一种灵芝酸类化合物丹芝酸E抑制肿瘤细胞增殖的应用的制作方法

本发明涉及医药领域，具体涉及一种灵芝酸类化合物丹芝酸e抑制肿瘤细胞增殖的应用。

背景技术：

1、灵芝是一种具有多种生物活性的药用真菌，其主要活性成分有灵芝多糖、灵芝三萜、核苷类、甾醇类及蛋白质等，具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、保肝、抗衰老、抗氧化、抗炎等作用。目前，已经从灵芝中分离出400多种不同的化学实体，其中，灵芝多糖和三萜类化合物是灵芝的主要成分，而灵芝三萜中的灵芝酸具有重要的药理价值。灵芝酸是一类高度氧化的羊毛甾烷型四环三萜类次级代谢产物，具有降血压、降血脂、护肝、抗氧化、抗癌等多种生物学功能，是开发抗癌药物的重要先导性化合物。目前灵芝酸人工合成可以提高其产量和纯度，一直是研究的热点问题。

2、书籍：徐宏喜，冯奕斌，朱国福.抗肿瘤中药现代研究与临床应用[m].上海：上海科学技术出版社,2018:668.记载了从灵芝的子实体、菌丝体、孢子粉以及发酵液的提取物中分离得到的100余种三萜类成分，多数为高度氧化的羊毛甾烷衍生物，已确定的结构中包括丹芝酸e。丹芝酸e，分子式为c30h44o5，该成分是和合成其它有显著抗肿瘤活性灵芝酸的关键中间体，但现有技术目前对于该成分的研究较少，尚未发现有丹芝酸e在抑制多种肿瘤细胞增殖层面的研究。

3、针对现有技术存在的问题，寻找一种灵芝酸类化合物丹芝酸e的新用途，从而拓展该成分的应用范围较为必要。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种灵芝酸类化合物丹芝酸e抑制肿瘤细胞增殖的应用，该丹芝酸e能够有效抑制多种肿瘤细胞，包括人肝癌细胞、人胰腺癌细胞、人神经胶质瘤细胞、人骨肉瘤细胞、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞、人宫颈癌细胞、人前列腺癌细胞和人结肠癌细胞等。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、本发明提供的丹芝酸e能够用于制备抑制肿瘤细胞增殖的产品。

4、进一步地，所述肿瘤细胞包括人肝癌细胞、人胰腺癌细胞、人神经胶质瘤细胞、人骨肉瘤细胞、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞、人宫颈癌细胞、人前列腺癌细胞和人结肠癌细胞中的一种或多种。

5、进一步地，所述人肝癌细胞包括hepg2细胞、hlf细胞和lm3细胞中的一种或多种，所述人胰腺癌细胞包括panc1细胞、mia paca-2细胞、bxpc-3细胞、sw-1990细胞和8988t/gem细胞中的一种或多种，所述人前列腺癌细胞包括pc-3细胞和/或du145细胞，所述人神经胶质瘤细胞包括u87细胞，所述人骨肉瘤细胞包括u2os细胞，所述人恶性胚胎横纹肌瘤细胞包括rd细胞，所述人宫颈癌细胞包括hela细胞，所述人结肠癌细胞包括ht-29细胞。

6、值得说明的是，本发明中记载的“8988t/gem细胞”具体指对吉西他滨(gem)耐药的8988t细胞。

7、优选地，所述肿瘤细胞为人宫颈癌细胞和/或人结肠癌细胞。

8、优选地，所述肿瘤细胞包括hela细胞和/或ht-29细胞。

9、进一步地，所述丹芝酸e利用米曲霉异源合成制得。

10、在一些具体的实施方式中，所述丹芝酸e的合成方法包括以下步骤：

11、在生产hldoa(灵芝酸)的米曲霉菌株中，导入参与灵芝酸前体生物合成的后修饰cyp450基因。通过对代谢产物的检测与鉴定，确定细胞色素p450氧化酶能够催化c11和c15位的氧化反应，从而催化hldoa生成丹芝酸e。

