鉴别肺腺癌和良性肺部疾病的血浆自身抗体标志物及其应用

本发明涉及生物，具体涉及于鉴别肺腺癌和良性肺部疾病的血浆自身抗体标志物及其应用。

背景技术：

1、本部分提供的仅仅是与本公开相关的背景信息，其并不必然是现有技术。

2、根据2024年全球癌症数据的结果显示，肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，占所有肿瘤确诊和死亡人数的比例分别为12.4％和18.7％。肺癌分为小细胞肺癌(small cell lungcancer，sclc)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，nsclc)，其中大约85％的肺癌属于nsclc。肺腺癌(lung adenocarcinoma，luad)是nsclc中最常见的类型，占肺癌的40％左右。虽然肺癌相关的研究已经取得了很大的进展，但是发病率依旧是上升的趋势。肺癌患者的生存预后近年来得到了明显改善，但其5年存活率并不高。多数患者在诊断时多为中、晚期或发生远处转移，错过了最好的治疗时机。如能早发现、早治疗，患者的生存时间将大大延长。目前的x射线和ct等早期检测方法存在灵敏度低、特异性差、成本高、无创等不足，很难满足大规模人群的早期检测需求。

3、肿瘤标志物在癌症的早期筛查、诊断、疗效评价及预后评价中扮演着非常关键的角色。目前，血液是肺癌筛查的肿瘤标志物主要来源，由于其易获得、无创和可重复检测等优点而广受关注，传统的血液肿瘤标志物在临床上已被用于癌症的辅助诊断，目前常见的肿瘤标志物有括癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，cea)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，nse)、细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19fragment，cyfra21-1)。虽然目前的肿瘤标记物在临床上已经得到了大量的证实，但是并不能很好的用于肺腺癌的特异性诊断。

4、目前许多研究表明，癌症患者的血浆中含有的自体细胞抗原，称为肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，taa)，肿瘤相关抗原自身抗体(autoantibody againsttumor associated antigens，taab)可与之反应，其taab已在多种肿瘤中检测到。一些自身抗体变化出现较早，在临床诊断为肿瘤数月至数年前即可被检测到。此外，taab作为免疫诊断标志物可能具有更大的优势，因为它们被免疫反应放大的信号比taa本身更容易检测。因此，taab在癌症的早期诊断中具有很大的潜力，有必要筛选和鉴定新的taab用于肺腺癌的早期筛查和诊断诊断。taab在血浆中出现的较早，具备早期检测、稳定存在和动态监测等优点，是早期肺腺癌筛查诊断的良好标志物。目前，已开展的肺癌的自身抗体的研究包括：抗-annexin1、抗-lamr1、抗-hsp40、抗-ny-eso-1和抗-p53等，但目前临床上与之相关的标志物灵敏度或特异度较低，因此有待于寻找新的具有较好诊断价值的taabs。

技术实现思路

1、发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供鉴别肺腺癌和良性肺部疾病的血浆自身抗体标志物及其应用。

2、为了解决上述技术问题，本发明公开了如下技术方案：

3、第一方面，本发明公开了肺腺癌标志物，包括抗-dsp、抗-agr2、抗-mdk、抗-abcc3、抗-met、抗-ass1、抗-pycr1、抗-lgals4和抗-crabp2中任意一种或多种抗原的自身抗体。

4、在一些实施例中，所述标志物为血浆自身抗体标志物。

5、在一些实施例中，所述自身抗体为外周血中血浆的自身抗体，如为外周血中血浆的igg自身抗体。

6、在一些实施例中，所述标志物为鉴别肺腺癌与健康人，或鉴别肺腺癌和良性肺部疾病的血浆自身抗体标志物。

7、进一步地，本发明还提供了所述血浆自身抗体标志物的筛选方法和验证方法。

8、所述筛选方法，具体包括以下步骤：

9、首先从geo数据库中下载11例肺腺癌组织和11例癌旁组织的单细胞转录组数据，对数据进行降维、聚类和分群；再根据cell杂志中的103例肺腺癌组织和103例癌旁组织的蛋白组学数据进行蛋白水平的验证，最终获得具有潜在诊断价值的候选taas。

