双特异性抗体、药物组合物及其应用的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体地涉及一种双特异性抗体、包括该双特异性抗体的药物组合物及其作为抗癌药物的应用。

背景技术：

1、肿瘤免疫治疗已成为肿瘤治疗研究领域的热点。人体正常情况下，免疫系统可以识别并清除肿瘤微环境中的肿瘤细胞，但肿瘤细胞能够采用一系列策略，使人体的免疫系统受到抑制，导致免疫系统不能正常地杀伤肿瘤细胞，从而使肿瘤细胞在抗肿瘤免疫应答的各阶段得以幸存，这一过程称为免疫逃逸。不同肿瘤可以通过不同环节的异常抑制免疫系统对肿瘤细胞的有效识别和杀伤从而产生免疫耐受，甚至促进肿瘤的发生、发展。肿瘤免疫治疗就是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制和清除肿瘤的一种治疗方法。包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞治疗和小分子抑制剂等，均采用这种治疗方法。

2、目前上市在售的抗体药物多为单克隆抗体，治疗性单克隆抗体已被用于治疗癌症、自身免疫病、炎症和其他疾病，多数是针对一个靶标的特异性。然而，病人接受单克隆抗体治疗可能产生耐药性或无应答。并且有些疾病在体内的影响因素是多方面的，包括不同的信号通路、不同的细胞因子和受体的调节机制等，单一靶点的免疫疗法似乎并不足以摧毁癌细胞。因此，需要通过组合不同的药物，或是使用多特异性抗体的多重靶向策略来实现。

3、双特异性抗体虽然是抗体药物研发的方向，但面临诸多挑战，比如临床前评价模型、表达量低、稳定性差、工艺复杂、质控差异性大等问题，因此一直以来双特异性抗体的研发困难重重。

4、因此，本领域迫切开发一种特异性佳、疗效好且易于制备的抗肿瘤双特异性抗体。

技术实现思路

1、鉴于此，本技术提出一种双特异性抗体、药物组合物及其应用，其能够可以产生协同作用，同时靶向pd-l1和vegf，从而发挥高效的抗肿瘤作用。

2、第一方面，本技术实施例提供一种双特异性抗体，包括：

3、(a)抗pd-l1的抗体或元件；(b)抗vegf的抗体或元件；

4、所述双特异性抗体包括如式1a和式1b所示结构的多肽：

5、a2-l4-vh-l5-a2-l6-ch            (式1a)

6、a1-l1-vl-l2-a1-l3-cl             (式1b)

7、式1a所示的多肽与式1b所示的多肽通过二硫键连接形成异源二聚体；

8、其中:

9、a1各自独立为无或抗vegf抗体或元件的轻链可变区，且至少一个a1为抗vegf抗体或元件的轻链可变区；

10、a2各自独立为无或抗vegf抗体或元件的重链可变区，且至少一个a2为抗vegf抗体或元件的重链可变区；

11、l1、l2、l3、l4、l5、l6各自独立地为键或接头元件；

12、vl代表抗pd-l1抗体或元件的轻链可变区；vh代表抗pd-l1抗体或元件的重链可变区；

13、cl代表抗pd-l1抗体或元件的轻链恒定区；ch代表抗pd-l1抗体或元件的重链恒定区；

14、“-”代表肽键；

15、所述抗pd-l1的抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，其由seq idno:2所示的核苷酸序列进行编码；所述抗pd-l1的抗体重链可变区的氨基酸序列如seq idno:3所示，其由seq id no:4所示的核苷酸序列进行编码；

16、所述抗vegf的抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:5所示，其由seq idno:6所示的核苷酸序列进行编码，所述抗vegf的抗体重链可变区的氨基酸序列如seq idno:7所示，其由seq id no:8所示的核苷酸序列进行编码。

17、第二方面，本技术实施例提供一种双特异性抗体，包括：

18、(a)抗pd-l1的抗体或元件；(b)抗vegf的抗体或元件；

19、所述双特异性抗体包括如式2a或式2b所示结构的多肽：

20、

21、其中：

22、a3为抗vegf的抗体的单链抗体的可变区，所述可变区的氨基酸序列如seq id no:47所示；

23、l1、l2、l3、l4、l5和l6各自独立地为无或键或接头元件；

24、vl代表抗pd-l1单链抗体的轻链可变区；vh代表抗pd-l1单链抗体的重链可变区；

25、cl代表抗pd-l1单链抗体的轻链恒定区；ch代表抗pd-l1单链抗体的重链恒定区；

26、“～”代表二硫键或共价键；和“-”代表肽键；

27、所述抗pd-l1的抗体重链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，其由seq idno:2所示的核苷酸序列进行编码；所述抗pd-l1的抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq idno:3所示，其由seq id no:4所示的核苷酸序列进行编码；

