一种胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的定量检测方法与流程

本发明属于分析化学，涉及一种胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的定量检测方法。

背景技术：

1、胞磷胆碱钠为胆碱胞嘧啶核苷二磷酸酯的单钠盐，是核苷衍生物；通过降低脑血管阻力，增加脑血流来促进脑物质代谢，改善脑循环。也可增强脑干上行网状激活系统的机能，增强椎体系统的功能，改善运动麻痹，故对促进大脑功能的恢复和苏醒有一定作用，用于治疗急性颅脑外伤及脑手术后的意识障碍。

2、磷酸胆碱为胞磷胆碱钠的降解杂质，在胞磷胆碱钠注射液中随放置时间的延长而增加。磷酸胆碱弱紫外吸收的特点给检测带来了困难，使用高效液相色谱检测方法无法准确检测胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的含量，因此，亟需建立一种能够有效检测出胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱杂质的含量的定量检测方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的定量检测方法。

2、本发明建立的磷酸胆碱的lc-ms/ms定量检测方法，能够有效检测出胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱杂质的含量，为该杂质的监控提供有效手段，为胞磷胆碱钠注射液生产工艺的进一步优化打下了基础。该方法具有较高的准确性、稳定性和分离度。

3、本发明提供的一种胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的定量检测方法，包括如下步骤：采用高效液相色谱-高分辨质谱法对胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱进行定量检测。

4、上述的方法中，所述的定量检测方法，包括如下步骤：

5、1)溶液的配制：包括磷酸胆碱对照品储备液、磷酸胆碱对照品工作液、胞磷胆碱钠供试品溶液，其中，

6、稀释液：水；

7、所述磷酸胆碱对照品储备液：取磷酸胆碱对照品加水溶解配制成浓度为0.15mg/ml的磷酸胆碱对照品储备液；

8、所述磷酸胆碱对照品工作液：取所述磷酸胆碱对照品储备液用稀释液逐级稀释得到浓度为15ng/ml的磷酸胆碱对照品工作液；

9、所述胞磷胆碱钠供试品溶液：取胞磷胆碱钠注射液加入稀释液逐级稀释制得；

10、2)将所述磷酸胆碱对照品工作液、所述胞磷胆碱钠供试品溶液分别通过高效液相色谱-高分辨质谱法进行测定分析，即能定量检测胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱。

11、本发明中，所述磷酸胆碱对照品工作液具体按照如下步骤配置：取所述磷酸胆碱对照品储备液加入稀释液稀释定容，得到浓度为15μg/ml对照品储备液1；取所述对照品储备液1加入稀释液稀释并定容，得到浓度为150ng/ml对照品储备液2；取对照品储备液2加入稀释液稀释并定容，得到浓度为15ng/ml的对照品工作液；

12、所述胞磷胆碱钠供试品溶液：取胞磷胆碱钠注射液0.8ml于50ml容量瓶中，加水稀释并定容至刻度线；精密移取供试品储备液1ml于20ml量瓶中，加入稀释液稀释并定容至刻度线，得到供试品储备液1；精密移取供试品储备液1 1ml于20ml量瓶中，加入稀释液稀释并定容至刻度线，即得，作为供试品溶液。

13、上述的方法中，所述高效液相色谱-高分辨质谱法中高效液相色谱仪的工作条件如下：

14、色谱柱：waters sunfire c18 3.5μm 3.0×100mm；

15、流动相：a为水，b为0.1％甲酸-乙腈；

16、进样器温度：4℃；柱温：40℃；流速：0.3ml/min；进样体积：10.0μl；

17、流动相洗脱梯度：0.01～4.0min，由2％b升至8％b；4.0～4.5min，由8％b升至80％b；4.5～6.0min，80％b不变；6.0～6.1min，由80％b降至2％b；6.1～9.0min，2％b不变。上述流动相洗脱梯度中以b的体积百分含量计。

18、上述的方法中，所述高效液相色谱-高分辨质谱法中质谱仪的工作条件：

19、esi+源，mrm模式，cur：20，cad：medium，

20、tem：550℃，is：5000，gas1：60，gas2：55；

21、母离子为184.2m/z，子离子为86.0m/z，解离电压为72v，碰撞能为25v；母离子为184.2m/z，子离子为99.2m/z，解离电压为72v，碰撞能为40v；

22、质谱采集时间：1.2min～3.0min。

23、本发明采用上述技术方案，具有如下有益效果：

24、本发明采用高效液相色谱-高分辨质谱联用技术，建立了胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的分析方法，本发明揭示了磷酸胆碱的碎裂模式，本发明中的分析方法还可用于分析其他结构类似杂质组分，为严格控制胞磷胆碱钠注射液的质量提供了研究基础。

技术特征：

1.一种胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：采用高效液相色谱-高分辨质谱法对胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱进行定量检测。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的定量检测方法，包括如下步骤：

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱-高分辨质谱法中高效液相色谱仪的工作条件如下：

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱-高分辨质谱法中质谱仪的工作条件：

技术总结本发明公开了一种胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的定量检测方法。本发明提供的胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱的定量检测方法，包括如下步骤：采用高效液相色谱‑高分辨质谱法对胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱进行定量检测。本发明建立的磷酸胆碱的LC‑MS/MS定量检测方法，能够有效检测出胞磷胆碱钠注射液中磷酸胆碱杂质的含量，为该杂质的监控提供有效手段，为胞磷胆碱钠注射液生产工艺的进一步优化打下了基础。该方法具有较高的准确性、稳定性和分离度。技术研发人员：孙莹,王永军,赵诗佳,王璐受保护的技术使用者：锦州奥鸿药业有限责任公司技术研发日：技术公布日：2024/11/18