抗干扰的载脂蛋白E测定试剂盒、制备方法及检测方法与流程

本发明涉及免疫比浊体外诊断，尤其涉及抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒、制备方法及检测方法。

背景技术：

1、载脂蛋白e(apo e)有三种相似亚型，apo e2、apo e3和apo e4，其中apo e3最为常见，在人体中主要参与机体血脂代谢、调节机体血脂水平，与血脂异常、高血压、心力衰竭等心血管疾病的发生发展关系密切，可用于预测心血管疾病的发病风险。其基因多态性除与心血管疾病相关之外，还和其他疾病相关联，例如e4与阿尔茨海默病有关。临床实验室诊断方法：单向免疫扩散法、胶乳凝集法、速率散射比浊法、免疫透射比浊法、胶乳增强免疫透射比浊法、免疫标记技术等。

2、检验原理样本中的apo e与试剂中相应的抗体相遇，立即形成抗原抗体免疫复合物，在特定的缓冲环境中形成浊度，其浊度在合适的抗体浓度存在时与抗原含量成比例关系，与相同条件下操作的校准品比较，即可求出样本中apo e的含量。

3、因为apo e抗体很不稳定，抗干扰能力差，所以本专利为了攻克这一难点，在r2试剂配方中加入稳定剂羧甲基壳聚糖和丙三醇，可以起到保持apo e抗体稳定的作用；三羟甲基氨基甲烷和盐酸为形成缓冲体系，控制合适的ph值为6.8-7.6之间；叠氮化钠为抑菌剂，抑制细菌滋生；聚乙烯亚胺和十二烷基苯磺酸钠可让抗体的分布更为均匀。

4、目前上市的大部分试剂基本上都存在一些不足，如抗体在保存过程中容易出现沉淀，导致抗体性能变差、重复性不好、变异系数变大，直接造成试剂检测结果不准，不能满足医生和患者的需求。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒、制备方法及检测方法，旨在解决目前上市试剂抗体在保存过程中易出现沉淀，造成试剂检测结果不准的问题。

2、为实现上述目的，第一方面，本发明提供了抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒制备方法，包括以下步骤：

3、分别称取聚乙二醇5-6份、3-12份叠氮化钠、吐温2-15份、纯化水水1000-1650份、三羟甲基氨基甲烷0.45-0.55份和盐酸15-23份混合均匀，并过滤，得到第一试剂；

4、分别称取水溶性聚乙烯亚胺3-8份、十二烷基苯磺酸钠1-4份、羧甲基壳聚糖2-5份、丙三醇2-6份、氯化钠1-4份、三羟甲基氨基甲烷1-3份、盐酸0.01-0.02份、1-2份叠氮化钠、柠檬酸1-3份、apo e羊抗人抗体3-20份和纯化水40-55份混合均匀，并过滤，得到第二试剂；

5、将apo e抗原用标准品稀释液1l，得到apo e校准品。

6、其中，所述第一试剂和所述第二试剂的混合应在25±3℃的条件下进行。

7、其中，所述第一试剂、所述第二试剂和apo e校准品均在2-8℃的条件下保存。

8、其中，所述apo e校准品浓度包括s1＝0mg/l、s1＝12.5mg/l、s2＝25.0mg/l、s3＝50.0mg/l和s1＝100.0mg/l。

9、第二方面，本发明还提供了抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒，包括第一试剂、第二试剂和apo e校准品。

10、第三方面，本发明还提供了抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒检测方法，包括以下步骤：

11、向待测样品中加入所述第一试剂混匀，得到混合液，将所述第一混合液在37℃孵育，并在340nm波长下，读取第一吸光度；

12、所述混合液中加入所述第二试剂混匀，在37℃孵育，并在340nm波长下，读取第二吸光度；

13、将所述第二吸光度和所述第一吸光度作差，得到吸光度差值；

14、使用所述apo e校准品在全自动生化仪上拟合标准曲线，基于吸光度计算出待测样品中apo e的含量。

15、本发明的抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒制备方法，分别称取聚乙二醇5-6份、3-12份叠氮化钠、吐温2-15份、纯化水水1000-1650份、三羟甲基氨基甲烷0.45-0.55份和盐酸15-23份混合均匀，并过滤，得到第一试剂；分别称取水溶性聚乙烯亚胺3-8份、十二烷基苯磺酸钠1-4份、羧甲基壳聚糖2-5份、丙三醇2-6份、氯化钠1-4份、三羟甲基氨基甲烷1-3份、盐酸0.01-0.02份、1-2份叠氮化钠、柠檬酸1-3份、apo e羊抗人抗体3-20份和纯化水40-55份混合均匀，并过滤，得到第二试剂；将apo e抗原用标准品稀释液1l，得到不同浓度的apoe校准品，该方法制备出的试剂盒无沉淀、性能稳定、成本低廉，测试结果准确，重复性好，可广泛用于各种生化仪配套使用，具有更广泛的通用性，解决目前上市试剂抗体在保存过程中易出现沉淀，造成试剂检测结果不准的问题。

技术特征：

1.抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒制备方法，其特征在于，

3.如权利要求1所述的抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒制备方法，其特征在于，

4.如权利要求1所述的抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒制备方法，其特征在于，

5.抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒，应用于如权利要求1-4任意一项的所述的抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒制备方法，其特征在于，

6.抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒检测方法，如权利要求5所述的抗干扰的载脂蛋白e测定试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结本发明涉及免疫比浊体外诊断技术领域，具体涉及抗干扰的载脂蛋白E测定试剂盒、制备方法及检测方法，包括称取聚乙二醇5‑6份、3‑12份叠氮化钠、吐温2‑15份、纯化水水1000‑1650份、三羟甲基氨基甲烷0.45‑0.55份和盐酸15‑23份混合均匀，过滤，得到第一试剂；称取水溶性聚乙烯亚胺3‑8份、十二烷基苯磺酸钠1‑4份、羧甲基壳聚糖2‑5份、丙三醇2‑6份、氯化钠1‑4份、三羟甲基氨基甲烷1‑3份、盐酸0.01‑0.02份、1‑2份叠氮化钠、柠檬酸1‑3份、Apo E羊抗人抗体3‑20份和纯化水40‑55份混合均匀，过滤，得到第二试剂；将Apo E抗原用标准品稀释液1L，得到Apo E校准品，该方法制备的试剂盒无沉淀、性能稳定、成本低廉，测试结果准确，重复性好。技术研发人员：赵丽珍,叶萌,叶志杰,黄艳妮,苟文来受保护的技术使用者：桂林优利特医疗电子有限公司技术研发日：技术公布日：2024/11/18