生物样本处理方法、采集容器和试剂盒与流程

1.本发明涉及用于采集样本的采集容器技术领域，具体而言，涉及一种生物样本处理方法、采集容器和试剂盒。


背景技术：

2.相关技术中的采集容器，包括有用于储存样本的容纳腔和用于储存试剂的储液腔，样本在加入到容纳腔内后需要加入试剂进行固定。试剂需要提前密封在储液槽内，即在封装试剂的过程中，首先将试剂加入到储液槽内，然后利用密封膜对储液槽进行密封，以形成密封的储液腔。这样在封装试剂之前无法对储液腔进行密封性检测，易出现试剂泄漏或混入杂质的问题。
3.另外，由于某些生物样本涉及毒性或者感染性物质例如病毒、细菌等病原体，因此，对于这些生物样本的采集，往往会引发生操作安全问题。
4.因此，目前用于生物检测的采集容器仍有待改进。


技术实现要素：

5.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种生物样本处理方法以及可以适用于该方法的采集容器，该采集容器具有密封效果好、工作可靠等优点。
6.在本发明的一个方面，本发明提出了一种生物样本处理方法，根据本发明的实施例，该方法包括：(1)利用固定化试剂，对生物样本进行固定化处理，所述固定化试剂适于灭活所述生物样本中的病原体，并且所述固定化试剂适于与所述生物样本中的蛋白质或者核酸分子形成交联产物；和(2)利用解交联试剂对步骤(1)中获得的所述固定化处理的产物进行解交联处理，使所述交联产物质发生解交联，以便获得适于所述检测的所述核酸分子或者蛋白质。由此，通过该方法，采用固定试剂可以对所采集的生物样本进行固定处理，当采用携带醛基的试剂时，能够有效地通过对样本进行固定，从而使得样本中的病原体例如病毒或者细菌等不再具备感染性和毒性，因此操作上较为安全。另外，能够有效地避免人体接触固定试剂，从而避免固定试剂对人体的伤害或者负面作用。
7.根据本发明的一些实施例，所述固定化试剂中含有携带醛基的试剂。
8.根据本发明的一些实施例，所述携带醛基的试剂包括甲醛、戊二醛和多聚甲醛的至少之一。
9.根据本发明的一些实施例，所述固定化试剂包括选自下列的至少之一：
10.(a)含有碳酸钙和福尔马林的溶液；
11.(b)ph7.0～7.5的福尔马林溶液；
12.(c)ph7.0～7.5的多聚甲醛溶液；
13.(d)含有戊二醛和甲醛的溶液；
14.(e)含有甲醛、氯化汞和醋酸钠的溶液；
15.(f)含有醋酸和甲醛的溶液；
16.(g)含有苦味酸、醋酸和甲醛的溶液
17.(h)含有苦味酸和甲醛的溶液；和
18.(i)含有过碘酸盐、赖氨酸和多聚甲醛的溶液。
19.根据本发明的一些实施例，所述解交联试剂含有柠檬酸、柠檬酸盐、edta和tris的至少之一。
20.根据本发明的一些实施例，所述解交联处理是在高于室温的温度下进行的。
21.根据本发明的一些实施例，所述解交联处理是在70～100摄氏度的温度下进行的。
22.根据本发明的一些实施例，所述核酸分子包括dna和rna的至少之一。
23.根据本发明的一些实施例，所述适于所述检测的所述核酸样本含有长度不超过300nt的rna分子。
24.根据本发明的一些实施例，所述病原体包括细菌和病毒。
25.根据本发明的一些实施例，所述病毒包括rna病毒。
26.根据本发明的一些实施例，所述rna病毒包括滋病病毒、丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、流感病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒、轮状病毒、烟草花叶病毒、冠状病毒、马尔堡病毒、埃博拉病毒的至少之一。
27.根据本发明的一些实施例，所述冠状病毒包括sars病毒、mers病毒和2019-ncov的至少之一。
28.根据本发明的一些实施例，所述生物样本包括肺泡或膀胱或胃或肠或子宫或鼻腔的灌洗液、通过穿刺或刷取或刮擦采集样本后在液体中涮洗得到的含有细胞或细菌或真菌或病毒的悬液、在液体中培养的细胞或细菌或真菌或病毒样本、血液、体液、组织液、泪液、粪便、痰液、尿液、唾液、精液、鼻涕、胸水、腹水、前列腺液、毛发、皮肤、上皮组织的至少之一。
29.根据本发明的一些实施例，在步骤(1)之后，在步骤(2)之前，将所述固定化处理的产物在室温下保存。
30.根据本发明的一些实施例，在步骤(2)之后进一步包括：从所述核酸样本中分离所述核酸分子。
31.根据本发明的一些实施例，在步骤(2)之后进一步包括：利用探针，通过原位杂交对所述核酸分子进行检测。
32.另外，根据本发明的第二方面，为实现上述目的，根据本发明的实施例提出一种采集容器，所述采集容器包括：容器主体，所述容器主体内限定出具有开口的第一储液腔；盖体，所述盖体可活动地设于所述开口处，所述盖体内限定有第二储液腔，所述盖体具有与所述第二储液腔连通的注液口和出液口，所述出液口处覆盖有可穿刺膜；穿刺部，所述穿刺部设于所述容器主体或所述盖体，所述穿刺部用于刺破所述可穿刺膜，以允许所述第一储液腔与所述第二储液腔连通。
