一种党参汤剂的提取工艺

1.本发明涉及中药成分提取技术领域，尤其涉及一种党参汤剂的提取工艺。


背景技术：

2.党参为桔梗科植物党参、素花党参或川党参的干燥根。党参味甘，性平，具有健脾益肺，养血生津的功效。党参是补益要药，在中医临床处方及中成药中使用量较大，为历版《中国药典》所收载。现代社会，人们的生活节奏日益加快，传统中药汤剂已不能满足广大患者的需求，而中药配方颗粒以其携带方便、易于服用、可随症加减等优势，在临床应用中已备受青睐。因此，为了进一步开发和充分利用党参药材，以使党参汤剂符合现代技术发展及社会需求，有必要寻求和开发适宜的党参汤剂现代化提取工艺，为党参配方颗粒新型制剂的开发奠定良好的研究基础。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供一种党参汤剂的提取工艺，该工艺对组成党参汤剂的原料进行嗜酸乳杆菌发酵、酶解、nka-9大孔吸附树脂纯化、纳滤浓缩处理后干燥得到用于制作中药制剂的党参汤剂提取物。
4.为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
5.一种党参汤剂的提取工艺，包括以下步骤：
6.⑴
嗜酸乳杆菌发酵
7.将复方党参汤剂的各原料药分别粉碎，过60～80目筛，混合各原料药粉末，并向其中加入混合药粉5～10倍重量的纯净水，封闭装有物料的容器后置于蒸汽灭菌锅中灭菌处理，待混合原料药冷却后置于无氧发酵罐中，接种嗜酸乳杆菌菌液进行无氧发酵，发酵产物经离心取上清液，得到发酵液；
8.⑵
酶解处理
9.收集药渣后加入其质量4～8倍量的纯水中，调节ph4.5～6.0，温度45～60℃，加入复合酶，酶解反应2～6h，然后升温至95～100℃，在超声条件下，恒温处理处理10～20min，再冷却至70～85℃，保温处理1～3h，得到酶解物料，酶解物料经离心取上清液，得到酶解液；
10.⑶
大孔吸附树脂纯化
11.将发酵液和酶解液混合，混合液经nka-9大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱，再用20％-90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
12.⑷
纳滤浓缩
13.乙醇洗脱液采用纳滤膜浓缩，得到浓缩液；
14.⑸
干燥处理
15.浓缩液进行真空减压浓缩得到60℃下相对密度1.1-1.15的浸膏，浸膏冷冻干燥，得到党参汤剂提取粉。
16.进一步地，步骤(1)中，所述灭菌处理是在115～125℃下高温灭菌15～25min，离心是离心机在3000-12000r/min下处理5～10min。
17.进一步地，步骤(1)中，所述嗜酸乳杆菌菌液为嗜酸乳酸杆菌标准菌as1.2686冻干菌粉经活化和扩大培养的菌悬液，嗜酸乳杆菌菌液接种于无氧发酵罐的接种量为0.5％-2％。
18.进一步地，步骤(2)中，所述复合酶由按重量比的果胶酶：木聚糖酶：纤维素酶＝0.6：0.4：1组成，其中纤维素酶酶活为10000iu/g，木聚糖酶酶活为100000iu/g，果胶酶酶活为50000iu/g，复合酶接种量为药渣重量的1-3％。
19.进一步地，步骤(3)中，所述nka-9大孔吸附树脂径高比1：8～10，吸附时间3～5h，20％～90％乙醇洗脱体积为nka-9大孔吸附树脂体积的5～30倍。
20.进一步地，步骤(4)中，纳滤膜截留分子量为90～200da。
21.进一步地，步骤(5)中，真空减压浓缩的真空度0.03～0.08mpa，温度50～80℃。
22.进一步地，步骤(5)中，冷冻干燥是将浸膏预冷至-40～-60℃，升华干燥5-10h至梧浸膏温度为1-10℃，解析干燥5-20h至浸膏温度为20-30℃。
23.本发明的有益技术效果是：本发明的党参汤剂的提取工艺通过发酵、酶解处理提高党参汤剂原料药的提取率，再经大孔吸附树脂纯化、纳滤浓缩进行有效成分的纯化，提高党参汤剂提取物的药效，浸膏经干燥处理后可用于党参汤剂颗粒剂、浓缩丸的原料；整个提取过程耗时短，条件相对温和，党参汤剂有效成分纯度高。
具体实施方式
