一种低温乳化的水包油包水佐剂、及使用方法与应用与流程

本发明属于免疫，尤其涉及一种低温乳化的水包油包水佐剂、及使用方法与应用。

背景技术：

1、双相乳液递送系统可以分为油包水包油(o/w/o)和水包油包水(w/o/w)，在注射用药物递送系统中应用最广泛的是w/o/w，在兽用药品尤其是疫苗生物制品应用更为广泛,用在疫苗生物制品中又将其称为佐剂。在中国兽用疫苗应用最广泛的是法国赛彼科isa206水包油包水佐剂,近几年也有国产仿制产品推出但是未能替代isa206。尽管水包油包水佐剂在中国应用广泛，但是也存在不少缺陷。例如，目前的佐剂需要先将佐剂和抗原加热至30-35℃后乳化，然后再降温至2-8℃保存，高温乳化对抗原是一种严重的破坏作用，同时加热和降温过程需要消耗大量的能源。对于稳定性，现有佐剂常出现分层和析出的问题，给产品使用带来了严重的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种低温乳化的水包油包水佐剂，所述水包油包水佐剂为以下任一种佐剂：

2、1)佐剂一：注射用花生油24-28份、注射用大豆油36-40份、注射用玉米油6-10份、角鲨烷1-3份、注射用大豆卵磷脂0.5-1.5份、司盘805-6份、司盘851-2份、吐温20 1-3份、吐温80 5-6份、甘露醇单油酸酯2-3份、聚乙二醇2000.5-1.5份、聚乙二醇4000.5-1.5份、甘油1-2份、乙醇2-3份、甲醇0.2-1份、黄芪多糖0.02-0.07份、板蓝根多糖0.01-0.05份、免疫多肽0.002-0.007份和cpg 0.0001-0.0005份；

3、2)佐剂二：矿物油czs428-32份、矿物油kf5028-32份、角鲨烯1-3份、维生素e 3-7份、司盘8010-12份、司盘8517-19份、聚乙二醇600双油酸酯2-4份、黄芪多糖0.02-0.08份、转移因子0.03-0.08份和胸腺五肽0.003-0.008份。

4、优选地，所述1)中各组分用量如下：注射用花生油26份、注射用大豆油38份、注射用玉米油8份、角鲨烷2份、注射用大豆卵磷脂1份、司盘805.6份、司盘851.8份、吐温20 2份、吐温80 5.3份、甘露醇单油酸酯2.3份、聚乙二醇2001份、聚乙二醇4001份、甘油1.2份、乙醇2.2份、甲醇0.6份、黄芪多糖0.05份、板蓝根多糖0.03份、免疫多肽0.005份和cpg 0.0003份。

5、优选地，所述2)中各组分用量如下：矿物油czs430份、矿物油kf5030份、角鲨烯2份、维生素e 5份、司盘8011份、司盘8518份、聚乙二醇600双油酸酯3份、黄芪多糖0.05份、转移因子0.05份和胸腺五肽0.005份。

6、更优选地，所述1)中佐剂一的制备方法如下：

7、(1)容器中依次加入注射用花生油、注射用大豆油、注射用玉米油、角鲨烷、注射用大豆卵磷脂基础油组合物，在室温下搅拌至澄清；

8、(2)另一个容器中依次加入司盘80、司盘85、吐温20、吐温80、甘露醇单油酸酯、聚乙二醇200、聚乙二醇400表面活性剂组合物，以及甘油、乙醇和甲醇助表面活性剂，搅拌至澄清；

9、(3)将黄芪多糖、板蓝根多糖、免疫多肽和cpg免疫活性剂组合物溶于加入装有纯化水的第三个容器中，在室温搅拌条件下，再向第四个容器中同步加入上述基础油组合物和表面活性剂组合物、助表面活性剂，加料完毕后于室温下继续搅拌，然后再加入免疫活性剂组合物，继续搅拌，最后通过均质获得佐剂一。

10、更优选地，所述2)中佐剂二的制备方法如下：

11、(1)向搅拌罐中依次加入矿物油czs4、矿物油kf50、角鲨烯、维生素e基础油组合物，在室温下搅拌至澄清，备用；

12、(2)向另一个搅容器中依次加入司盘80、司盘85、聚乙二醇600双油酸酯表面活性剂组合物，搅拌至澄清；

13、(3)将黄芪多糖、转移因子和胸腺五肽免疫活性剂组合物加入装有纯化水的第三个容器中，在室温搅拌条件下再向第四个容器中同步加入基础油组合物和表面活性剂组合物，加料完毕后在室温下继续搅拌，然后再加入免疫活性剂组合物，继续搅拌，最后通过均质获得佐剂二。