28、所述抗vegf的抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:5所示，其由seq idno:6所示的核苷酸序列进行编码，所述抗vegf的抗体重链可变区的氨基酸序列如seq idno:7所示，其由seq id no:8所示的核苷酸序列进行编码。

29、第三方面，本技术实施例提供一种双特异性抗体，包括：

30、(a)抗pd-l1的抗体或元件；(b)抗vegf的抗体或元件；

31、所述双特异性抗体包括如式3所示结构的多肽：

32、

33、其中：

34、a4为抗vegf的抗体或抗pd-l1的抗体的重链可变区vh；

35、a5为抗vegf的抗体或抗pd-l1的抗体的轻链可变区vl，a5与a4为同一靶点；

36、b1是抗pd-l1的抗体或抗vegf的抗体的单链抗体的可变区，所述抗pd-l1的抗体的单链抗体的可变区的氨基酸序列如seq id no:49所示，所述抗vegf的抗体的单链抗体的可变区的氨基酸序列如seq id no:47所示；

37、c1是抗vegf的抗体或元件或抗pd-l1抗体的重链恒定区ch，c1与a4、a5为同一靶点；

38、c2是抗vegf的抗体或元件或抗pd-l1抗体的轻链恒定区cl，c2与a4、a5为同一靶点；

39、l1、l2和l3各自独立地为无或连接元件；

40、fc是人igg的fc区段，所述fc区段包含kih突变结构；

41、“-”为肽键；“～”代表二硫键或共价键；

42、所述抗pd-l1的抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，其由seq idno:2所示的核苷酸序列进行编码；所述抗pd-l1的抗体重链可变区的氨基酸序列如seq idno:3所示，其由seq id no:4所示的核苷酸序列进行编码；

43、所述抗vegf的抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:5所示，其由seq idno:6所示的核苷酸序列进行编码，所述抗vegf的抗体重链可变区的氨基酸序列如seq idno:7所示，其由seq id no:8所示的核苷酸序列进行编码。

44、第四方面，本技术实施例提供一种双特异性抗体，包括：

45、(a)抗pd-l1的抗体或元件；(b)抗vegf的抗体或元件；

46、所述双特异性抗体包括如式4所示结构的多肽：

47、

48、其中：

49、a6是抗pd-l1的抗体的重链可变区vh；a7是抗pd-l1的抗体的轻链可变区vl；

50、b6是抗vegf的抗体的重链可变区vh；b7是抗vegf的抗体的轻链可变区vl；

51、c1是抗pd-l1的抗体的重链恒定区ch；c2是抗pd-l1的抗体的轻链恒定区cl；

52、d1是抗vegf的抗体的重链恒定区ch；d2是抗vegf的抗体的轻链恒定区cl；

53、l1、l2、l3和l4各自独立地为无或键或接头元件；

54、“-”为肽键；“～”代表二硫键或共价键或电荷突变连接；“＝d＝”代表kih突变结构；

55、所述抗pd-l1的抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，其由seq idno:2所示的核苷酸序列进行编码；所述抗pd-l1的抗体重链可变区的氨基酸序列如seq idno:3所示，其由seq id no:4所示的核苷酸序列进行编码；

56、所述抗vegf的抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:5所示，其由seq idno:6所示的核苷酸序列进行编码，所述抗vegf的抗体重链可变区的氨基酸序列如seq idno:7所示，其由seq id no:8所示的核苷酸序列进行编码。

57、第五方面，本技术实施例提供一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码第一方面至第四方面任一项所述的双特异性抗体。

58、第六方面，本技术实施例提供一种载体，所述载体含有第五方面所述的多核苷酸。

59、第七方面，本技术实施例提供宿主细胞，所述宿主细胞含有第六方面所述的载体或基因组中整合有第五方面所述的多核苷酸。

60、第八方面，本技术实施例提供一种药物组合物，所述药物组合物包括第一方面至第四方面任一项所述的双特异性抗体及药学上可接受的载体或赋形剂。

61、第九方面，本技术实施例提供第一方面至第四方面任一项所述的双特异性抗体在制备治疗pd-l1和vegf相关的癌症的药物中的应用。

62、相比于现有技术，本发明具备如下有益效果：本发明的双特异性抗体包括能够结合pd-l1的片段和特异性结合vegf的片段，这种双特异性抗体分子可以产生协同作用，同时靶向pd-l1和vegf，从而发挥高效的抗肿瘤作用。相对于单独给予这两种抗体时的疗效，本发明的双特异性抗体在癌症治疗中显示出明显的协同作用。