一种冠状病毒多价疫苗及其应用的制作方法

本发明属于生物，尤其涉及冠状病毒多价疫苗及其应用。

背景技术：

1、冠状病毒为不分节段的单股正链rna病毒，根据血清型和基因组特点冠状病毒亚科被分为α、β、γ和δ四个属，由于病毒包膜上有向四周伸出的突起，形如花冠而得名。新型冠状病毒(sars-cov-2或2019-ncov)属于β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。目前研究显示，sars-cov-2与sars-cov具有高度同源性。

2、新型冠状病毒covid-19主要通过呼吸道传染，其也可能通过接触传播。人群普遍易感，老年人及有基础疾病者感染后病情较重，儿童及婴幼儿也有发病。基于目前的流行病学调查，新型冠状病毒的潜伏期一般为1-14天，大多数在3-7天。感染者的主要临床症状是发热、乏力、干咳，而鼻塞、流涕等上呼吸道症状少见。在发病早期，患者的白细胞总数正常或降低，或淋巴细胞数目减少，部分患者出现肝酶、肌酶和肌红蛋白增高的现象。胸部影像显示患者早期呈现多发小斑片影及间质改变，以肺外带明显；进而发展为双肺多发磨玻璃影、浸润影，严重者可出现肺实变，并逐渐出现呼吸困难，严重者发生急性呼吸窘迫综合征(ards)、休克以及肺组织、心脏、肾脏多种组织损伤和功能障碍。多数轻度感染患者预后良好，重度患者病情常常危重，甚至死亡。

3、近期，有关covid-19的基础、临床及流行病学研究不断发表或者公布，在本领域中迫切需要有效的针对冠状病毒的疫苗。

技术实现思路

1、本发明提供了一种冠状病毒多价疫苗。在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含含突变的冠状病毒spike(刺突)蛋白胞外结构域或其截短片段。在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白。本发明的冠状病毒多价疫苗，能诱导对冠状病毒更强的中和抗体反应。

2、病毒颗粒首先通过其表面的spike蛋白(s蛋白或棘突蛋白)的s1亚基中的受体结合域(rbd)与肺上皮细胞表面的一种称为血管紧张素转化酶2(ace2)进行结合。当rbd与受体结合并被蛋白酶水解之后，位于s蛋白c端的s2亚基暴露，并嵌入浆膜或者内吞体膜中。s2亚基中的七肽重复序列1(hr1)与七肽重复序列2(hr2)彼此相互作用形成六螺旋束(6-hb)融合核心，导致病毒外壳与细胞膜融合，sars-cov或sars-cov-2进入细胞内，并利用细胞为其合成新的病毒颗粒；新的病毒颗粒释放到细胞外，再利用同样的方式侵染周围正常的细胞。

3、在一些实施方案中，所述含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和中央螺旋区(ch)之间的转向区域存在防止hr1和ch在融合过程中形成直螺旋的突变。

4、在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

5、在一些实施方案中，冠状病毒spike蛋白的氨基酸编号是基于cryo-em模型pdb id6vsb或genbank登录号mn908947.3的氨基酸编号作为参考。

6、在一些实施方案中，所述含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域的截短片段，其与冠状病毒spike蛋白全长胞外结构域相比，c端截短了5-80个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域的截短片段，其与冠状病毒spike蛋白全长胞外结构域相比，c端截短了20-76个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域的截短片段，其与冠状病毒spike蛋白全长胞外结构域相比，c端截短了70个氨基酸残基。

7、在一些实施方案中，所述冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段来自sars-cov-2、sars-cov或mers-cov。在一些实施方案中，所述冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段来自野生型sars-cov-2或其变异株。在一些实施方案中，所述冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段来自野生型sars-cov-2、sars-cov-2 alpha变异株、sars-cov-2beta变异株、sars-cov-2 gamma变异株、sars-cov-2 delta变异株、sars-cov-2 kappa变异株、sars-cov-2 epsilon变异株、sars-cov-2 lambda变异株或sars-cov-2 omicron变异株。