33.根据本发明实施例的采集容器，具有密封效果好、工作可靠等优点。
34.另外，根据本发明上述实施例的采集容器还可以具有如下附加的技术特征：
35.根据本发明的一些实施例，所述可穿刺膜与所述盖体的至少一部分一体成型。
36.根据本发明的一些实施例，所述采集容器还包括封堵件，所述封堵件用于封堵所
述注液口。
37.根据本发明的一些实施例，所述注液口位于所述盖体的背离所述开口的一侧表面。
38.根据本发明的一些实施例，所述出液口位于所述盖体的朝向所述开口的一侧表面，所述出液口在所述开口所在平面内的投影位于所述开口的内侧。
39.根据本发明的一些实施例，所述盖体包括：盖本体，所述第二储液腔形成于所述盖本体内；延伸部，所述延伸部设于所述盖本体，所述延伸部内设有过液通道，所述过液通道的一端与所述第二储液腔连通且另一端形成所述出液口，所述可穿刺膜设于所述过液通道内。
40.根据本发明的一些实施例，所述第二储液腔的壁面具有环绕所述过液通道的周向延伸的导向面，所述导向面沿靠近所述过液通道的方向逐渐向下倾斜延伸。
41.根据本发明的一些实施例，所述穿刺部设于所述盖体，所述穿刺部的至少一部分配合在所述过液通道内。
42.根据本发明的一些实施例，所述穿刺部的靠近所述延伸部的位置设有至少一个导流槽，所述导流槽沿所述穿刺部的长度方向延伸。
43.根据本发明的一些实施例，所述延伸部设于所述盖本体的朝向所述开口的一侧，所述延伸部适于从所述开口伸入所述第一储液腔内。
44.根据本发明的另一些实施例，所述盖本体包括：基座，所述基座设于所述开口处且与所述容器主体连接，所述基座具有取样口；安装壳，所述安装壳可翻转地设于所述基座以开闭所述取样口，所述安装壳限定出所述第二储液腔，所述延伸部设于所述安装壳且伸入所述基座内。
45.根据本发明的一些实施例，所述采集容器还包括过滤件，所述过滤件设于所述基座内且位于所述出液口的下方。
46.根据本发明的一些实施例，所述盖体与所述容器主体螺纹连接。
47.根据本发明的一些实施例，所述采集容器还包括：按压部，所述按压部设于所述盖体，所述按压部与所述穿刺部相连，所述按压部在按下后驱动所述穿刺部刺破所述可穿刺膜。
48.根据本发明的一些实施例，所述按压部包括：按压本体，所述按压本体设于所述盖体的背离所述开口的一侧表面，所述按压本体与所述穿刺部相连；可变形部，所述可变形部位于所述按压本体的外侧且环绕所述按压本体，所述可变形部连接于所述盖体与所述按压主体之间。
49.根据本发明的一些实施例，所述可变形部形成褶皱结构。
50.根据本发明的一些实施例，所述按压部、所述穿刺部与所述盖体的至少一部分一体成型。
51.根据本发明的一些实施例，所述第二储液腔中设置有固定试剂，所述固定试剂包括携带醛基的试剂。由此，在使用过程中，固定试剂可以对所采集的生物样本进行固定处理，当采用携带醛基的试剂时，能够有效地通过对样本进行固定，从而使得样本中的病原体例如病毒或者细菌等不再具备感染性和毒性，因此操作上较为安全。另外，通过采用该采集容器，能够有效地避免人体接触固定试剂，从而避免固定试剂对人体的伤害或者负面作用。
根据本发明的实施例，所述病原体包括细菌和病毒。根据本发明的实施例，所述病毒包括rna病毒。根据本发明的实施例，所述rna病毒包括滋病病毒、丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、流感病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒、轮状病毒、烟草花叶病毒、冠状病毒、马尔堡病毒、埃博拉病毒的至少之一。根据本发明的实施例，所述冠状病毒包括sars病毒、mers病毒和2019-ncov的至少之一。
52.根据本发明的一些实施例，所述携带醛基的试剂包括选自甲醛、戊二醛和多聚甲醛的至少之一。从而采用这些固定试剂，能够有效地使得核酸或者蛋白质与固定试剂发生交联反应，从而对这些核酸或者蛋白质进行保护，进而可以长期保存，例如可以在室温下保存至少一个月。后续可以通过解交联试剂对这些交联产物进行解交联处理，以便对相应的核酸或蛋白质进行检测。
53.需要说明的是，根据本发明的实施例，可以采用的生物样本优选液体生物样本，包括但不限于肺泡、膀胱、胃、肠、子宫或鼻腔的灌洗液、通过穿刺或刷取或刮擦采集样本后在液体中涮洗得到的含有细胞或细菌或真菌或病毒的悬液、在液体中培养的细胞或细菌或真菌或病毒样本、血液、体液、组织液、泪液、粪便、痰液、尿液、唾液、精液、鼻涕、胸水、腹水、前列腺液等。
