子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测的PCR引物探针组合、试剂盒及其应用的制作方法

本发明涉及子宫内膜良恶性病变检测，尤其涉及一种子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测的pcr引物探针组合、试剂盒及其应用。

背景技术：

1、子宫内膜癌是发生于子宫内膜的一种常见的上皮性恶性肿瘤，好发于围绝经期及绝经后的妇女，约占妇科恶性肿瘤的20％-30％。

2、子宫内膜癌治疗效果与临床分期密切相关，早期病患通常有较好的预后。早期(ⅰ期、ⅱ期)子宫内膜癌患者五年生存率大于70％，随着疾病的进展发生局部扩散(ⅲ期)或远处转移(ⅳ期)，ⅲ期患者的五年生存率约为40-50％，而ⅳ期患者的五年生存率仅为15-20％。因此，实现子宫内膜癌的早期诊断对癌症预防、改善患者预后和提高生存率都具有重要意义。

3、目前对于子宫内膜癌早期检测的方法，临床上主要采用影像学检查、血清肿瘤标志物ca125、细胞学检测、及 “金标准”方法诊断性刮宫和宫腔镜下活检，但均存在一定的缺陷。影像学检查和实验室检查的灵敏度和特异度均较低，影像学检查对早期癌变无法有效检出，血清肿瘤标志物ca125对子宫内膜癌和良性子宫病变患者检出的阳性率低，由于子宫内膜病变具有多灶性，活检存在一定的假阴性，且子宫内膜活检是一种有创性操作，易造成身体不适，患者的依从性不高。因此，目前亟需开发一种方便快捷并能早期精准识别内膜癌的无创检测手段。

技术实现思路

1、本发明提供了一种子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测的pcr引物探针组合，包括由以下1）-4）所示的核酸序列组成：

2、1）cdo1基因甲基化检测的pcr引物及探针，包括如seq id no.1所示的前引物、如seq id no.2所示的后引物、如seq id no.3所示的荧光探针；

3、2）celf4基因甲基化检测的pcr引物及探针，包括如seq id no.4所示的前引物、如seq id no.5所示的后引物、如seq id no.6所示的荧光探针；

4、3）znf486基因甲基化检测的pcr引物及探针，包括如seq id no.7所示的前引物、如seq id no.8所示的后引物、如seq id no.9所示的荧光探针；

5、4）zscan12基因甲基化检测的pcr引物及探针，包括如seq id no.10所示的前引物、如seq id no.11所示的后引物、如seq id no.12所示的荧光探针。

6、进一步的，还包括检测内参基因gapdh的pcr引物及探针，所述引物包括如seq idno.13所示的前引物、如seq id no.14所示的后引物，所述探针包括如seq id no.15所示的荧光探针。

7、进一步的，所述荧光探针的5’端包含有荧光报告基团，所述荧光报告基团包括fam、vic、hex、tet、cy5、rox、joe或cy3中的任意一种。

8、进一步的，所述荧光探针的3’端包含有荧光淬灭基团，所述荧光淬灭基团包括bhq1、bhq2、bhq3、tamra、dabcyl或mgb中的任意一种。

9、本发明还提供了一种子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测试剂盒，所述试剂盒包括如上述所述的pcr引物探针组合。

10、本发明还提供了一种如上述所述的子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测的pcr引物探针组合在制备检测子宫内膜癌试剂盒中的应用。

11、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

12、与子宫内膜活检比较，本发明的检测方法使用宫颈脱落细胞，属于无创检测，能提高患者的接受度；与子宫内膜细胞学检测比较，本发明的检测方法对人员要求更低，操作更便捷，更易进行技术的推广；与影像学和血清肿瘤标志物检测比较，本发明的方法可为子宫内膜癌的早期临床诊断提供更高的检测灵敏度和特异度。

13、除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本发明作进一步详细的说明。

技术特征：

1.子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测的pcr引物探针组合，其特征在于，包括由以下1）-4）所示的核酸序列组成：

2.根据权利要求1所述的pcr引物探针组合，其特征在于，还包括检测内参基因gapdh的pcr引物及探针，所述引物包括如seq id no.13所示的前引物、如seq id no.14所示的后引物，所述探针包括如seq id no.15所示的荧光探针。

3.根据权利要求1或2所述的pcr引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针的5’端包含有荧光报告基团，所述荧光报告基团包括fam、vic、hex、tet、cy5、rox、joe或cy3中的任意一种。

4.根据权利要求1或2所述的pcr引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针的3’端包含有荧光淬灭基团，所述荧光淬灭基团包括bhq1、bhq2、bhq3、tamra、dabcyl或mgb中的任意一种。

5.一种子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1或权利要求2所述的pcr引物探针组合。

6.如权利要求1所述的子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测的pcr引物探针组合在制备检测子宫内膜癌试剂盒中的应用。

技术总结本发明提供了一种子宫内膜良恶性病变基因甲基化检测的PCR引物探针组合、试剂盒及其应用，涉及子宫内膜良恶性病变检测技术领域；包括由以下1）‑4）所示的核酸序列组成：1）CDO1基因甲基化检测的PCR引物及探针；2）CELF4基因甲基化检测的PCR引物及探针；3）ZNF486基因甲基化检测的PCR引物及探针；4）ZSCAN12基因甲基化检测的PCR引物及探针。本发明通过将检测样本选用宫颈脱落细胞，属于无创检测，能提高患者的接受度；且相对于影像学和血清肿瘤标志物检测比较，本发明的方法可为子宫内膜癌的早期临床诊断提供更高的检测灵敏度和特异度。技术研发人员：甘鹏,范晓凡,叶姿伶,汤红,裴潇竹,方锦程,陶红受保护的技术使用者：湖南宏雅基因技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/26