一种干血斑中多种元素的检测方法与流程

本发明涉及元素分析，尤其涉及一种干血斑中多种元素的检测方法。

背景技术：

1、本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、微量元素的缺乏和过量都可以引起疾病，甚至死亡。砷、钼、钯、镉、铟、锑、钆、铂、汞、铊、铅、铋是有毒重金属，在人体中没有已知的益处，它们的高含量会导致活性氧的增加，损害蛋白质、脂质和dna。锂、钒、钴、钼是与生命有关的必需微量元素，尽管在人体内含量极少，却对新陈代谢起着至关重要的作用，这些元素的量化对营养研究和疾病干预至关重要。

3、然而，生物样本的收集和分析存在物流、伦理的限制，尤其是全血，虽然可以提供各种营养状况指标，但是通过静脉穿刺采集血液，需要有专业人员及用于样品储存，运输的冷链；对于偏远或资源有限的地区，设备、储存的运输的成本相对较高。此外，对新生儿、儿童和老年人等弱势群体来说，血液采样具有侵入性和道德挑战性。

4、干血斑(dbs)是一种通过刺破个人的手指或脚跟在专用滤纸上采集毛细血管血的方法，为静脉穿刺提供了另一种采集生物样本的方法，其具有相对较小的样本量，降低了患者的采样负担，有利于对静脉穿刺困难的婴儿、儿童和老年人等弱势群体进行血液采样。然而干血斑的元素分析存在着较大的挑战，因其要求低检测限和低样本量。

5、公开号为cn110687190a的专利公开了一种干血斑中多种元素的检测方法，其使用硝酸、半胱氨酸、曲拉通溶液作为消解液对试样血斑进行消解后采用电感耦合等离子体质谱(icp-ms)进行检测，虽然该发明取得了较低的检出限，但是由于该发明前处理需要涡旋静置1h，继而超声10分钟、在8000g离心后用针式过滤器过滤，前处理较为复杂耗时，并不适用于大批量样本的筛查。

6、因此，如何提供一种前处理方法简单、准确度高、可进行大规模筛查的干血斑中多种元素的检测方法及试剂盒是亟待解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种干血斑中多种元素的检测方法，解决了现有技术的干血斑中多种元素的检测前处理复杂、不适用于大规模筛查的问题。

2、本发明提供了一种干血斑中多种元素的检测方法，包括如下步骤：

3、利用打孔器分别取干血斑样本、干血斑校准品和干血斑质控品的相同大小的血斑片于不同的进样管中，加入稀释工作液，涡旋混匀后超声50～70min，得到待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液；将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液采用电感耦合等离子体质谱法进行检测；

4、其中，所述稀释工作液由稀释液和内标工作液按设定比例混匀而得，所述稀释液为硝酸、乙二胺四乙酸二钠、半胱氨酸和甲醇的混合水溶液；所述干血斑校准品和干血斑质控品中含有牛全血基质。

5、优选的，所述多种元素包括li、v、co、as、mo、pd、cd、in、sb、cs、gd、pt、hg、tl、pb和bi。

6、优选的，所述牛全血基质的制备方法如下：取肝素钠牛抗凝全血于离心管中，离心分离血浆与血细胞，分层后再以血浆：血细胞＝(54～58):(42～46)的体积比混合得到牛全血基质。

7、优选的，所述干血斑校准品的制备方法如下：取多元素校准品原液采用0.5wt％hno3溶液按比例稀释成一系列浓度溶液，然后将所述一系列浓度溶液以10％的体积比与牛全血基质混合得到一系列带基质校准品溶液，然后将所述一系列带基质校准品溶液分别滴入到采血卡中制备不同的血斑片，晾干至少4小时制成干血斑校准品。

8、优选的，所述干血斑质控品包括高浓度质控品和低浓度质控品，所述干血斑质控品的制备方法如下：将多种元素的单元素标准溶液配成高浓度质控理论浓度和低浓度质控理论浓度，然后按照1％的体积比边混匀边加入到牛全血基质中，获得高浓度质控溶液和低浓度质控溶液；所述高浓度质控溶液和低浓度质控溶液的质控靶值和范围如下所示：

9、

10、分别取所述高浓度质控溶液和低浓度质控溶液滴入到两份采血卡中，晾干至少4小时制成干血斑质控品。

11、优选的，所述内标工作液中，各元素的浓度为：铍800mg/l，钪100mg/l，锗200mg/l，钇100mg/l，铑10mg/l，铼10mg/l，铀0.5mg/l。

12、优选的，所述稀释液为0.1wt％硝酸、0.01wt％乙二胺四乙酸二钠、0.2wt％半胱氨酸和2wt％甲醇的混合水溶液；所述稀释液与内标工作液的体积比为5000：1。

13、优选的，所述电感耦合等离子体质谱法的测定条件如下：采用burgener ari雾化器，ked模式采集数据，碰撞气为氦气；仪器参数如下：射频功率为1500～1600w；雾化气流速为0.9～1.1l/min；辅助气流速为0.7～1.0l/min；冷却气流速为12～15l/min；采样深度为5～6mm，定量环规格为0.4～0.6ml。

