经修饰的干扰素γ蛋白质和其用途

本发明涉及经修饰的或被生物工程改造过的携带至少一种修饰的蛋白质。具体地说，所公开的经修饰的蛋白质是经修饰的干扰素γ，它足量施予受试者后，能够在所述受试者中起始针对免疫应答的细胞信号传导，而所携带的修饰基本上不会产生任何不良影响。

背景技术：

1、干扰素γ(ifn-γ)是在先天性和后天性免疫系统中发挥多效性作用的ii型干扰素[1]。它展现抗病毒和抗分枝杆菌活性、通过上调主要组织相容复合物(mhc)分子来实现的抗原呈递、抗增殖作用和免疫抑制作用[2]。ifn-γ在结构上是同源二聚体，按照头接尾取向，它由非共价的自组装体组成。螺旋区域a和b与它们的连接环、f螺旋中的位置111处的组氨酸残基(h111)和柔性c端是受体结合用的重要区域[3]。配体结合引起受体低聚，其中两个α-受体链ifn-γr1结合到一个ifn-γ同源二聚体，随后两个β-受体链ifn-γr2被募集到所述复合物，诱导ifn-γ刺激的基因表达[4,5]。

2、中和型抗ifn-γ自身抗体的存在与成年发作型免疫缺陷(aoid)有关[6-10]。缺乏ifn-γ介导功能的患者容易出现机会性感染，尤其是非结核分枝杆菌(ntm)感染。2016年，林ch(lin ch)等人使用30聚体不重叠合成肽鉴定出被抗ifn-γ自身抗体识别的表位。数据说明ifn-γ的c端区域(氨基酸121-131，spaaktgkrkr)是被患者自身抗体识别的连续表位[11]。最近在分枝杆菌感染的患者中鉴定出了识别不连续表位的中和型自身抗体(pct公开号wo 2018/202200a1)。顾(ku)等人在美国专利第10273278号中也教导了一种评价重组人类干扰素γ在调控外周血液单核细胞方面的功效的方法。最近已经利用人-牛嵌合蛋白鉴定出被其它中和型抗ifn-γmab识别的构象表位。因此，已发现位于区域a和e的两个主要表位[13]。此外，识别区域a和e的mab显示不同程度的中和活性。此发现证实ifn-γ是由各种构象表位构成。然而，被自身抗体识别的表位尚未被充分探究。更重要的是，基于所获得的关于ifn-γ上存在的表位的信息有可能衍生出药剂。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种被生物工程改造过的能够形成干扰素γ的肽或蛋白质，它携带的修饰不同于野生型干扰素γ，但它以药学上可接受的量施予受试者后，能够在所述受试者中触发针对免疫应答的细胞信号传导。

2、本发明的另一目标是提供一种经修饰的蛋白质，它合并的修饰允许其形成的干扰素γ逃避与至少一种自身抗体的相互作用，所述相互作用禁止针对免疫应答的细胞信号起始。

3、另外，本发明的另一目标是提供一种被生物工程改造过的干扰素γ，它携带的修饰位于不连续表位的周围，使得建立不连续表位的一或多个特定氨基酸经修饰以阻止接受干扰素γ施予的受试者中所存在的至少一种自身抗体在不连续表位上发生反应，所述反应阻断针对免疫应答的细胞信号起始。

4、本发明的更多目标是提供一种通过施予上述被生物工程改造过的肽或经修饰的干扰素γ蛋白来刺激患有aoid的受试者的免疫应答的方法。

5、根据若干优选实施例，本发明涉及经修饰的干扰素γ(ifn-γ)的经修饰的或被生物工程改造过的蛋白质，它包含位于如seq id no.1所示的序列的位置27至40的氨基酸的至少一种修饰。更优选的是，经修饰的ifn-γ当施予受试者后，能够起始针对免疫应答的细胞信号传导。所形成的ifn-γ对至少一种能够在不连续表位处中和野生型ifn-γ的自身抗体具有抗性。

6、在更多实施例中，所述修饰改变所形成的ifn-γ的不连续表位。此外，所述修饰包含位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸的取代。