24.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
25.实施例1
26.将复方党参汤剂的各原料药分别粉碎，过60目筛，混合各原料药粉末，并向其中加入混合药粉5倍重量的纯净水，封闭装有物料的容器后置于蒸汽灭菌锅中在115℃下高温灭菌25min，待混合原料药冷却后置于无氧发酵罐中，接种0.5％的嗜酸乳杆菌菌液进行无氧发酵，发酵产物在3000r/min下离心处理10min，取上清液，得到发酵液；收集药渣后加入其质量4倍量的纯水中，调节ph4.5，温度45℃，加入复合酶，酶解反应2h，然后升温至100℃，在超声条件下，恒温处理处理10min，再冷却至70℃，保温处理3h，得到酶解物料，酶解物料经离心取上清液，得到酶解液；将发酵液和酶解液混合，混合液经nka-9大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱，再用20％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；所述nka-9大孔吸附树脂径高比1：8，吸附时间3h，20％乙醇洗脱体积为nka-9大孔吸附树脂体积的5倍；乙醇洗脱液采用截留分子量为90da纳滤膜浓缩，得到浓缩液；浓缩液进行真空减压浓缩得到60℃下相对密度1.1的浸膏，浸膏冷冻干燥，得到党参汤剂提取粉。
27.本实施例中，所述嗜酸乳杆菌菌液为嗜酸乳酸杆菌标准菌as1.2686冻干菌粉经活化和扩大培养的菌悬液；活化操作是在无菌条件下，用无菌吸管往西林瓶嗜酸乳酸杆菌标准菌as1.2686冻干菌粉中加入0.3ml脑心浸液培养基，充分悬浮后取适量的菌悬液于胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂(tsa-ye)斜面上36℃培养36h，然后按上述操作接着转接一次，得到
活化后的嗜酸乳杆菌，扩大培养是将二次活化后的嗜酸乳杆菌连续进行一级种子罐培养、二级种子罐培养得到嗜酸乳杆菌菌液。
28.本实施例中，所述复合酶由按重量比的果胶酶：木聚糖酶：纤维素酶＝0.6：0.4：1组成，其中纤维素酶酶活为10000iu/g，木聚糖酶酶活为100000iu/g，果胶酶酶活为50000iu/g，复合酶接种量为药渣重量的1-3％。
29.本实施例中，真空减压浓缩的真空度0.03mpa，温度50℃。
30.本实施例中，冷冻干燥是将浸膏预冷至-40℃，升华干燥5h至梧浸膏温度为1-10℃，解析干燥20h至浸膏温度为20-30℃。
31.本实施例中，复方党参汤剂采用的是复方党参片配方，配方包括：党参550g、丹参150g、当归150g、北沙参100g和金果榄50g。对采用本实施例的方法得到的组方提取物中党参炔苷的含量进行检测，发现党参炔苷转移率为58.7，与标准党参汤剂无显著差异。
32.实施例2
33.将复方党参汤剂的各原料药分别粉碎，过80目筛，混合各原料药粉末，并向其中加入混合药粉10倍重量的纯净水，封闭装有物料的容器后置于蒸汽灭菌锅中在125℃下高温灭菌15min，待混合原料药冷却后置于无氧发酵罐中，接种2％的嗜酸乳杆菌菌液进行无氧发酵，发酵产物在12000r/min下离心处理5min，取上清液，得到发酵液；收集药渣后加入其质量8倍量的纯水中，调节ph6.0，温度60℃，加入复合酶，酶解反应6h，然后升温至95℃，在超声条件下，恒温处理处理20min，再冷却至85℃，保温处理3h，得到酶解物料，酶解物料经离心取上清液，得到酶解液；将发酵液和酶解液混合，混合液经nka-9大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱，再用90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；所述nka-9大孔吸附树脂径高比1：10，吸附时间3h，90％乙醇洗脱体积为nka-9大孔吸附树脂体积的30倍；乙醇洗脱液采用截留分子量为200da纳滤膜浓缩，得到浓缩液；浓缩液进行真空减压浓缩得到60℃下相对密度1.15的浸膏，浸膏冷冻干燥，得到党参汤剂提取粉。
