一种毛囊干细胞的原代分离方法与流程

技术特征：
1.一种毛囊干细胞的原代分离方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将采集的头皮组织先用75%乙醇浸泡1
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3分钟灭菌后，用含双抗的pbs清洗，去除多余的皮下脂肪组织；步骤2、解剖镜下用灭菌的镊子取出单个毛囊；步骤3、将单个毛囊加入到0.25%中性蛋白酶，37℃消化13
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30分钟，去除真皮鞘；步骤4、将去除真皮鞘的毛囊于0.25%胰蛋白酶中37℃消化10
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20分钟，待细胞完全解离后，用含10�s和双抗的dmem/f12完全培养基终止消化，然后用含双抗的pbs清洗两次；步骤5、将清洗完的毛囊放置在直径10cm的培养皿中，用灭菌的手术刀或者手术剪切碎，分散在培养皿中，周围滴加50
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100ul dmem/f12完全培养基，润湿切碎的毛囊，使之贴壁，然后放入37℃、含5% co2的培养箱中，倒置培养2小时；之后，步骤6、沿着培养皿壁缓慢添加5
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10ml dmem/f12完全培养基，完全没过碎毛囊；前三天完全不动，第四天开始每3天隔着培养箱的玻璃观察是否需要添加培养基。2.根据权利要求1所述毛囊干细胞的原代分离方法，其特征在于，步骤1为：将得到的头皮采用75%的乙醇浸泡1
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3分钟，以灭杀可能存在的细菌、真菌，然后，再采用生理盐水或含双抗的pbs反复清洗，去除多余的皮下脂肪。3.根据权利要求1所述毛囊干细胞的原代分离方法，其特征在于，步骤5中分散碎毛囊时，间距相隔为1cm。4.根据权利要求1或3所述毛囊干细胞的原代分离方法，其特征在于，步骤5中，将清洗完的毛囊用灭菌的手术刀或者手术剪切碎，和分散在培养皿中操作均在装满冰的灭菌冰盒上进行。

技术总结
本发明涉及一种毛囊干细胞的原代分离方法，清洗头皮组织，达到灭菌和去除皮下脂肪；去取出单个毛囊；去除真皮鞘；于0.25%胰蛋白酶中37℃消化10


技术研发人员：崔大祥 张文桦 沈琦
受保护的技术使用者：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
技术研发日：2021.08.19
技术公布日：2021/10/28