设置为：离子源：esi+，雾化气流量：10l/min，雾化器温度：300℃，鞘气流量：12l/min，鞘气温度：350℃；

5.根据权利要求1所述的中药材中黄曲霉毒素检测方法，其特征在于，所述s6步骤还需要制作标准溶液用于进行质谱检测，具体步骤如下:

技术总结中药材中黄曲霉毒素检测方法，具体包括以下步骤：S1、取供试品粉末精密称量后置于均质瓶中；S2、加入氯化钠和70％甲醇溶液并进行高速搅拌，并离心五分钟；S3、静置，取上清液15mL置入50mL量瓶，用水稀释至刻度，再离心十分钟，取上清液备用；S4、对上清液容器中加入吸附剂，并进行离心；所述吸附剂包括、C18色谱柱填料，无水硫酸镁、取净化后上清液于试管中，过0.22μm滤膜过滤，取滤液用流动相定容1.00mL；S6、设置质谱条件，上机检测。本前处理方法采用快速净化过程避免了免疫亲和柱，缩短实验时间，而且由于过程简单，降低结果偏离的几率并提高回收率，由于过程简单，一般检验人员就能准确掌握。同时由于不用使用免疫亲和柱和真空泵，降低了检测的成本。技术研发人员：邹小玲,吴卿,柯洋洋,夏雪受保护的技术使用者：国检测试控股集团（安徽）拓维检测服务有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/9