8、在一些实施方案中，所述含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段包含如seq id no:3、4、6、7、9-12、32-35、78-83任一项所示的氨基酸序列，或与seq id no:3、4、6、7、9-12、32-35、78-83任一项所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:3、4、6、7、9-12、32-35、78-83任一项所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

9、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，其包含通过接头连接的含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述接头为gs接头。在一些实施方案中，所述接头选自gs，ggs，gggs，ggggs，sgggs，ggss，(ggggs)2，(ggggs)3，或其任意组合。在一些实施方案中，所述接头为(gms)n，其中，每个m独立为1、2、3、4或5，n为1、2、3、4或5。在一些实施方案中，所述接头的序列为(ggggs)n，所述n为1、2、3、4或5。在一些实施方案中，所述接头为ggggs。在一些实施方案中，所述接头为(ggggs)2。在一些实施方案中，所述接头为(ggggs)3。在一些实施方案中，所述接头为(ggggs)4。在一些实施方案中，所述接头为(ggggs)5。在一些实施方案中，所述单体亚基蛋白为自组装的单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述单体亚基蛋白为单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述单体铁蛋白亚基选自细菌铁蛋白、植物铁蛋白、藻铁蛋白、昆虫铁蛋白、真菌铁蛋白和哺乳动物铁蛋白。在一些实施方案中，所述单体铁蛋白亚基为幽门螺杆菌非血红素单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，幽门螺杆菌非血红素单体铁蛋白亚基氨基酸序列中存在n19q突变。在一些实施方案中，所述单体铁蛋白亚基包含如seq id no:14所示的氨基酸序列，或与seq id no:14所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:14所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

10、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在防止融合过程中形成直螺旋的突变。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白是将含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的c端通过接头与单体亚基蛋白的n端连接。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白是将含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的c端通过接头与单体铁蛋白亚基的n端连接。

11、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白还包含n端信号肽。

12、在一些实施方案中，所述信号肽选自csp，mschito，mf-α，pho1，hbm，t-pa，以及il-3的信号肽。

13、在一些实施方案中，所述n端信号肽包含如seq id no:2或5所示的氨基酸序列，或与seq id no:2或5所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:2或5所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

14、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的野生型sars-cov-2 spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的野生型sars-cov-2spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

15、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 alpha变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2alpha变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

16、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 beta变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 beta变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

17、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 gamma变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2gamma变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

18、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 delta变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2delta变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

19、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 kappa变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2kappa变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

20、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 epsilon变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2epsilon变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

21、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 lambda变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2lambda变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

22、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2 omicron变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含通过接头连接的含突变的sars-cov-2omicron变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

23、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含如seq id no:16-23、26-29、41-44、66、67任一项所示的氨基酸序列，或与seq id no:16-23、26-29、41-44、66、67任一项所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:16-23、26-29、41-44、66、67任一项所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

24、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含至少一种包含如seq id no:16-23、26-29、41-44、66、67任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白。

25、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含至少两种包含如seq id no:16-23、26-29、41-44、66、67任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白。

26、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含包含如seq id no:22、23或29所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:43、44或67所示的氨基酸序列的融合蛋白。

27、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:22、23或29所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:43、44或67所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为1:1。

28、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含包含如seq id no:22所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:43所示的氨基酸序列的融合蛋白。

29、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:22所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:43所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为1:1。

30、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含包含如seq id no:29所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:67所示的氨基酸序列的融合蛋白。

31、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:29所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:67所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为1:1。

32、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，其包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段来自igg、igm、iga、ige或igd。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段来自igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段为igg1的fc片段。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段为人igg1的fc片段。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段包含如seq id no:38所示的氨基酸序列，或与seq id no:38所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:38所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

33、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，其是将所述含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的c端与免疫球蛋白的fc片段的n端连接。

34、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的野生型sars-cov-2 spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

35、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的sars-cov-2 alpha变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

36、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的sars-cov-2 beta变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

37、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的sars-cov-2 gamma变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

38、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的sars-cov-2 delta变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

39、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的sars-cov-2 kappa变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

