用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体和抗体对及其应用的制作方法

本发明涉及免疫学检测，特别涉及用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体和抗体对及其应用。

背景技术：

1、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1，mcp-1)，也称趋化因子(ccl2)，是cc趋化因子家族的小分子量细胞因子。mcp-1在人类基因组中位于17号染色体，编码一种99个氨基酸的单体多肽，理论分子量为11kd，小鼠的mcp-1由148aa组成，理论大小为16kd。human/mouse mcp-1均存在糖基化修饰位点。mcp-1通过蛋白聚糖的粘多糖侧链锚定到内皮细胞的质膜上，主要由单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞分泌，星形胶质细胞和小胶质细胞也被认为是mcp-1的来源。mcp-1的主要生物学功能是招募单核细胞、记忆性t细胞和树突状细胞到组织损伤或感染引起的炎症位点，这种迁移过程在炎症反应、组织修复和免疫应答等生理和病理过程中发挥重要作用。

2、mcp-1在多种病理过程中扮演重要角色。在适应性免疫反应中，炎症刺激会激活mcp-1的表达，维持并加剧th17细胞向特定位置募集，随后产生炎性细胞因子。因此，mcp-1与许多炎症和神经退行性疾病有关，如动脉粥样硬化、多发性硬化症、哮喘、神经性疼痛、糖尿病肾病。例如，心脏病和糖尿病患者的炎症反应常常会导致mcp-1的大量产生和释放，从而诱导单核细胞和巨噬细胞的趋化至皮损现场，最终导致组织受损和器官损伤。此外，mcp-1在肿瘤微环境中具有恶性作用。mcp-1与其受体ccr2在肿瘤发展过程中受到来自肿瘤细胞的tnf-α刺激，进一步招募肿瘤相关巨噬细胞，帮助癌症细胞逃离免疫系统，促进肿瘤进展。例如mcp-1的过表达会增强乳腺癌小鼠模型4t1的癌细胞生长、侵袭和转移；在前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、胃癌、肾细胞癌、肺癌、结肠癌和甲状腺乳头状癌均检测到mcp-1过表达。因此，定量检测外周血、尿液等生物样本中mcp-1水平，对于诊断某些疾病的早期诊断、预后及疗效观察具有一定的临床价值。

3、mcp-1的免疫学检测是在特异性抗mcp-1单克隆抗体的基础上建立的用于对生物样本中的mcp-1进行定性定量分析的有效方法，应用不同的单克隆抗体标记物和检测技术，可建立多种检测方法，如酶免疫分析法(eia)、酶联免疫吸附法(elisa)、流式细胞术(fcm)等。但是，现有技术中制备的抗mcp-1抗体，存在抗体特异性不高、检测灵敏度低与可靠性不足等问题，在应用于上述检测方法时往往效果不佳。因此，筛选出高特异性、高亲和力结合mouse mcp-1的单克隆抗体具有十分重要的实际应用价值。

技术实现思路

1、针对现有技术存在抗体特异性不高、检测灵敏度低和/或检测可靠性等问题，本发明提供了两株高亲和力和高特异性的抗鼠mcp-1兔源抗体及其组成的抗体对，用于免疫配对检测鼠单核细胞趋化蛋白1具有良好的检测特异性、极高的检测灵敏度和准确性好等优势，由此，本发明还提供了前述抗体和抗体对在制备鼠mcp-1检测试剂盒中的应用，并提供了含有前述抗体和抗体对的检测试剂盒。

2、本发明具体通过以下技术方案实现：

3、本发明第一方面提供了一种用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体，选自第一抗体或第二抗体，其中：所述第一抗体轻链可变区上cdr1-3的氨基酸序列分别如seq idno.3-5所示，重链可变区上cdr1-3的氨基酸序列分别如seq id no.8-10所示；所述第二抗体轻链可变区上cdr1-3的氨基酸序列分别如seq id no.13-15所示，重链可变区上cdr1-3的氨基酸序列分别如seq id no.18-20所示。

4、进一步地，所述第一抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示；所述第二抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq idno.12所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.17所示。

