一种诺如病毒GII.17型病毒样颗粒及其制备方法与应用

本发明涉及生物医药，更具体的说是涉及一种诺如病毒gii.17型病毒样颗粒及其制备方法与应用。

背景技术：

1、人类诺如病毒(norovirus)是急性胃肠炎的主要原因之一，主要通过粪-口途径传播。诺如病毒相关急性胃肠炎主要临床症状为呕吐和腹泻，伴随腹痛、发热、肌肉酸痛等。该疾病具有自限性，但在儿童、老人以及免疫力低下人群中具有高发病率甚至导致死亡。其中诺如病毒gi、gii和giv型可造成人类感染，主要流行型别以gii.4型为主，其次为包括gii.3型和gii.17型在内的其他gii型诺如病毒。在中国，诺如病毒相关急性胃肠炎疫情自2006年以来持续增加，主要流行型别包括gii.4、gii.17、gii.3和gii.1型，其中gii.17型诺如病毒在2014-2015年为主要流行型别，在2019年后其流行率有所降低，但不断有除gii.4外的其他型别流行株出现。由于遗传多样性及抗原多样性等原因，目前尚无针对性的诺如病毒感染治疗药物，疫苗研发成为另一有效措施。

2、病毒样颗粒(virus-like particles,vlp)由于其形态与天然病毒粒子相似且不含病毒基因组，具备良好的安全性与免疫原性，被认为是理想的疫苗形式。病毒样颗粒的制备依赖重组蛋白表达系统，当前，主流重组蛋白表达系统包括酵母表达系统、大肠杆菌等原核表达系统、哺乳动物细胞表达系统和植物细胞表达系统等，而不同表达系统在效果方面具有较大差异。重组蛋白表达是病毒样颗粒疫苗研发的关键技术，开发能够高效表达外源蛋白的编码序列对于病毒样颗粒疫苗的研制有重要意义。

3、因此，提供高效表达外源蛋白且具有良好免疫原性的病毒样颗粒应用于诺如病毒疫苗的开发是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种诺如病毒gii.17型病毒样颗粒及其制备方法与应用。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种多核苷酸，所述多核苷酸包括编码突变型诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的核苷酸序列，且所述包括编码突变型诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的核苷酸序列如seq idno.4所示；

4、或者，所述多核苷酸包括编码诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的核苷酸序列，所述包括编码诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的核苷酸序列如seq id no.3所示。

5、本发明的另一目的是，提供一种vp1蛋白，所述vp1蛋白的氨基酸序列如seq idno.2所示或如seq id no.1所示。

6、本发明的另一目的是，提供一种生物材料，所述生物材料包括上述的多核苷酸。

7、优选的，所述生物材料的表达载体为酵母表达载体。

8、本发明的另一目的是，提供一种细胞系，所述细胞系基因组中整合有上述的多核苷酸，或者所述细胞系中包括上述的生物材料。

9、本发明的另一目的是，提供一种诺如病毒gii.17型病毒样颗粒，所述病毒样颗粒包括突变型诺如病毒gii.17型的vp1蛋白，且所述突变型诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示；

10、或者，所述病毒样颗粒包括诺如病毒gii.17型的vp1蛋白，且所述诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

11、本发明的另一目的是，提供上述诺如病毒gii.17型病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：

12、s1:人工合成诺如病毒gii.17型密码子优化的vp1基因，所述基因的核苷酸序列如seq id no.4所示或如seq id no.3所示；

13、s2:将步骤s1所得密码子优化的vp1基因与pink-hc载体连接，得相应表达载体；

14、s3:将步骤s2所得表达载体转化入毕赤酵母感受态细胞；再经甲醇诱导；继续培养24h后收集菌液；

15、s4:将步骤s3所得菌液的菌体破壁，纯化，通过western blot鉴定vp1蛋白，并通过电镜确认颗粒形态，确认获得诺如病毒gii.17型病毒样颗粒。

16、本发明的另一目的是，提供一种免疫原，所述免疫原为上述vp1蛋白或上述诺如病毒gii.17型病毒样颗粒。

17、本发明的另一目的是，提供上述vp1蛋白或上述诺如病毒gii.17型病毒样颗粒在制备预防诺如病毒感染产品中的应用。

18、本发明的另一目的是，提供一种预防诺如病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包括上述vp1蛋白或上述诺如病毒gii.17型病毒样颗粒，以及药学上可接受的载体。

19、有益效果：

20、(1)本发明制备的gii.17型诺如病毒病毒样颗粒在与佐剂搭配后适合制备疫苗：该病毒样颗粒具备典型诺如病毒颗粒的形态，通过电子显微镜观察能够到颗粒大小均匀，且具备较强的免疫原性能够诱导出良好的免疫反应。

21、(2)易于工业化规模生产：外源蛋白表达量较高；酵母表达系统具备培养简单、生长迅速、适用于高密度发酵和低成本的特点。

22、(3)易于获得高效表达菌株：本发明将gii.17型诺如病毒的vp1蛋白基因序列进行了优化设计，构建了重组表达载体，可在毕赤酵母上实现病毒样颗粒的高效表达。

23、(4)稳定性好：所述重组蛋白表达载体能够通过同源重组的方法整合入宿主酵母的基因组中，不易丢失，且产物不易被降解。

技术特征：

1.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包括编码突变型诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的核苷酸序列，且所述包括编码突变型诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的核苷酸序列如seq id no.4所示；

2.一种vp1蛋白，其特征在于，所述vp1蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示或如seqid no.1所示。

3.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括权利要求1所述的多核苷酸。

4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料的表达载体为酵母表达载体。

5.一种细胞系，其特征在于，所述细胞系基因组中整合有权利要求1所述的多核苷酸，或者所述细胞系中包括权利要求3或4所述的生物材料。

6.一种诺如病毒gii.17型病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒包括突变型诺如病毒gii.17型的vp1蛋白，且所述突变型诺如病毒gii.17型的vp1蛋白的氨基酸序列如seqid no.2所示；

7.权利要求6所述诺如病毒gii.17型病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.一种免疫原，其特征在于，所述免疫原为权利要求2所述vp1蛋白或权利要求6所述诺如病毒gii.17型病毒样颗粒。

9.权利要求2所述vp1蛋白或权利要求6所述诺如病毒gii.17型病毒样颗粒在制备预防诺如病毒感染产品中的应用。

10.一种预防诺如病毒感染的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求2所述vp1蛋白或权利要求6所述诺如病毒gii.17型病毒样颗粒，以及药学上可接受的载体。

技术总结本发明公开了一种诺如病毒GII.17型病毒样颗粒及其制备方法与应用，涉及生物医药技术领域。本发明诺如病毒GII.17型病毒样颗粒包括突变型诺如病毒GII.17型的VP1蛋白，且所述突变型诺如病毒GII.17型的VP1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；或者，所述病毒样颗粒包括诺如病毒GII.17型的VP1蛋白，且所述诺如病毒GII.17型的VP1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该病毒样颗粒具备典型诺如病毒颗粒的形态，通过电子显微镜观察能够到颗粒大小均匀，且具备良好的免疫原性能够诱导出良好的免疫反应，可与佐剂搭配制备诺如病毒疫苗。技术研发人员：边成,杨昭庆,王梓豪,席珏敏,王晓辉,马绍辉受保护的技术使用者：中国医学科学院医学生物学研究所技术研发日：技术公布日：2024/10/17