34.本实施例中，所述嗜酸乳杆菌菌液为嗜酸乳酸杆菌标准菌as1.2686冻干菌粉经活化和扩大培养的菌悬液；活化操作是在无菌条件下，用无菌吸管往西林瓶嗜酸乳酸杆菌标准菌as1.2686冻干菌粉中加入0.3ml脑心浸液培养基，充分悬浮后取适量的菌悬液于胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂(tsa-ye)斜面上36℃培养36h，然后按上述操作接着转接一次，得到活化后的嗜酸乳杆菌，扩大培养是将二次活化后的嗜酸乳杆菌连续进行一级种子罐培养、二级种子罐培养得到嗜酸乳杆菌菌液。
35.本实施例中，所述复合酶由按重量比的果胶酶：木聚糖酶：纤维素酶＝0.6：0.4：1组成，其中纤维素酶酶活为10000iu/g，木聚糖酶酶活为100000iu/g，果胶酶酶活为50000iu/g，复合酶接种量为药渣重量的3％。
36.本实施例中，真空减压浓缩的真空度0.08mpa，温度80℃。
37.本实施例中，冷冻干燥是将浸膏预冷至-60℃，升华干燥10h至梧浸膏温度为1-10℃，解析干燥5h至浸膏温度为20-30℃。
38.本实施例中，复方党参汤剂采用的是复方党参片配方，配方包括：党参550g、丹参150g、当归150g、北沙参100g和金果榄50g。对采用本实施例的方法得到的组方提取物中党参炔苷的含量进行检测，发现党参炔苷转移率为58.4，与标准党参汤剂无显著差异。
39.实施例3
40.将复方党参汤剂的各原料药分别粉碎，过80目筛，混合各原料药粉末，并向其中加入混合药粉8倍重量的纯净水，封闭装有物料的容器后置于蒸汽灭菌锅中在121℃下高温灭菌20min，待混合原料药冷却后置于无氧发酵罐中，接种1％的嗜酸乳杆菌菌液进行无氧发酵，发酵产物在8000r/min下离心处理8min，取上清液，得到发酵液；收集药渣后加入其质量6倍量的纯水中，调节ph5，温度50℃，加入复合酶，酶解反应4h，然后升温至95℃，在超声条件下，恒温处理处理15min，再冷却至75℃，保温处理2h，得到酶解物料，酶解物料经离心取上清液，得到酶解液；将发酵液和酶解液混合，混合液经nka-9大孔吸附树脂吸附后，先用去离子水洗脱，再用70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；所述nka-9大孔吸附树脂径高比1：8，吸附时间4h，70％乙醇洗脱体积为nka-9大孔吸附树脂体积的20倍；乙醇洗脱液采用截留分子量为100da纳滤膜浓缩，得到浓缩液；浓缩液进行真空减压浓缩得到60℃下相对密度1.15的浸膏，浸膏冷冻干燥，得到党参汤剂提取粉。
41.本实施例中，所述嗜酸乳杆菌菌液为嗜酸乳酸杆菌标准菌as1.2686冻干菌粉经活化和扩大培养的菌悬液；活化操作是在无菌条件下，用无菌吸管往西林瓶嗜酸乳酸杆菌标准菌as1.2686冻干菌粉中加入0.3ml脑心浸液培养基，充分悬浮后取适量的菌悬液于胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂(tsa-ye)斜面上36℃培养36h，然后按上述操作接着转接一次，得到活化后的嗜酸乳杆菌，扩大培养是将二次活化后的嗜酸乳杆菌连续进行一级种子罐培养、二级种子罐培养得到嗜酸乳杆菌菌液。
42.本实施例中，所述复合酶由按重量比的果胶酶：木聚糖酶：纤维素酶＝0.6：0.4：1组成，其中纤维素酶酶活为10000iu/g，木聚糖酶酶活为100000iu/g，果胶酶酶活为50000iu/g，复合酶接种量为药渣重量的2％。
43.本实施例中，真空减压浓缩的真空度0.05mpa，温度65℃。
44.本实施例中，冷冻干燥是将浸膏预冷至-50℃，升华干燥7h至梧浸膏温度为1-10℃，解析干燥10h至浸膏温度为20-30℃。
45.本实施例中，复方党参汤剂采用的是复方党参片配方，配方包括：党参550g、丹参150g、当归150g、北沙参100g和金果榄50g；对采用本实施例的方法得到的组方提取物中党参炔苷的含量进行检测，发现党参炔苷转移率为58.9，与标准党参汤剂无显著差异。
46.以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。