40、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的sars-cov-2 epsilon变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

41、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的sars-cov-2 lambda变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

42、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白，包含含突变的sars-cov-2 omicron变异株spike蛋白胞外结构域或其截短片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述突变包含：1)将rrar突变为gsas；2)在hr1和ch之间的转向区域存在双重突变k986p/v987p。

43、在一些实施方案中，所述包含含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段的融合蛋白包含如seq id no:47-54、59-62、69-72、75-76任一项所示的氨基酸序列，或与seq id no:47-54、59-62、69-72、75-76任一项所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:47-54、59-62、69-72、75-76任一项所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

44、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含至少一种包含如seq id no:47-54、59-62、69-72、75-76任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白。

45、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含至少两种包含如seq id no:47-54、59-62、69-72、75-76任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白。

46、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含包含如seq id no:53、54或72所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:61、62或76所示的氨基酸序列的融合蛋白。

47、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:53、54或72所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:61、62或76所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为1:1。

48、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含包含如seq id no:53所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:61所示的氨基酸序列的融合蛋白。

49、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:53所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:61所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为1:1。

50、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含包含如seq id no:72所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:76所示的氨基酸序列的融合蛋白。

51、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:72所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:76所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述2种融合蛋白的质量比为1:1。

52、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗还包含冠状病毒spike蛋白保守片段或包含其的融合蛋白。在一些实施方案中，所述冠状病毒spike蛋白保守片段来自sars-cov-2、sars-cov或mers-cov。在一些实施方案中，所述冠状病毒spike蛋白保守片段来自野生型sars-cov-2或其变异株。在一些实施方案中，所述冠状病毒spike蛋白保守片段来自野生型sars-cov-2、sars-cov-2 alpha变异株、sars-cov-2 beta变异株、sars-cov-2 gamma变异株、sars-cov-2 delta变异株、sars-cov-2 kappa变异株、sars-cov-2 epsilon变异株、sars-cov-2 lambda变异株或sars-cov-2 omicron变异株。

53、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白还包含n端信号肽。

54、在一些实施方案中，所述信号肽选自csp，mschito，mf-α，pho1，hbm，t-pa，以及il-3的信号肽。

55、在一些实施方案中，所述n端信号肽包含如seq id no:2或5所示的氨基酸序列，或与seq id no:2或5所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:2或5所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

56、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，其包含通过接头连接的冠状病毒spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述接头为gs接头。在一些实施方案中，所述接头选自gs，ggs，gggs，ggggs，sgggs，ggss，(ggggs)2，(ggggs)3，或其任意组合。在一些实施方案中，所述接头为(gms)n，其中，每个m独立为1、2、3、4或5，n为1、2、3、4或5。在一些实施方案中，所述接头的序列为(ggggs)n，所述n为1、2、3、4或5。在一些实施方案中，所述接头为ggggs。在一些实施方案中，所述接头为(ggggs)2。在一些实施方案中，所述接头为(ggggs)3。在一些实施方案中，所述接头为(ggggs)4。在一些实施方案中，所述接头为(ggggs)5。在一些实施方案中，所述单体亚基蛋白为自组装的单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述单体亚基蛋白为单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，所述单体铁蛋白亚基选自细菌铁蛋白、植物铁蛋白、藻铁蛋白、昆虫铁蛋白、真菌铁蛋白和哺乳动物铁蛋白。在一些实施方案中，所述单体铁蛋白亚基为幽门螺杆菌非血红素单体铁蛋白亚基。在一些实施方案中，幽门螺杆菌非血红素单体铁蛋白亚基氨基酸序列中存在n19q突变。在一些实施方案中，所述单体铁蛋白亚基包含如seq id no:14所示的氨基酸序列，或与seqid no:14所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seqid no:14所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

57、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，其是将冠状病毒spike蛋白保守片段的c端通过接头与单体亚基蛋白的n端连接。

58、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的野生型sars-cov-2 spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的野生型sars-cov-2spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

59、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的sars-cov-2 alpha变异株spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的sars-cov-2alpha变异株spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

