一株分泌氟啶胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用的制作方法

技术特征：
1.一株分泌氟啶胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株ckg，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏编号cgmcc no.20790。2.氟啶胺单克隆抗体，其特征在于：它由权利要求1所述保藏编号为cgmcc no. 20790的杂交瘤细胞株ckg分泌产生。3.氟啶胺半抗原，其特征在于分子式如下：。4.权利要求3所述氟啶胺半抗原的制备方法，其特征在于步骤如下：称取氟啶胺于反应容器中，用dmso溶解，再加入koh；另称取β
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巯基丙酸，用dmso溶解；在搅拌下将β
‑
巯基丙酸溶液缓慢滴加到溶解后的氟啶胺中，于油浴上使之缓慢升温，保温后，撤去油浴；待产物自然冷却至室温后，加入水，采用hcl溶液调节ph值；将此混合液转移到分液漏斗中，用二氯甲烷分次提取，收集有机相；用nahco3水溶液分次洗涤二氯甲烷提取液，收集水相；用少量乙醚洗涤水相，弃去乙醚层；再用hcl溶液调节水相ph值，然后用乙酸乙酯分次萃取水相，合并乙酸乙酯提取液；用少量蒸馏水洗涤乙酸乙酯，弃水层；提取液经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得少量黄色粘稠液体；加入少量丙酮溶液溶解，静置过夜，有黄色晶体析出，过滤即得到氟啶胺半抗原。5.根据权利要求4所述氟啶胺半抗原的制备方法，其特征在于步骤如下：称取氟啶胺6
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9g于反应容器中，用20
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40ml dmso溶解，再加入koh 2.5
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5g；另称取β
‑
巯基丙酸2
‑
4g，用5
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10ml dmso溶解并转移至50ml恒压滴液漏斗中；在搅拌下将β
‑
巯基丙酸溶液缓慢滴加到反应容器中，于油浴上使之缓慢升温至100
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120℃，保温2
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4h后，撤去油浴；待产物自然冷却至室温后，加入20
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50ml水，以6 mol
ּ l
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1 hcl溶液调节ph值为2
‑
3；将此混合液转移到250ml分液漏斗中，用50
‑
100ml 二氯甲烷分2
‑
3次次提取，收集有机相；用50
‑
100ml 1mol
ּ l
‑
1 nahco3水溶液分2
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3次洗涤二氯甲烷提取液，收集水相；用少量乙醚洗涤水相，弃去乙醚层；再用 6mol
ּ l
‑
1 hcl溶液调节水相ph值为2
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3，然后用50
‑
100ml乙酸乙酯分2
‑
3次萃取水
相，合并乙酸乙酯提取液；用少量蒸馏水洗涤乙酸乙酯，弃水层；提取液经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得少量黄色粘稠液体；加入少量丙酮溶液溶解，静置过夜，有黄色晶体析出，过滤即得到氟啶胺半抗原。6.氟啶胺完全抗原，其特征在于其结构简式如下：。7.氟啶胺完全抗原的制备方法，其特征在于：将氟啶胺半抗原、n
‑
羟基琥珀酰亚胺nhs及1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐edc溶解于无水n,n
‑
二甲基甲酰胺dmf中，搅拌进行反应，得到氟啶胺半抗原溶液，即a液；将牛血清蛋白用碳酸盐缓冲溶液cbs稀释，得到b液；将a液加入到b液中进行反应，得到反应液；用磷酸盐缓冲液pbs透析反应液，得到氟啶胺完全抗原。8.氟啶胺包被原的制备方法，其特征在于：将氟啶胺半抗原、n
‑
羟基琥珀酰亚胺nhs溶解于无水n,n
‑
二甲基甲酰胺dmf中，室温搅拌反应，得到氟啶胺半抗原溶液；将1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐edc溶解于无水dmf后，加入到氟啶胺半抗原溶液中，室温搅拌进行反应，得到a液；将鸡卵白蛋白ova用碳酸盐缓冲液cbs稀释，得到b液；将逐滴将a液缓慢加入到b液中进行反应，得到反应液；用pbs溶液透析反应液，除去未反应的小分子半抗原，得到包被原。9.权利要求2所述氟啶胺单克隆抗体的应用，其特征是：建立氟啶胺含量的免疫检测方法，应用于食品中氟啶胺的检测。10.权利要求8所述氟啶胺包被原的制备方法在识别氟啶胺方面的应用。

技术总结
一株分泌氟啶胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明提供了一株分泌氟啶胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株CKG，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏编号CGMCC No.20790。本发明将氟啶胺的完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化，通过颈背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。将高效价，低IC


技术研发人员：胥传来 刘杰 匡华 刘丽强 宋珊珊 胡拥明 徐丽广 胥欣欣 吴爱红
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：2021.08.08
技术公布日：2021/10/15