7、在若干实施例中，位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸被丙氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或色氨酸取代。

8、本发明的另一方面涉及一种在成年发作型免疫缺陷(aoid)受试者中起始或刺激针对免疫应答的细胞信号传导的方法，包括施予多种被生物工程改造过的肽和/或蛋白质的步骤。优选地，被生物工程改造过的肽形成干扰素γ蛋白质，它包含位于如seq id no.1所示的序列的位置27至40的氨基酸的至少一种修饰。

9、在所公开的方法的更多实施例中，所述修饰包含位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸的取代。更优选的是，在若干实施例中，位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸被丙氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或色氨酸取代。

10、相应地，在所公开的方法的若干实施例中，所述修饰改变所形成的ifn-γ的不连续表位，使得所形成的ifn-γ对至少一种能够在不连续表位处中和野生型ifn-γ的自身抗体具有抗性。

11、本发明的更多方面涉及一种载体，它包含能翻译而产生形成干扰素的蛋白质的多核苷酸序列，所述蛋白质包含位于如seq id no.1所示的序列的位置27至40的氨基酸的至少一种修饰。经修饰的ifn-γ当施予受试者后，能够起始针对免疫应答的细胞信号传导。

技术特征：

1.一种经修饰的干扰素γ(ifn-γ)蛋白质，其包含位于如seq id no.1所示的序列的位置27至40的氨基酸的至少一种修饰，其中所述经修饰的ifn-γ当施予受试者后能够起始针对免疫应答的细胞信号传导。

2.根据权利要求1所述的经修饰的蛋白质，其中所述修饰改变所形成的ifn-γ的不连续表位。

3.根据权利要求2所述的经修饰的蛋白质，其中所述修饰包含位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸的取代。

4.根据权利要求3所述的经修饰的蛋白质，其中所述位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸被丙氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或色氨酸取代。

5.根据权利要求3所述的经修饰的蛋白质，其中所形成的ifn-γ对至少一种能够在所述不连续表位处中和野生型ifn-γ的自身抗体具有抗性。

6.一种在成年发作型免疫缺陷(aoid)受试者中起始针对免疫应答的细胞信号传导的方法，所述方法包括施予多种经修饰的蛋白质的步骤，其中所述经修饰的蛋白质是经修饰的干扰素γ蛋白质，其包含位于如seq id no.1所示的序列的位置27至40的氨基酸的至少一种修饰。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述修饰包含位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸的取代。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸被丙氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或色氨酸取代。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述修饰改变所形成的ifn-γ的不连续表位，使得所形成的ifn-γ对至少一种能够在所述不连续表位处中和野生型ifn-γ的自身抗体具有抗性。

10.一种载体，其包含能够翻译以产生经修饰的ifn-γ蛋白质的多核苷酸序列，所述经修饰的ifn-γ蛋白质包含位于如seq id no.1所示的序列的位置27至40的氨基酸的至少一种修饰，其中所述经修饰的ifn-γ当施予受试者后，能够起始针对免疫应答的细胞信号传导。

11.根据权利要求10所述的载体，其中所述修饰包含位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸的取代。

12.根据权利要求11所述的载体，其中所述位于位置27、位置29和位置30的氨基酸中的至少一个氨基酸被丙氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或色氨酸取代。

13.根据权利要求10所述的载体，其是pet-21a或pqe-10。

技术总结本发明涉及一种经修饰的干扰素γ(IFN‑γ)的经修饰的或被生物工程改造过的蛋白质。优选的是，所述经修饰的IFN‑γ包含位于如SEQ ID NO.1所示的序列的位置27至40的氨基酸的至少一种修饰。所述经修饰的IFN‑γ当施予受试者后，能够起始针对免疫应答的细胞信号传导。技术研发人员：查特蔡·塔亚皮瓦塔纳,安帕·亚萨穆特,蒙塔洛普·扬拜,瓦讷让·桑吉兰·李受保护的技术使用者：清迈大学技术研发日：技术公布日：2024/11/18