60、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的sars-cov-2 beta变异株spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的sars-cov-2beta变异株spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

61、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的sars-cov-2 gamma变异株spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的sars-cov-2gamma变异株spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

62、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的sars-cov-2 delta变异株spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的sars-cov-2delta变异株spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

63、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的sars-cov-2 kappa变异株spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的sars-cov-2kappa变异株spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

64、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的sars-cov-2 epsilon变异株spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的sars-cov-2 epsilon变异株spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

65、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的sars-cov-2 lambda变异株spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的sars-cov-2lambda变异株spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

66、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含通过接头连接的sars-cov-2 omicron变异株spike蛋白保守片段和单体亚基蛋白。在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含通过接头连接的sars-cov-2 omicron变异株spike蛋白保守片段和单体铁蛋白亚基。

67、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含如seqid no:45-46、68任一项所示的氨基酸序列，或与seq id no:45-46、68任一项所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:45-46、68任一项所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

68、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，其包含冠状病毒spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段来自igg、igm、iga、ige或igd。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段来自igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段为igg1的fc片段。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段为人igg1的fc片段。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的fc片段包含如seq id no:38所示的氨基酸序列，或与seq id no:38所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:38所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

69、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，其是将冠状病毒spike蛋白保守片段的c端与免疫球蛋白的fc片段的n端连接。

70、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含野生型sars-cov-2 spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

71、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含sars-cov-2 alpha变异株spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

72、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含sars-cov-2 beta变异株spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

73、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含sars-cov-2 gamma变异株spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

74、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含sars-cov-2 delta变异株spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

75、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含sars-cov-2 kappa变异株spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

76、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含sars-cov-2 epsilon变异株spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

77、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含sars-cov-2 lambda变异株spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

78、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白，包含sars-cov-2 omicron变异株spike蛋白保守片段和与其连接的免疫球蛋白的fc片段。

79、在一些实施方案中，所述包含冠状病毒spike蛋白保守片段的融合蛋白包含如seqid no:63、64、77任一项所示的氨基酸序列，或与seq id no:63、64、77任一项所示的氨基酸序列相比具有至少80％或至少90％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:63、64、77任一项所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

80、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含至少一种包含如seq id no:16-23、26-29、41-44、66、67任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白，还包含冠状病毒spike蛋白保守片段或包含其的融合蛋白。

81、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含：(1)至少一种包含如seq id no:16-23、26-29、41-44、66、67任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白，和(2)包含如seq id no:45-46、63、64、68和77任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白。

82、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含：(1)包含如seq id no:22、23或29所示的氨基酸序列的融合蛋白，(2)包含如seq id no:43、44或67所示的氨基酸序列的融合蛋白，和(3)包含如seq id no:63、64或77所示的氨基酸序列的融合蛋白。

83、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:22、23或29所示的氨基酸序列的融合蛋白、包含如seq id no:43、44或67所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:63、64或77所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为1:1:1。

84、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含：(1)包含如seq id no:22所示的氨基酸序列的融合蛋白，(2)包含如seq id no:43所示的氨基酸序列的融合蛋白，和(3)包含如seq id no:63所示的氨基酸序列的融合蛋白。

85、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含：(1)包含如seq id no:29所示的氨基酸序列的融合蛋白，(2)包含如seq id no:67所示的氨基酸序列的融合蛋白，和(3)包含如seq id no:77所示的氨基酸序列的融合蛋白。

86、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含至少一种包含如seq id no:47-54、59-62、69-72、75-76任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白，还包含冠状病毒spike蛋白保守片段或包含其的融合蛋白。

87、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含：(1)至少一种包含如seq id no:47-54、59-62、69-72、75-76任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白，和(2)包含如seq id no:45-46、63、64、68和77任一项所示的氨基酸序列的融合蛋白。

88、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含：(1)包含如seq id no:53、54或72所示的氨基酸序列的融合蛋白，(2)包含如seq id no:61、62或76所示的氨基酸序列的融合蛋白，和(3)包含如seq id no:63、64或77所示的氨基酸序列的融合蛋白。

