一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法与流程

1.本发明涉及细胞培养技术领域，具体为一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法。


背景技术：

2.脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，脐带间充质干细胞具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化，它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景，有报道从人脐带中分离出干细胞，且细胞含量、增殖能力优于骨髓干细胞，免疫原性比骨髓干细胞低，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。
3.目前在脐带间充质干细胞培养的过程中，通常是通过胶原酶和胰酶消化法，进行分离培养，在培养的时候，需要将其放在培养基中长达15
‑
30天左右，在这个过程中，不仅需要密切关注细胞的生长情况，同时还要避免培养基受到外部环境影响和细菌感染，因此通常是在超净台中进行操作，然后放入到无菌培养仓内部进行培养，但是在培养的过程中还需要进行离心、分离和更换培养基等众多操作，因此需要进行移动，这使得培养基与外部接触发生污染的风险增大，因此需要提供一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法以解决上述问题。


技术实现要素：

4.(一)解决的技术问题
5.针对现有技术的不足，本发明公开了一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
6.(二)技术方案
7.为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，包括；
8.无菌培养箱，所述无菌培养箱的外表面固定安装有玻璃板，所述玻璃板的侧壁上固定连接有乳胶手套，所述无菌培养箱的侧面活动铰接有侧开箱门，所述侧开箱门的内侧壁上固定安装有储物盒，所述无菌培养箱的顶部固定安装有显微镜，所述无菌培养箱的内底部固定安装有离心机，所述无菌培养箱的内部设有支撑杆，所述支撑杆的下表面活动卡接有固定盘，所述固定盘的内部活动插接有培养试管；
9.抽吸泵，所述抽吸泵的一端延伸至无菌培养箱的内部活动安装有抽吸管，所述抽吸泵的另一端设有污水筒，所述无菌培养箱的内侧壁上活动安装有抽拉喷头，所述无菌培养箱的内侧壁上活动卡接有清洗盘。
10.优选的，所述抽吸管和抽吸泵之间固定连接有抽拉软管，所述无菌培养箱的背面固定连接有进水管，所述抽拉喷头的末端通过抽拉软管与进水管相连接，所述无菌培养箱
的背面开设有卡槽，所述污水筒的外表面固定连接有卡块，所述卡块活动卡接在卡槽的内部。
11.优选的，所述无菌培养箱的内侧壁上开设有第一滑槽，所述清洗盘的顶端侧面固定连接有限位轴，所述限位轴滑动连接在第一滑槽的内部，所述清洗盘的底端内部设有卡接组件，所述卡接组件与无菌培养箱的内侧壁活动卡接。
12.优选的，所述卡接组件包括转动头、齿轮、齿条、第一弹簧、固定轴和卡条，所述转动头转动连接在清洗盘的外表面，所述齿轮固定连接在转动头的端部，所述齿条滑动连接在清洗盘的内部，所述齿轮与齿条相啮合，所述第一弹簧活动卡接在齿条的一端内部，所述卡条固定连接在齿条的另一端，所述固定轴的一端固定连接在清洗盘的内部，所述固定轴的另一端与第一弹簧相抵。
13.优选的，所述无菌培养箱的侧壁上开设有第二滑槽，所述侧开箱门的两侧均活动铰接有连接条，所述连接条的另一端滑动连接在第二滑槽的内部，所述侧开箱门的内侧壁上固定连接有密封橡胶板，所述储物盒固定连接在密封橡胶板的外表面，所述侧开箱门的顶部转动连接有固定螺栓，所述固定螺栓的端部螺纹连接在无菌培养箱的外表面。