14、本发明的目的之二在于提供上述低温乳化的水包油包水佐剂的使用方法，所述使用方法包括以下步骤：

15、(1)首先将抗原用磷酸缓冲液稀释，以其作为水相；

16、(2)称取佐剂一或佐剂二；

17、(3)水相和佐剂一或佐剂二在6℃±2℃水浴中预冷，待水相和水包油包水佐剂内部温度到8℃±2℃时开始乳化，制得疫苗乳液。

18、优选地，所述步骤(3)中的乳化过程为：将佐剂一或佐剂二在300-400rpm转速下搅拌，缓慢加入水相，水相加入后持续搅拌20-30min，保持温度在8℃±2℃。

19、本发明的目的之三在于提供上述低温乳化的水包油包水佐剂在制备动物疫苗中的应用。

20、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

21、本发明佐剂一中使用了可代谢的植物油作为基础油，配伍多种表面活性剂和助表面活性剂，解决了矿物油不被代谢的问题，该水包油包水(w/o/w)递送系统可以在低温下乳化使用，解决了高温破坏抗原的问题，同时还降低了能源的使用，应用该递送系统制备的疫苗在室温和37℃可以长期存放，解决了稳定性问题。

22、本发明佐剂二中使用了可低温乳化的水包油包水双相佐剂，配伍多种表面活性剂和免疫活性剂，解决了高温乳化带来的一系列问题。

技术特征：

1.一种低温乳化的水包油包水佐剂，其特征在于，所述水包油包水佐剂为以下任一种佐剂：

2.根据权利要求1所述的低温乳化的水包油包水佐剂，其特征在于，所述1)中各组分用量如下：注射用花生油26份、注射用大豆油38份、注射用玉米油8份、角鲨烷2份、注射用大豆卵磷脂1份、司盘805.6份、司盘851.8份、吐温20 2份、吐温80 5.3份、甘露醇单油酸酯2.3份、聚乙二醇2001份、聚乙二醇4001份、甘油1.2份、乙醇2.2份、甲醇0.6份、黄芪多糖0.05份、板蓝根多糖0.03份、免疫多肽0.005份和cpg 0.0003份。

3.根据权利要求1所述的低温乳化的水包油包水佐剂，其特征在于，所述2)中各组分用量如下：矿物油czs430份、矿物油kf5030份、角鲨烯2份、维生素e 5份、司盘8011份、司盘8518份、聚乙二醇600双油酸酯3份、黄芪多糖0.05份、转移因子0.05份和胸腺五肽0.005份。

4.根据权利要求1-3任一项所述的低温乳化的水包油包水佐剂，其特征在于，所述1)中佐剂一的制备方法如下：

5.根据权利要求1-3任一项所述的低温乳化的水包油包水佐剂，其特征在于，所述2)中佐剂二的制备方法如下：

6.权利要求4所述的低温乳化的水包油包水佐剂的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：

7.权利要求5所述的低温乳化的水包油包水佐剂的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：

8.根据权利要求6或7所述的使用方法，其特征在于，所述步骤(3)中的乳化过程为：将佐剂一或佐剂二在300-400rpm转速下搅拌，缓慢加入水相，水相加入后持续搅拌20-30min，保持温度在8℃±2℃。

9.权利要求1-3中任一项所述的低温乳化的水包油包水佐剂在制备动物疫苗中的应用。

技术总结本发明公开了一种低温乳化的水包油包水佐剂、及使用方法与应用，属于免疫技术领域。本发明中共涉及两种佐剂，佐剂一中使用了可代谢的植物油作为基础油，配伍多种表面活性剂和助表面活性剂，解决了矿物油不被代谢的问题，该水包油包水(W/O/W)递送系统可以在低温下乳化使用，解决了高温破坏抗原的问题，同时还降低了能源的使用，应用该递送系统制备的疫苗在室温和37℃可以长期存放，解决了稳定性问题；佐剂二中使用了可低温乳化的水包油包水双相佐剂，配伍多种表面活性剂和免疫活性剂，解决了高温乳化带来的一系列问题。技术研发人员：梁忠祥,纪巍巍受保护的技术使用者：天津万牧生生物工程有限责任公司技术研发日：技术公布日：2024/11/18