89、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:53、54或72所示的氨基酸序列的融合蛋白、包含如seq id no:61、62或76所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:63、64或77所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为1:1:1。

90、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含：(1)包含如seq id no:53所示的氨基酸序列的融合蛋白，(2)包含如seq id no:61所示的氨基酸序列的融合蛋白，和(3)包含如seq id no:63所示的氨基酸序列的融合蛋白。

91、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:53所示的氨基酸序列的融合蛋白、包含如seq id no:61所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:63所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为1:1:1。

92、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗包含：(1)包含如seq id no:72所示的氨基酸序列的融合蛋白，(2)包含如seq id no:76所示的氨基酸序列的融合蛋白，和(3)包含如seq id no:77所示的氨基酸序列的融合蛋白。

93、在一些实施方案中，所述包含如seq id no:72所示的氨基酸序列的融合蛋白、包含如seq id no:76所示的氨基酸序列的融合蛋白和包含如seq id no:77所示的氨基酸序列的融合蛋白的质量比为(1-5):(1-5):(1-5)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为(1-3):(1-3):(1-3)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为(1-2):(1-2):(1-2)。在一些实施方案中，上述3种融合蛋白的质量比为1:1:1。

94、在一些实施方案中，“至少80％同一性”为至少约80％同一性、至少约81％同一性、至少约83％同一性、至少约84％同一性、至少约85％同一性、至少约86％同一性、至少约87％同一性、至少约88％同一性、至少约89％同一性、至少约90％同一性、至少约91％同一性、至少约92％同一性、至少约93％同一性、至少约94％同一性、至少约95％同一性、至少约96％同一性、至少约97％同一性、至少约98％同一性、至少约99％同一性，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。

95、在一些实施方案中，“至少90％同一性”为至少约90％同一性、至少约91％同一性、至少约92％同一性、至少约93％同一性、至少约94％同一性、至少约95％同一性、至少约96％同一性、至少约97％同一性、至少约98％同一性、至少约99％同一性，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。

96、在一些实施方案中，由于抗原(例如，含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段或冠状病毒spike蛋白保守片段)与自组装的单体亚基蛋白(例如，单体铁蛋白亚基)连接，将产生表面上显示抗原的纳米颗粒。

97、在一些实施方案中，所述冠状病毒多价疫苗还包括药学上可接受的载体和/或佐剂。

98、本发明还提供了编码本文所述含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段、冠状病毒spike蛋白保守片段或包含其的融合蛋白的多聚核苷酸。

99、本发明还提供了包含编码本文所述含突变的冠状病毒spike蛋白胞外结构域或其截短片段、冠状病毒spike蛋白保守片段或包含其的融合蛋白的多聚核苷酸的表达载体。

100、本发明还提供了包含所述多聚核苷酸或表达载体的宿主细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞为分离的宿主细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞为cho细胞、hek293细胞、cos1细胞、cos7细胞、cv1细胞或鼠l细胞。

101、本发明还提供了本文所述的冠状病毒多价疫苗在制备预防或治疗冠状病毒感染的药物中的应用。

102、本发明还提供了本文所述的冠状病毒多价疫苗在预防或治疗冠状病毒感染中的应用。在一些实施方案中，提供了本文所述的冠状病毒多价疫苗在预防或治疗sars或covid-19中的应用。

103、本发明还提供了一种预防或治疗冠状病毒感染的方法，包括向有需要的患者施用有效量的本文所述的冠状病毒多价疫苗。

104、在一些实施方案中，所述冠状病毒感染为野生型sars-cov-2或其变异株感染。在一些实施方案中，所述冠状病毒感染为野生型sars-cov-2、sars-cov-2 alpha变异株、sars-cov-2 beta变异株、sars-cov-2 gamma变异株、sars-cov-2 delta变异株、sars-cov-2 kappa变异株、sars-cov-2 epsilon变异株、sars-cov-2 lambda变异株或sars-cov-2omicron变异株感染。