54.在本发明的第三方面，本发明提出了一种试剂盒，根据本发明的实施例，该试剂盒包括：前面所述的采集容器，和固定试剂，所述固定试剂设置在所述采集容器的所述第二储液腔中。如前所述，该试剂盒可以用于对生物样本收集和固定化处理，由此，在使用过程中，固定试剂可以对所采集的生物样本进行固定处理，当采用携带醛基的试剂时，能够有效地通过对样本进行固定，从而使得样本中的病原体例如病毒或者细菌等不再具备感染性和毒性，因此操作上较为安全。另外，通过采用该采集容器，能够有效地避免人体接触固定试剂，从而避免固定试剂对人体的伤害或者负面作用。需要说明的是，前面关于采集容器所描述的特征和优点同样适用该试剂盒，在此不再赘述。
55.根据本发明的实施例，该试剂盒还可以进一步包括：解交联试剂，所述解交联试剂含有柠檬酸、柠檬酸盐、edta和tris的至少之一。由此，可以通过解交联试剂对这些交联产物进行解交联处理，以便对相应的核酸或蛋白质进行检测。
56.根据本发明的实施例，进一步包括：检测试剂，所述检测试剂适用于进行原位杂交、免疫组化、elisa、蛋白质印记、核酸提取、pcr反应、核酸测序的至少之一。
57.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
58.本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
59.图1是根据本发明的一些实施例的采集容器的剖视图，其中穿刺部处于未刺破可穿刺膜的初始状态。
60.图2是图1中d处的放大图。
61.图3是根据本发明的一些实施例的采集容器的剖视图，其中穿刺部处于刺破可穿刺膜的状态。
62.图4是图3中e处的放大图。
63.图5是根据本发明的另一些实施例的采集容器的剖视图，其中穿刺部处于未刺破可穿刺膜的初始状态。
64.图6是图5中f处的放大图。
65.图7是根据本发明的另一些实施例的采集容器的剖视图，其中穿刺部处于刺破可穿刺膜的状态。
66.图8是图7中g处的放大图。
67.图9是根据本发明的另一些实施例的采集容器的盖体的局部剖视图。
68.图10是根据本发明的另一些实施例的采集容器的穿刺部的结构示意图。
69.图11是根据本发明的另一些实施例的采集容器的穿刺部的结构示意图。
70.图12是根据本发明一个实施例对核酸和蛋白进行交联固定反应和解交联反应的过程示意图。
71.图13是根据本发明一个实施例采用采集容器进行人体尿液样本采集、固定和原位杂交检测的结果示意图。
72.图14是根据本发明另一个实施例采用采集容器进行人间充质干细胞培养样本的固定和免疫组化检测的结果示意图。
73.图15是根据本发明另一个实施例采用采集容器进行人支气管毛刷样本进行采集、固定和pcr检测的结果示意图。
74.附图标记：采集容器1、容器主体100、第一储液腔101、开口102、盖体200、第二储液腔201、注液口202、出液口203、可穿刺膜210、盖本体220、基座221、取样口2211、安装壳222、延伸部230、过液通道231、导向面240、穿刺部300、导流槽310、封堵件400、过滤件500、按压部600、按压本体610、可变形部620。
具体实施方式
75.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
76.在本发明的一个方面，本发明提出了一种生物样本处理方法，根据本发明的实施例，该方法包括：(1)利用固定化试剂，对生物样本进行固定化处理，所述固定化试剂适于灭活所述生物样本中的病原体，并且所述固定化试剂适于与所述生物样本中的蛋白质或者核酸分子形成交联产物；和(2)利用解交联试剂对步骤(1)中获得的所述固定化处理的产物进行解交联处理，使所述交联产物质发生解交联，以便获得适于所述检测的所述核酸分子或者蛋白质。由此，通过该方法，采用固定试剂可以对所采集的生物样本进行固定处理，当采用携带醛基的试剂时，能够有效地通过对样本进行固定，从而使得样本中的病原体例如病毒或者细菌等不再具备感染性和毒性，因此操作上较为安全。另外，能够有效地避免人体接触固定试剂，从而避免固定试剂对人体的伤害或者负面作用。
77.根据本发明的实施例，所述固定化试剂中含有携带醛基的试剂。根据本发明的实施例，所述携带醛基的试剂包括甲醛、戊二醛和多聚甲醛的至少之一。根据本发明的实施例，所述固定化试剂包括选自下列的至少之一：(a)含有碳酸钙和福尔马林的溶液；(b)
ph7.0～7.5的福尔马林溶液；(c)ph7.0～7.5的多聚甲醛溶液；(d)含有戊二醛和甲醛的溶液；(e)含有甲醛、氯化汞和醋酸钠的溶液；(f)含有醋酸和甲醛的溶液；(g)含有苦味酸、醋酸和甲醛的溶液；(h)含有苦味酸和甲醛的溶液；和(i)含有过碘酸盐、赖氨酸和多聚甲醛的溶液。由此，能够有效地固定生物样本，杀死病原体，同时所得到的经过处理的生物样本能够在室温下长期保存。