5、进一步地，所述第一抗体轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，重链的氨基酸序列如seq id no.6所示；所述第二抗体轻链的氨基酸序列如seq id no.11所示，重链的氨基酸序列如seq id no.16所示。

6、更进一步地，所述第一抗体和所述第二抗体的所述轻链恒定区为κ链，所述重链恒定区为igg1型。

7、进一步地，所述第一抗体和/或所述第二抗体为全长抗体或为所述全长抗体的抗原结合区域；所述抗原结合区域选自fab、f(ab)2、fab’、f(ab’)2、fv、(fv)2、scfv或sc(fv)2。

8、本发明第二方面提供了一种核酸分子、包含所述核酸分子的重组载体或包含所述核酸分子的宿主细胞，所述核酸分子编码如上所述的第一抗体或第二抗体。

9、本发明第三方面提供了一种用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体对，由如上所述的第一抗体和第二抗体组成。

10、本发明第四方面提供了如上所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体或抗体对在制备鼠单核细胞趋化蛋白1检测试剂盒中的应用。

11、本发明第五方面提供了一种用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括如上所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体或抗体对。

12、进一步地，所述检测试剂盒为双抗夹心酶连免疫吸附试剂盒，包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体作为捕获抗体，修饰有检测标记的所述第二抗体作为检测抗体。

13、与现有技术相比，本发明的优点及积极效果为：

14、1、本发明提供的含有上述cdr序列的抗体能够特异性识别和结合鼠单核细胞趋化蛋白1，且抗体亲和力高，亲和常数kd均在0.1nm水平，为建立定量检测鼠mcp-1蛋白提供了关键的抗体材料。

15、2、本发明提供的两个抗体识别鼠单核细胞趋化蛋白1蛋白表面不同的抗原表位，能够形成双抗夹心酶联免疫吸附检测体系，为准确、高效检测样品中微量水平的鼠mcp-1蛋白提供了一种可行性和可靠性的方法。

技术特征：

1.一种用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体，其特征在于，选自第一抗体或第二抗体，其中：

2.根据权利要求1所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体，其特征在于，所述第一抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的氨基酸序列如seq idno.7所示；

3.根据权利要求2所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体，其特征在于，所述第一抗体轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，重链的氨基酸序列如seq id no.6所示；

4.根据权利要求3所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体，其特征在于，所述第一抗体和所述第二抗体的所述轻链恒定区为κ链，所述重链恒定区为igg1型。

5.根据权利要求1所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体，其特征在于，所述第一抗体和/或所述第二抗体为全长抗体或为所述全长抗体的抗原结合区域；

6.一种核酸分子、包含所述核酸分子的重组载体或包含所述核酸分子的宿主细胞，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1-5任一项所述的第一抗体或第二抗体。

7.一种用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体对，其特征在于，由如权利要求1-5任一项所述的第一抗体和第二抗体组成。

8.如权利要求1-5任一项所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体或如权利要求7所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体对在制备鼠单核细胞趋化蛋白1检测试剂盒中的应用。

9.一种用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括如权利要求1-5任一项所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体或如权利要求7所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体对。

10.根据权利要求9所述的用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒为双抗夹心酶连免疫吸附试剂盒，包括第一抗体和第二抗体，且所述第一抗体作为捕获抗体，修饰有检测标记的所述第二抗体作为检测抗体。

技术总结本发明属于免疫学检测技术领域，尤其涉及用于检测鼠单核细胞趋化蛋白1的抗体和抗体对及其应用。所述抗体为第一抗体或第二抗体，第一抗体轻链上CDR1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3‑5所示，重链上CDR1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8‑10所示；第二抗体轻链上CDR1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.13‑15所示，重链上CDR1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.18‑20所示。本发明提供的抗体对鼠单核细胞趋化蛋白1具有高亲和力和高特异性，用于免疫配对检测鼠单核细胞趋化蛋白1具有良好的检测特异性、极高的检测灵敏度和准确性好等优势。技术研发人员：李琦,王新文,吴海,黄长青,张莹,谢志文受保护的技术使用者：武汉爱博泰克生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/12