12、值得说明的是，本发明选用的利用米曲霉异源合成制得的丹芝酸e亦可替换为其他方式合成的丹芝酸e或天然提取的丹芝酸e。

13、进一步地，所述丹芝酸e在产品中的浓度为20-100μm。

14、优选地，当所述肿瘤细胞为人肝癌细胞时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为40-100μm；当所述肿瘤细胞人胰腺癌细胞为时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为40-100μm；当所述肿瘤细胞为人神经胶质瘤细胞、人骨肉瘤细胞或人恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为40-100μm；当所述肿瘤细胞为人宫颈癌细胞或人结肠癌细胞时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为20-100μm；当所述肿瘤细胞为人前列腺癌细胞时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为40-100μm；

15、进一步地，所述丹芝酸降低肿瘤细胞活性通过ic50值体现：添加丹芝酸处理后肿瘤细胞后，hepg2细胞的ic50值为66.28μm，lm3细胞的ic50值为93.35μm，hlf细胞的ic50值为67.61μm；panc1细胞的ic50值为170.2μm，mia paca-2细胞的ic50值为54.79μm，bxpc-3细胞的ic50值为51.81μm，sw-1990细胞的ic50值为132.0μm，8988t/gem细胞的ic50值为105.7μm；u2os细胞的ic50值为80.60μm；rd细胞的ic50值为85.46μm；hela细胞的ic50值为34.16μm；u87细胞的ic50值为81.73μm；pc-3细胞的ic50值为92.63μm，du145细胞的ic50值为343.3μm；ht-29细胞的ic50值为30.83μm。

16、进一步地，所述产品包括药物。

17、进一步地，所述药物的成分包括丹芝酸e和药学上可接受的辅料。

18、进一步地，所述药物的剂型包括口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂、膏剂、粉剂、注射剂、喷雾剂或丸剂。

19、本发明所取得的技术效果是：

20、本发明发现了丹芝酸e的新用途，该的丹芝酸e利用米曲霉异源合成制得，能够有效抑制多种肿瘤细胞，包括人肝癌细胞、人胰腺癌细胞、人神经胶质瘤细胞、人骨肉瘤细胞、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞、人宫颈癌细胞、人前列腺癌细胞和人结肠癌细胞等。

技术特征：

1.丹芝酸e在制备抑制肿瘤细胞增殖的产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肿瘤细胞包括人肝癌细胞、人胰腺癌细胞、人神经胶质瘤细胞、人骨肉瘤细胞、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞、人宫颈癌细胞、人前列腺癌细胞和人结肠癌细胞中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述人肝癌细胞包括hepg2细胞、hlf细胞和lm3细胞中的一种或多种，所述人胰腺癌细胞包括panc1细胞、mia paca-2细胞、bxpc-3细胞、sw-1990细胞和8988t/gem细胞中的一种或多种，所述人前列腺癌细胞包括pc-3细胞和/或du145细胞，所述人神经胶质瘤细胞包括u87细胞，所述人骨肉瘤细胞包括u2os细胞，所述人恶性胚胎横纹肌瘤细胞包括rd细胞，所述人宫颈癌细胞包括hela细胞，所述人结肠癌细胞包括ht-29细胞。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肿瘤细胞为人宫颈癌细胞和/或人结肠癌细胞。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述丹芝酸e利用米曲霉异源合成制得。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述丹芝酸e在产品中的浓度为20-100μm。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：当所述肿瘤细胞为人肝癌细胞时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为40-100μm；当所述肿瘤细胞人胰腺癌细胞为时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为40-100μm；当所述肿瘤细胞为人神经胶质瘤细胞、人骨肉瘤细胞或人恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为40-100μm；当所述肿瘤细胞为人宫颈癌细胞或人结肠癌细胞时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为20-100μm；当所述肿瘤细胞为人前列腺癌细胞时，所述丹芝酸e在产品中的浓度为40-100μm。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品包括药物。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述药物的成分包括丹芝酸e和药学上可接受的辅料。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述药物的剂型包括口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂、膏剂、粉剂、注射剂、喷雾剂或丸剂。

技术总结本发明提供了一种灵芝酸类化合物丹芝酸E抑制肿瘤细胞增殖的应用，涉及医药领域，该丹芝酸E利用米曲霉异源合成制得，能够有效抑制多种肿瘤细胞，包括人肝癌细胞、人胰腺癌细胞、人神经胶质瘤细胞、人骨肉瘤细胞、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞、人宫颈癌细胞、人前列腺癌细胞和人结肠癌细胞等。技术研发人员：李振皓,李明焱,滕春波,徐靖,梁洋,周莎莎,崔润姿,刘成伟受保护的技术使用者：浙江寿仙谷医药股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/9