78.根据本发明的实施例，所述解交联试剂含有柠檬酸、柠檬酸盐、edta和tris的至少之一。根据本发明的实施例，所述解交联处理是在高于室温的温度下进行的。根据本发明的实施例，所述解交联处理是在70～100摄氏度的温度下进行的。本领域技术人员能够理解的是，解交联处理是为了能够进一步提高后续生物样本的检测效率，如果交联反应对于后续生物样本的检测不造成显著影响，则不需要进行解交联处理。
79.根据本发明的实施例，所述核酸分子包括dna和rna的至少之一。根据本发明的实施例，所述适于所述检测的所述核酸样本含有长度不超过300nt的rna分子。根据本发明的实施例，所述病原体包括细菌和病毒。根据本发明的实施例，所述病毒包括rna病毒。根据本发明的实施例，所述rna病毒包括滋病病毒、丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、流感病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒、轮状病毒、烟草花叶病毒、冠状病毒、马尔堡病毒、埃博拉病毒的至少之一。
80.根据本发明的实施例，所述冠状病毒包括sars病毒、mers病毒和2019-ncov的至少之一。根据本发明的实施例，所述生物样本可以包括血液、体液、组织液、泪液、粪便、痰液、尿液、唾液、精液、鼻涕、胸水、腹水、前列腺液、毛发、皮肤、上皮组织的至少之一。所述生物样本还可以包括肺泡的灌洗液、膀胱的灌洗液、胃灌的洗液、肠的灌洗液、子宫的灌洗液、鼻腔的灌洗液的至少之一。所述生物样本还可以包括通过穿刺、刷取或刮擦采集样本后在液体中涮洗得到的含有细胞、细菌、真菌或病毒的悬液。所述生物样本还可以包括在液体中培养的细胞、细菌、真菌或病毒样本。根据本发明的实施例，在步骤(1)之后，在步骤(2)之前，将所述固定化处理的产物在室温下保存。根据本发明的实施例，在步骤(2)之后进一步包括：从所述核酸样本中分离所述核酸分子。根据本发明的实施例，在步骤(2)之后进一步包括：利用探针，通过原位杂交对所述核酸分子进行检测。
81.为了方便理解，下面对能够适用于本发明处理生物样本方法的采集容器进行详细描述，下面参考附图描述根据本发明实施例的采集容器1。
82.如图1-图11所示，根据本发明实施例的采集容器1包括容器主体100、盖体200和穿刺部300。
83.容器主体100内限定出具有开口102的第一储液腔101。盖体200可活动地设于开口102处，盖体200内限定有第二储液腔201，盖体200具有与第二储液腔201连通的注液口202和出液口203，出液口203处覆盖有可穿刺膜210。穿刺部300设于容器主体100或盖体200，穿刺部300用于刺破可穿刺膜210，以允许第一储液腔101与第二储液腔201连通。
84.根据本发明实施例的采集容器1，通过设置第一储液腔101、第二储液腔201和穿刺部300，可以在第一储液腔101内加入一种溶液，例如在第一储液腔101内加入采集的样本，在第二储液腔201内加入另一种溶液，例如在第二储液腔201内加入用于固定样本成分的固定液。这样在取样完成后，利用穿刺部300刺破可穿刺膜210，使第一储液腔101与第二储液腔201连通，例如可以使第二储液腔201内的液体流入到第一储液腔101内，从而实现样本的
采集及固定工作。
85.并且，通过使盖体200具有与第二储液腔201连通的注液口202和出液口203，出液口203处覆盖有可穿刺膜210。这样不仅可以通过注液口202向第二储液腔201加入液体，通过出液口203使第二储液腔201内的液体流入第一储液腔101内，而且在向第二储液腔201加入液体之前，可以先对第二储液腔201进行密封性测试，相比相关技术中的采集容器1，可以提高第二储液腔201的密封可靠性，既避免出现试剂的漏液现象，又可以避免外界杂质进入第二储液腔201内而造成试剂的污染，便于提高采集容器1的使用效果，便于对样本进行良好的保护。
86.同时，由于第二储液腔201内加入的试剂一般具有一定的毒性，相比相关技术中的采集容器1，在向第二储液腔201加入试剂时，操作人员的操作过程简单方便，且操作人员不会直接地接触到对人体有害的固定液试剂，可以提高操作人员的操作安全性。
87.此外，相比相关技术中的采集容器1，本发明的采集容器1在采样的过程中，可以省去操作人员利用密封膜对第二储液腔201进行较大面积的密封操作，便于简化采样的操作过程，提高采样的便捷性，提高操作人员的工作效率。
88.举例而言，人体体液、细胞和组织样本对于监测健康状况和疾病诊断十分重要，由于临床样本中的dna、rna和蛋白质等物质暴露在空气中容易发生降解和微生物污染，需要及时固定。在一些离医院较远或交通不便的地区，如果可以由病人自行采集样本并邮寄到医院，将提供很大的方便。由于用于临床样本固定和防腐的试剂对人体具有毒性，通常希望试剂在使用前单独密封，且避免试剂与人体接触，而在使用时又能够方便地打开，使试剂与临床样本混合。样本经及时固定后，可以在运输过程中保持稳定，不影响最终的检测结果。具体而言，在样本的采集过程中，操作人员可以通过注液口202向第二储液腔201内加入用于固定样本的试剂，然后封堵注液口202以形成密封的腔体。当向第一储液腔101内加入采集到的样本后，利用穿刺部300刺破可穿刺膜210，使第二出液腔内的试剂通过出液口203流入到第一储液腔101内，由此试剂可以与样本进行混合，便于对样本的成分进行固定，提高样本的化学稳定性。