10、所述验证方法为基于elisa技术设计了两阶段验证，具体如下：

11、其中，验证阶段一为小样本初步验证(72例肺腺癌患者和72例健康对照)。两组之间taabs表达水平的差异通过非参数检验分析，并绘制各候选taab的受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic，roc)对其诊断价值进行评价。

12、对于p<0.05且roc曲线下面积(area under the roc curve，auc)>0.5的taabs进行验证阶段二的大样本验证(249例肺腺癌患者和249例良性肺部疾病)。各taab在三组间水平间的差异通过非参数检验分析，并根据流行病学诊断试验方法评价各taab的价值，评价指标包括灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比以及符合率等。

13、第二方面，本发明公开了上述第一方面所述标志物在在制备诊断肺腺癌产品中的应用。

14、其中，所述诊断肺腺癌为鉴别肺腺癌与健康人，或鉴别肺腺癌和良性肺部疾病。

15、其中，所述产品包括试剂盒、试剂和芯片。

16、第三方面，本发明公开了一种用于诊断肺腺癌的试剂盒，其包括上述第一方面所述标志物。

17、其中，所述诊断肺腺癌为鉴别肺腺癌与健康人，或鉴别肺腺癌和良性肺部疾病。

18、其中，所述试剂盒为elisa检测试剂盒。

19、第四方面，本发明公开了上述第一方面所述标志物在制备用于鉴别肺腺癌和良性肺部疾病诊断模型中的应用。

20、其中，所述诊断模型如下；当p值≥0.5时，诊断为肺腺癌患者；当p值＜0.5时，诊断为良性肺部疾病患者；

21、p＝1/(1+exp(-(-4.914+1.329×抗-ass1+0.793×抗-dsp+1.105×抗-met+0.990×抗-pycr1+1.375×抗-mdk)))；

22、其中，抗-ass1、抗-dsp、抗-met、抗-pycr1、抗-mdk为血浆中的相应自身抗体的表达量。

23、第五方面，本发明公开了一种用于鉴别肺腺癌和良性肺部疾病的诊断模型，所述诊断模型如下；

24、当p值≥0.5时，诊断为肺腺癌患者；当p值＜0.5时，诊断为良性肺部疾病患者；

25、p＝1/(1+exp(-(-4.914+1.329×抗-ass1+0.793×抗-dsp+1.105×抗-met+0.990×抗-pycr1+1.375×抗-mdk)))；

26、其中，抗-ass1、抗-dsp、抗-met、抗-pycr1、抗-mdk为血浆中的相应自身抗体的表达量。

27、进一步地，本发明还提供了一种用于鉴别肺腺癌和良性肺部疾病的诊断模型的构建方法，包括如下步骤：

28、将验证阶段二中肺腺癌和良性肺部疾病样本通过spss statistics 26.0软件按照7：3左右的比例拆分成训练集和验证集；利用训练集的样本构建肺腺癌的logistic鉴别诊断模型，利用roc曲线等评价各模型的价值并进一步在验证集中验证；利用delong检验比较训练集和验证集间的auc差异有无统计学意义，p＝1/(1+exp(-(-4.914+1.329×抗-ass1+0.793×抗-dsp+1.105×抗-met+0.990×抗-pycr1+1.375×抗-mdk)))；其中，抗-ass1、抗-dsp、抗-met、抗-pycr1、抗-mdk为血浆中的相应自身抗体的表达量。

29、有益效果：

30、本发明通过单细胞转录组数据、蛋白质组学数据及酶联免疫吸附实验筛选并鉴定可用于肺腺癌(luad)和良性肺部疾病(bpd)鉴别诊断的新型血浆自身抗体标志物(抗-agr2、抗-mdk、抗-abcc3、抗-met、抗-ass1、抗-pycr1、抗-lgals4、抗-dsp和抗-crabp2)九种变量联合构建luad和bpd的鉴别诊断模型，该模型对肺腺癌和良性肺部疾病患者具有良好的鉴别诊断效能，为临床较好地管理肺部结节患者提供帮助。