一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物及其制备方法和应用

本发明涉及药物化合物，更具体地说，它涉及一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、红树林是分布于热带、亚热带海岸潮间带的木本植物群落。它孕育了丰富的微生物资源，目前已分离鉴定的红树林真菌超过290种，已成为海洋真菌的第二大类群。红树林植物生长在高度盐渍化、土壤缺氧、高光辐射及周期性的海水浸淹的环境中使其具备了独特的代谢机制，其内生真菌能产生结构新颖的活性代谢产物是小分子药物活性先导物的重要来源。

2、阔苞菊属于半红树植物，既能在潮间带生存，又能在陆地环境中自然繁殖的两栖木本植物，同时该植物具有化气、去湿、消坚散核的功能。红树林植物是一种海洋高等植物，不仅具有护堤、净化海水等生态价值，同样是海洋药物开发和新药研究的主要药源之一。其特殊的生态环境，使其内生真菌更为独特，且海洋微生物可以利用现代微生物发酵工程技术进行再生产，无原材料后顾之忧，不会破坏生态平衡，易实现产业化等优势，使得对红树林药用价值的研究更为方便。多年来致力于红树植物内生真菌的研究，从中分离得到上百株红树内生真菌，具有很好的应用前景。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种从红树内生真菌alternariasp.hn-17的次级代谢产物中分离鉴定出新的异香豆素类化合物alterisocouma。

2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物，所述异香豆素类化合物alterisocouma，分子式为c18h16o8，其化学结构如下式(ⅰ)所示：

3、

4、本发明进一步提供上述化合物alterisocouma的制备方法：

5、所述制备方法包括如下步骤：

6、(1)真菌培养：将菌株接种在相应培养基上室温发酵培养27±3天；所述培养基为大米培养基，所述大米培养基由大米100g和0.3％的粗盐水80ml混合组成；

7、菌株首先经过活化，具体为将链格孢属真菌(alternariasp.hn-17)接种到pda培养基上室温孵育3天得到活化后的菌种，所用pda培养基组成为：马铃薯浸粉300.0g/l，葡萄糖20.0g/l，琼脂15.0g/l，氯霉素0.1g/l；

8、然后将活化的菌株接种到pdb培养基中，所用pdb培养基组成为：马铃薯浸粉300.0g/l，葡萄糖20.0g/l，于恒温摇床中27℃条件下培养4-5天，得到种子液；

9、(2)粗提物的制备：30天后将步骤(1)的培养基中注入适量分析纯甲醇溶液，提取3次，过滤后合并有机相浓缩得到粗提物浸膏，并用乙酸乙酯萃取，减压浓缩获得乙酸乙酯部位浸膏；

10、(3)分离纯化：将步骤(2)中浸膏硅胶拌样，采用正相硅胶柱分离，以乙酸乙酯-石油醚(0:1-1:0)为洗脱剂梯度洗脱，得到若干组分(fr.1-fr.36)；

11、将组分fr.8通过sephadexlh-20凝胶色谱柱分离，洗脱剂为体积比1：1的二氯甲烷-甲醇，点板后合并得到组分fr.8.1和fr.8.2；将fr.8.1再次利用硅胶色谱柱分离，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇混合溶液(比例为97:3)，点板后合并得到组分fr.8.1.1和fr.8.1.2；

12、fr.8.1.1进一步利用反相hplc分离(流动相为甲醇/水：90/10，流速0.4ml/min，保留时间为7.5min)纯化，最终得到化合物alterisocouma。

13、本发明进一步对化合物alterisocouma做结构鉴定：利用hresims测得化合物的分子量为359.07756[m-h]-，分子式为c18h16o8。利用nmr核磁测得1h、13c、1h-1hcosy、hsqc、hmbc和noesy谱图，解析后确定了化合物alterisocouma的结构。

14、本发明提供的抗炎化合物alterisocouma具有显著的抗炎活性，能够应用于制备抗炎药物。

15、本发明提供了上述抗炎化合物alterisocouma在制备抗炎药物中的应用。

16、综上所述，本发明具有以下有益效果：

17、本发明提供的化合物alterisocoum a，其具有显著的抗炎活性，抗炎活性化合物alterisocoum a的no(一氧化氮)抑制活性筛选试验表明，抗炎活性化合物alterisocoum a对no的生成表现出了明显的抑制活性，其半数抑制浓度(ic50值)为14.38μm，而阳性对照l-nmma(总nos抑制剂)的半数抑制浓度(ic50值)为32.83μm。同时通过westrn blot(免疫印记)实验，发现alterisocoum a能抑制lps诱导的raw264.7巨噬细胞引起的no过量生成及inos和cox-2蛋白水平的过度表达、下调lps刺激的raw264.7细胞中nf-κb通路中p-iκbα及p-p65蛋白的过度表达，同时下调mapk通路中p-jnk,p-epk和p-p38蛋白的过度表达，其可能通过nf-κb和mapk信号通路来发挥抗炎作用。

18、因此可将本发明提供的活性化合物alterisocoum a应用于制备抗炎药物，为开发抗炎药物提供新的选择。

19、本发明提供的抗炎活性化合物alterisocoum a为链格孢属真菌的次级代谢产物，可以通过微生物发酵的方法制备得到，制备方法简单、周期短、培养条件温和、副产物少、成本低，可以无限循环发酵获得，不受资源短缺的限制，绿色环保，易于实现工业化，不仅符合现代绿色低碳环保经济的需求，还能够为潜在抗炎药物的发现提供新的途径。

技术特征：

1.一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物，其特征是：所述异香豆素类抗炎化合物为alterisocoum a，分子式为c18h16o8，其化学结构如下式(ⅰ)所示：

2.根据权利要求1所述的一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物的制备方法，其特征是：所述制备方法包括如下步骤：

3.根据权利要求1所述的一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物在制备抗炎药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物的应用，其特征是：所述抗炎药物中异香豆素类化合物组成占比为60-90％。

5.根据权利要求3所述的一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物的应用，其特征是：所述抗炎药物根据辅料的不同可制成片剂、颗粒剂或注射剂。

技术总结本发明公开了一种红树内生真菌中具有抗炎活性的异香豆素类化合物及其制备方法和应用，涉及药物化合物技术领域，其技术方案要点是：所述异香豆素类抗炎化合物为alterisocoum A，以及该抗炎化合物的制备方法和应用。所述异香豆素类抗炎化合物的分子式为C<subgt;18</subgt;H<subgt;16</subgt;O<subgt;8</subgt;，其化学结构如下式(Ⅰ)所示：该抗炎活性化合物可以通过微生物发酵的方法制备得到，制备方法简单、周期短、培养条件温和、副产物少、成本低，可以无限循环发酵获得，不受资源短缺的限制，绿色环保，易于实现工业化，不仅符合现代绿色低碳环保经济的需求，还能够为潜在抗炎药物的发现提供新的途径。技术研发人员：陈岩,李兆昆,朱君豪受保护的技术使用者：安徽医科大学技术研发日：技术公布日：2024/11/18