89.因此，根据本发明实施例的采集容器1具有密封效果好、工作可靠等优点。
90.下面参考附图描述根据本发明具体实施例的采集容器1。
91.在本发明的一些具体实施例中，如图1-图11所示，根据本发明实施例的采集容器1包括容器主体100、盖体200和穿刺部300。
92.可选地，可穿刺膜210与盖体200的至少一部分一体成型。这样便于盖体200的生产加工，便于简化盖体200的装配工艺，提高采集容器1的生产效率。
93.在一些实施例中，如图2所示，采集容器1还包括封堵件400，封堵件400用于封堵注液口202。这样在第二储液腔201内加入试剂后，可以利用封堵件400密封注液口202，使第二储液腔201形成密封的空间，便于对第二储液腔201内的试剂进行密封储存，提高试剂的储存效果。
94.具体而言，在向第二储液腔201加液完成后，可以利用热封的方式密封注液口202与封堵件400。由此，可以避免胶水等其他材料混入第二储液腔201。
95.具体地，如图2所示，注液口202位于盖体200的背离开口102的一侧表面。这样便于操作人员顺畅地向第二储液腔201内添加试剂。
96.具体而言，盖体200的下侧与容器主体100相连，注液口202位于盖体200的上表面。
97.可选地，如图2所示，出液口203位于盖体200的朝向开口102的一侧表面，出液口203在开口102所在平面内的投影位于开口102的内侧。这样便于第二储液腔201内的试剂通过出液口203顺畅地流入到第一储液腔101内。
98.具体而言，盖体200的下侧与容器主体100相连，出液口203位于盖体200的下侧且在开口102所在平面内的投影位于开口102的内侧。
99.在一些实施例中，如图2所示，盖体200包括盖本体220和延伸部230，第二储液腔201形成于盖本体220内。延伸部230设于盖本体220，延伸部230内设有过液通道231，过液通道231的一端与第二储液腔201连通且另一端形成出液口203，可穿刺膜210设于过液通道231内。这样不仅便于对第二储液腔201内的试剂进行导流，而且可以减小可穿刺膜210的设置面积，便于可穿刺膜210的加工设置，进一步便于提高第二储液腔201的结构强度和密封可靠性。
100.具体地，如图2所示，第二储液腔201的壁面具有环绕过液通道231的周向延伸的导向面240，导向面240沿靠近过液通道231的方向逐渐向下倾斜延伸。这样可以利用导向面240对试剂进行导流，便于试剂快速地流入第一储液腔101内，提高整个采样操作的效率。
101.可选地，如图2所示，穿刺部300设于盖体200，穿刺部300的至少一部分配合在过液通道231内。这样便于穿刺部300的加工设置，便于对穿刺部300的移动进行定位和导向，提高穿刺部300的动作准确性，使穿刺部300可以准确地、顺畅地刺破可穿刺膜210。
102.进一步地，如图10所示，穿刺部300的靠近延伸部230的位置设有至少一个导流槽310，导流槽310沿穿刺部300的长度方向延伸。这样不仅可以利用导流槽310对试剂进行引导，而且可以增大试剂的流通面积，提高试剂的流动速率。
103.具体而言，导流槽310为多个，多个导流槽310沿穿刺部300的周向等间隔设置。
104.在本发明的一些实施例中，如图2所示，延伸部230设于盖本体220的朝向开口102的一侧，延伸部230适于从开口102伸入第一储液腔101内。这样可以准确地将第二储液腔201内的试剂引流至第一储液腔101内，便于试剂与样本更好地进行混合。
105.具体而言，延伸部230设于盖本体220的下侧，延伸部230的下端从开口102伸入第一储液腔101内。
106.在本发明的另一些实施例中，如图6所示，盖本体220包括基座221和安装壳222，基座221设于开口102处且与容器主体100连接，基座221具有取样口2211。安装壳222可翻转地设于基座221以开闭取样口2211，安装壳222限定出第二储液腔201，延伸部230设于安装壳222且伸入基座221内。这样可以在容器主体100与盖体200相连后，再进行样本采集和对样本进行固定的操作，不仅可以进一步简化操作过程，提高采样过程的效率，而且可以快速实现第一储液腔101内样本与第二储液腔201内试剂的混合，便于缩短样本独自储存在第一储液腔101内的时间，防止样本发生污染或样本的化学性质发生改变。