14、优选的，以一系列带基质校准品溶液的浓度为横坐标，以校准品溶液与内标的信号比为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性方程y＝bx+a，将待测样品溶液与内标的信号比代入方程，从而计算待测样品溶液中各元素浓度。

15、优选的，所述血斑片的直径为9～11mm；所述加入稀释内标液的体积为2～3ml。

16、优选的，将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液转移到空管中，采用电感耦合等离子体质谱法进行检测。

17、与现有技术相比，本发明取得了以下有益效果：

18、(1)本发明采用了带牛全血基质的干血斑校准品，与待测干血斑样本的血斑大小保持一致，并且样品前处理方式保持一致，一方面校正血斑被提取后的损失，规避了样本量未知的情况，另一方面校正了基质效应和物理效应的干扰，有效提高了准确度。

19、(2)本发明在稀释液中添加了硝酸、乙二胺四乙酸二钠、半胱氨酸和甲醇，其中甲醇的加入可以降低溶液的表面张力，有助于样品更好地引入到等离子体中，提高雾化效率，从而提高检测时的灵敏度和降低检测限；同时，甲醇可减少样品中某些元素及有机化合物的降解，特别是当样品需要在分析前或分析时进行长时间存放时。半胱氨酸以及乙二胺四乙酸二钠可以与样品中的金属离子形成稳定的络合物，从而将血斑中的元素更高效提取出来，同时可提高样品稳定性，从而提高分析的灵敏度和准确度。

20、(3)本发明的样品前处理过程只需对血斑片进行超声提取，而后采用电感耦合等离子体质谱法进行检测，前处理过程更加简单快速，更适用于临床大批量样本的检测。

21、(4)本发明建立了一种适用于干血斑多元素高灵敏度、高特异性、高抗干扰性、高精密度、高重复性的检测方法，该方法可用于重金属筛查及愈后监测，例如检测环境微量毒素污染、检测治疗药物浓度或中毒愈后监测，具有良好的应用前景。

技术特征：

1.一种干血斑中多种元素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述多种元素包括li、v、co、as、mo、pd、cd、in、sb、cs、gd、pt、hg、tl、pb和bi。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述牛全血基质的制备方法如下：取肝素钠牛抗凝全血于离心管中，离心分离血浆与血细胞，分层后再以血浆：血细胞＝(54～58):(42～46)的体积比混合得到牛全血基质。

4.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述干血斑校准品的制备方法如下：取多元素校准品原液采用0.5wt％hno3溶液按比例稀释成一系列浓度溶液，然后将所述一系列浓度溶液以10％的体积比与牛全血基质混合得到一系列带基质校准品溶液，然后将所述一系列带基质校准品溶液分别滴入到采血卡中制备不同的血斑片，晾干至少4小时制成干血斑校准品。

5.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述干血斑质控品包括高浓度质控品和低浓度质控品，所述干血斑质控品的制备方法如下：将多种元素的单元素标准溶液配成高浓度质控理论浓度和低浓度质控理论浓度，然后按照1％的体积比边混匀边加入到牛全血基质中，获得高浓度质控溶液和低浓度质控溶液；所述高浓度质控溶液和低浓度质控溶液的质控靶值和范围如下所示：

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述内标工作液中，各元素的浓度为：铍800mg/l，钪100mg/l，锗200mg/l，钇100mg/l，铑10mg/l，铼10mg/l，铀0.5mg/l。

7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述稀释液为0.1wt％硝酸、0.01wt％乙二胺四乙酸二钠、0.2wt％半胱氨酸和2wt％甲醇的混合水溶液；所述稀释液与内标工作液的体积比为5000：1。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述电感耦合等离子体质谱法的测定条件如下：采用burgener ari雾化器，ked模式采集数据，碰撞气为氦气；仪器参数如下：射频功率为1500～1600w；雾化气流速为0.9～1.1l/min；辅助气流速为0.7～1.0l/min；冷却气流速为12～15l/min；采样深度为5～6mm，定量环规格为0.4～0.6ml。

9.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，以一系列带基质校准品溶液的浓度为横坐标，以校准品溶液与内标的信号比为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性方程y＝bx+a，将待测样品溶液与内标的信号比代入方程，从而计算待测样品溶液中各元素浓度。

10.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述血斑片的直径为9～11mm；所述加入稀释内标液的体积为2～3ml；将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液转移到空管中，采用电感耦合等离子体质谱法进行检测。

技术总结本发明公开了一种干血斑中多种元素的检测方法，属于元素分析技术领域。本发明所述的检测方法包括如下步骤：利用打孔器分别取干血斑样本、干血斑校准品和干血斑质控品的相同大小的血斑片于不同的进样管中，加入稀释工作液，涡旋混匀后超声50～70min，得到待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液；将所述待测样品溶液、校准品溶液和质控品溶液采用电感耦合等离子体质谱法进行检测；其中，所述稀释液为硝酸、乙二胺四乙酸二钠、半胱氨酸和甲醇的混合水溶液；所述干血斑校准品和干血斑质控品中含有牛全血基质。本发明的样品前处理过程简单快速，适用于临床大批量样本的检测；同时，本发明的检测方法具有高灵敏度、高特异性、高抗干扰性、高精密度、高重复性，具有良好的应用前景。技术研发人员：冯振,刘翠兰,崔文斌受保护的技术使用者：山东英盛生物技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/11/18