107.具体地，如图6所示，采集容器1还包括过滤件500，过滤件500设于基座221内且位于出液口203的下方(上下方向如图1中的箭头a所示)。这样可以利用过滤件500对样本和试剂进行过滤，便于除去样本和试剂中的大颗粒杂质。
108.具体而言，过滤件500可以为过滤网。
109.可选地，盖体200与容器主体100螺纹连接。这样不仅可以提高盖体200与容器主体
100之间的连接强度，而且可以提高盖体200与容器主体100连接处的密封效果。
110.在一些实施例中，如图1所示，采集容器1还包括按压部600，按压部600设于盖体200，按压部600与穿刺部300相连，按压部600在按下后驱动穿刺部300刺破可穿刺膜210。这样不仅便于操作人员利用按压部600方便地刺破可穿刺膜210，而且可以防止穿刺部300发生错误动作而刺破可穿刺膜210，进一步便于提高采集容器1的使用可靠性。
111.具体地，如图2所示，按压部600包括按压本体610和可变形部620，按压本体610设于盖体200的背离开口102的一侧表面，按压本体610与穿刺部300相连。可变形部620位于按压本体610的外侧且环绕按压本体610，可变形部620连接于盖体200与按压主体之间。这样便于操作人员进行按压操作，便于按压部600带动穿刺部300进行移动，从而便于驱动穿刺部300刺破可穿刺膜210。
112.具体而言，按压本体610设于盖体200的上侧表面。
113.更为具体地，可变形部620形成褶皱结构。这样便于可变形部620在外力作用下发生变形，从而带动穿刺部300进行移动。
114.具体而言，可变形部620具有初始位置和变形位置，可变形部620在初始位置与变形位置之间移动以带动穿刺部300进行移动，在穿刺部300的移动方向上，可变形部620在初始位置与变形位置之间的可移动距离大于穿刺部300与可穿刺膜210之间的距离且小于穿刺部300与过滤件500之间的距离。
115.可选地，按压部600还包括限位部，限位部可以限位可变形部620的移动距离，从而防止穿刺部300刺破过滤件500。
116.可选地，按压部600、穿刺部300与盖体200的至少一部分一体成型。这样便于按压部600、穿刺部300与盖体200的生产加工，便于简化采集容器1的装配工艺，提高采集容器1的生产效率。
117.具体地，容器主体100可以为50ml或15ml的离心管。
118.可选地，采集容器1还包括密封上盖，在第一储液腔101内的样本与第二储液腔201内的试剂混合后，可以拆除盖体200，将密封上盖与容器主体100密封连接。
119.下面参考附图描述根据本发明实施例的采集容器1的使用过程。
120.根据本发明的一些实施例，在需要采集样本时，首先在容器主体100内加入样本，然后将容器主体100与盖体200安装在一起，按下按压部600以带动穿刺部300刺破可穿刺膜210，使第二储液腔201内的试剂流入到第一储液腔101内，完成样本与试剂的混合，以实现对样本的固定。
121.根据本发明的另一些实施例，在需要采集样本时，首先将容器主体100与盖体200安装在一起，然后翻转打开安装壳222，通过取样口2211向容器主体100内加入样本，再扣合安装壳222，按下按压部600以带动穿刺部300刺破可穿刺膜210，使第二储液腔201内的试剂流入到第一储液腔101内，完成样本与试剂的混合，以实现对样本的固定。
122.下面描述根据本发明实施例的一种样本采集套装。根据本发明实施例的样本采集套装包括根据本发明上述实施例的采集容器1、移液枪、采集杯、手套、面巾纸和湿巾纸。
123.根据本发明实施例的采集容器1的其他构成以及操作对于本领域普通技术人员而言都是已知的，这里不再详细描述。
124.根据本发明的一些实施例，所述第二储液腔中设置有固定试剂，所述固定试剂包
括携带醛基的试剂。由此，在使用过程中，固定试剂可以对所采集的生物样本进行固定处理，当采用携带醛基的试剂时，能够有效地通过对样本进行固定，从而使得样本中的病原体例如病毒或者细菌等不再具备感染性和毒性，因此操作上较为安全。另外，通过采用该采集容器，能够有效地避免人体接触固定试剂，从而避免固定试剂对人体的伤害或者负面作用。根据本发明的实施例，所述病原体包括细菌和病毒。根据本发明的实施例，所述病毒包括rna病毒。根据本发明的实施例，所述rna病毒包括滋病病毒、丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、流感病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒、轮状病毒、烟草花叶病毒、冠状病毒、马尔堡病毒、埃博拉病毒的至少之一。根据本发明的实施例，所述冠状病毒包括sars病毒、mers病毒和2019-ncov的至少之一。
125.通常而言，病毒所含有的核酸特别是rna是容易被降解的，在很多场合下没有在很多场合并没有立即进行rna检测的条件，通过采用根据本发明实施例的采集容器能够对病毒核酸进行一定的保护，防止降解。通常情况下，rna的保存方法有低温如液氮保存，或加入保护液进行保存。目前的rna保护液在常温下只能保存3-7天，因此，既不适用于长途运输，也不能用于样本库的长期保存。此外，很多病毒的传播性或者传染性极强，需要非常严格的防护措施才能避免感染，因此对病毒的采样、核酸提取和分析过程操作都比较复杂。本发明的采集容器能够提供一种简单而安全有效的病原体例如病毒的灭活和保存方法，可以给医护人员和研究人员提供极大的帮助。根据本发明的实施例，上述采集容器中所设置的固定试剂能够有效地快速灭活病毒，并且能够对病毒核酸在常温下进行长期保存例如数月甚至数年。
126.根据本发明的一些实施例，所述携带醛基的试剂包括选自甲醛、戊二醛和多聚甲醛的至少之一。从而采用这些固定试剂，能够有效地使得核酸或者蛋白质与固定试剂发生过交联反应，从而对这些核酸或者蛋白质进行保护，进而可以长期保存，例如可以在室温下保存至少一个月。后续可以通过解交联试剂对这些交联产物进行解交联处理，以便对相应的核酸或蛋白质进行检测。
127.需要说明的是，根据本发明的实施例，可以采用的生物样本优选液体生物样本，包括但不限于血液、体液、组织液、泪液、粪便、痰液、尿液、唾液、精液、鼻涕、胸水、腹水、前列腺液、毛发、皮肤、上皮组织等，还可以包括肺泡、膀胱、胃、肠、子宫或鼻腔的灌洗液，还可以包括通过穿刺、刷取或刮擦采集样本后在液体中涮洗得到的含有细胞、细菌、真菌或病毒的悬液，还可以包括在液体中培养的细胞、细菌、真菌或病毒样本。
128.在本发明的第二方面，本发明提出了一种试剂盒，根据本发明的实施例，该试剂盒包括：前面所述的采集容器，和固定试剂，所述固定试剂设置在所述采集容器的所述第二储液腔中。如前所述，该试剂盒可以用于对生物样本收集和固定化处理，由此，在使用过程中，固定试剂可以对所采集的生物样本进行固定处理，当采用携带醛基的试剂时，能够有效地通过对样本进行固定，从而使得样本中的病原体例如病毒或者细菌等不再具备感染性和毒性，因此操作上较为安全。另外，通过采用该采集容器，能够有效地避免人体接触固定试剂，从而避免固定试剂对人体的伤害或者负面作用。需要说明的是，前面关于采集容器所描述的特征和优点同样适用该试剂盒，在此不再赘述。
129.根据本发明的实施例，该试剂盒还可以进一步包括：解交联试剂，所述解交联试剂含有柠檬酸、柠檬酸盐、edta和tris的至少之一。参考图12，可以通过解交联试剂对这些交
联产物进行解交联处理，以便对相应的核酸或蛋白质进行检测。
130.根据本发明的实施例，进一步包括：检测试剂，所述检测试剂适用于进行原位杂交、免疫组化、elisa、蛋白质印记、核酸提取、pcr反应、核酸测序的至少之一。
131.根据本发明的实施例，可以通过采用甲醛溶液，例如福尔马林对病毒核酸进行保存。在样本中加入福尔马林后，甲醛分子使核酸和蛋白质之间形成交联，有效灭活病毒，并防止核酸降解。进一步可以将核酸样本保存在福尔马林中，可以进行长途运输或者长期保存。另外，根据本发明的实施例，在需要对rna进行检测时，可以通过高速离心收集沉淀，弃去上清，然后使用前面所述的解交联试剂对样本进行高温(70-100℃)处理，核酸和蛋白质之间的交联被打开。另外，还可以通过常规的trizol法和其他方法对核酸进行提取，也可以直接进行原位杂交检测。
132.根据本发明实施例的试剂盒在进行上述样品处理时，操作简便易行，不需要专门训练，可以在常温下对核酸尤其是rna进行长期保存。在进行解交联后核酸尤其是rna的提取和检测均可以使用常规方法。另外，福尔马林可以有效灭活病毒，解交联操作在高温下进行，不会接触到有活性的病毒，因此可以在普通生物实验室进行，不需要特别防护。
133.下面通过具体的实施例对本发明的采集容器的使用进行说明和解释，这些实施例均为示例性的，并不会对本发明的范围作出限制。
134.实施例1人体尿液样本的采集、固定和原位杂交检测
135.在采集容器的固定液存储盒(第二储液腔)中加入含有甲醛和pbs的固定试剂，收集尿液通过漏斗结构倒入固定装置的收集管中，盖上固定液存储盒，按下按钮，释放固定液。固定液释放完毕后，拧下固定液存储盒，盖紧盖子，上下颠倒混匀，在室温下存储。
136.存储24小时后，将尿液样本混匀后取出部分样本，其余样本继续在室温下存储。将含有尿液样本的收集管放入离心机中10000
×
g离心30分钟，弃去液体，收集细胞沉淀。在细胞沉淀中加入pbs离心洗涤两次，并用pbs重新悬浮细胞，将细胞悬液滴加到带有正电荷的载玻片上，40摄氏度烘干。
137.采用针对gapdh基因内含子序列的探针，按照rnascope试剂盒的操作方法对样本进行前处理和原位杂交，并进行信号扩增和苏木素细胞核染色，用显微镜成像分析基因的表达情况。
138.存储一个月后，按照上述相同的方法收集剩余样本中的细胞并进行原位杂交，用显微镜成像分析基因的表达情况。结果显示在图13中，图13(a)为储存24小时的尿液样本中基因的表达情况，图13(b)为储存一个月的尿液样本中基因的表达情况。如图13所示，每个等位基因表达的信号在细胞核中呈现为红色的圆点，在储存24小时和储存一个月的样本中，大部分细胞核中都可以检测到gapdh基因的表达，说明样本中的rna分子在24小时后就能够达到良好的固定效果，并且在一个月内不发生明显的降解。
139.实施例2人间充质干细胞培养样本的固定和免疫组化检测
140.使用mem培养基培养人间充质干细胞，弃去培养基，用胰蛋白酶将细胞悬浮后用含有血清的培养基终止胰蛋白酶反应，离心收集细胞沉淀。在细胞沉淀中加入pbs离心洗涤两次，并用pbs重新悬浮细胞。使用15ml样本采集和固定装置，固定液存储盒中含有和实施例1相同的固定试剂，将细胞悬液加入收集管中，盖上固定液存储盒，按下按钮，释放固定液。固定液释放完毕后，拧下固定液存储盒，盖紧盖子，上下颠倒混匀，在室温下存储。
141.存储24小时后，将细胞样本混匀后取出部分样本，其余样本继续在室温下存储。将含有细胞样本的收集管放入离心机中离心收集细胞沉淀。在细胞沉淀中加入pbs离心洗涤两次，并用pbs重新悬浮细胞，将细胞悬液滴加到带有正电荷的载玻片上，40摄氏度烘干。
142.将样本玻片在10mm的柠檬酸钠溶液中95摄氏度处理10分钟解开蛋白质之间的交联，用5％bsa在室温下孵育1小时封闭细胞样本，然后加入α-sma抗体在4摄氏度下孵育16小时，用pbs洗去抗体后加入带有hrp的二抗，室温孵育1小时，用pbs洗去抗体后加入dab显色液，显色结束后用苏木素进行细胞核染色，显微镜成像分析α-sma蛋白质的表达情况。
143.存储一个月后，按照上述相同的方法收集剩余样本中的细胞并进行免疫组化检测，用显微镜成像分析α-sma蛋白质的表达情况。结果显示在图14中，图14(a)为储存24小时的细胞样本中基因的表达情况，图14(b)为储存一个月的细胞样本中基因的表达情况。如图14所示，细胞质中的α-sma蛋白质被染为棕色，在储存24小时和储存一个月的样本中，大部分细胞中都能检测到α-sma蛋白质，说明样本中的蛋白质分子在24小时后就能够达到良好的固定效果，并且在一个月内不发生明显的降解。
144.实施例3人支气管毛刷细胞样本的固定和pcr检测
145.使用支气管毛刷从肺癌病人气管内刷取肺肿瘤细胞，在15ml样本采集和固定装置的收集管中预先加入5ml红细胞裂解液，将刷头在液体中涮洗几次后取出。盖上固定液存储盒，按下按钮，释放与实施例1中相同的固定液。固定液释放完毕后，拧下固定液存储盒，盖紧盖子，上下颠倒混匀，在室温下存储。
146.存储24小时后，将样本混匀后取出部分样本，其余样本继续在室温下存储。将含有细胞样本的收集管放入离心机中离心收集细胞沉淀。在细胞沉淀中加入pbs离心洗涤两次。在10mm的柠檬酸钠溶液中95摄氏度处理10分钟解开dna和蛋白质之间的交联。使用qiaamp dna ffpe tissue ffpe组织dna提取试剂盒提取其中的基因组dna，然后使用egfr基因的引物对egfr基因的不同片段进行pcr。将pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳。
147.存储一个月后，按照上述相同的方法收集剩余样本中的细胞并提取基因组dna进行pcr。结果显示在图15中，图15(a)为储存24小时的样本中基因的表达情况，图15(b)为储存一个月的样本中基因的表达情况。如图15所示，在储存24小时和储存一个月的样本中，大部分样本中都能检测到egfr基因的扩增产物，说明样本中dna分子在24小时后就能够达到良好的固定效果，并且在一个月内不发生明显的降解。
148.在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”、“轴向”、“径向”、“周向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。在本发明的描述中，第一特征在第二特征“之上”或“之下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。
149.在本发明的描述中，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。
150.在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
151.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
152.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。