14.优选的，所述离心机的顶部活动铰接有转动盖板，所述转动盖板的下表面设有圆形挡片，所述离心机的上表面开设有方形槽，所述固定盘的下表面固定连接有与方形槽相适配的方形条。
15.优选的，所述转动盖板的上表面开设有活动槽，所述活动槽的内部滑动连接有插销，所述插销与离心机活动插接，所述转动盖板的下表面固定连接有固定套筒，所述固定套筒的内部活动卡接有第二弹簧，所述圆形挡片的顶端转动连接有插杆，所述插杆的顶端活动插接在固定套筒的内底部。
16.优选的，所述无菌培养箱的内侧壁上固定连接有固定座，所述支撑杆的一端活动铰接在固定座的下表面，所述支撑杆的外表面开设有观测孔，所述观测孔正对显微镜的底端，所述支撑杆的另一端转动连接有卡座，所述固定盘的上表面中部开设有固定槽，所述固定盘的外表面四周开设有插槽，所述卡座的底端活动卡接在固定槽的内部，所述培养试管活动插接在插槽的内部。
17.优选的，所述卡座的上表面活动插接有活动杆，所述活动杆的外表面活动套接有第三弹簧，所述活动杆的底端固定连接有固定板，所述固定板的底端固定连接有三角推块，所述卡座的底部固定连接有固定块，所述固定块的内部两侧均活动卡接有限位连接块，两组所述限位连接块相对的一侧活动卡接有第四弹簧，所述三角推块的底端与两组限位连接块相背的一侧外表面相抵。
18.优选的，首先取新鲜脐带一条将其充分冲洗，去除脐带中残留血，然后将脐带剪碎加入到培养试管中，然后向内部添加千分之一浓度的胶原酶ⅳ，然后静置三十分钟等待细胞组织消化，然后向其中加入十分之一浓度的fbs终止消化，然后对其进行过滤，将获得的细胞滤液进行离心；
19.然后向培养试管中加入含有lg
‑
dmem培养液，培养三四天后更换培养液，然后再向培养试管中加入终浓度为千分之一的胰酶，进行搅拌三十分钟，等待组织进一步消化，然后再加入十分之一浓度的pbs终止消化，然后再一次过滤，再次对滤液进行离心，离心后的细胞滤液中加入含有lg
‑
dmem培养液，培养三四天后进行过滤，然后更换培养液，并去除其中
未贴壁细胞，之后每隔三天进行一次过滤和换液，直到细胞充分融合传代；
20.最后，等到细胞融合生长至七八成后，再次向培养试管内部加入加入浓度为千分之二浓度的的edta进行消化，此时轻轻摇动培养试管，使得消化液能够覆盖全部细胞表面，然后过滤掉细胞培养液后，再加上三至五毫升的消化液，此时在光学显微镜下观察脐带间充质干细胞的生长情况。
21.本发明公开了一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，其具备的有益效果如下：
22.1、该脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，通过在无菌培养箱的外表面固定安装有玻璃板，玻璃板的侧壁上固定连接有乳胶手套，通过在无菌培养箱的顶部固定安装有显微镜，无菌培养箱的内底部固定安装有离心机，无菌培养箱的内部设有支撑杆，支撑杆的下表面活动卡接有固定盘，固定盘的内部活动插接有培养试管，方便将脐带间充质干细胞处理和培养过程中所有操作步骤均在无菌培养箱内部进行，减少与外部接触污染的情况发生。
23.2、该脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，通过在无菌培养箱的内侧壁上活动安装有抽拉喷头和抽吸管，同时在无菌培养箱的内侧壁上通过卡接组件活动卡接有清洗盘，在使用时通过将清洗盘放倒，然后将脐带放入到清洗盘中通过抽拉喷头进行冲洗，冲洗结束后通过抽吸泵和抽吸管将污水抽出，然后将清洗盘复原倾靠在无菌培养箱的内侧壁上，方便对其进行冲洗，同时减少冲洗对内部造成得污染。
24.3、该脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，在使用时通过将活动杆向下按压，使得两组三角推块将两组限位连接块向中部挤压，此时将固定盘从支撑杆的外表面取下进行离心，然后将固定盘活动卡接到支撑杆的下表面通过转动固定盘，使得固定盘和卡座在支撑杆的端部进行转动，方便对每一组培养试管进行观察，便于对整体的培养试管进行移动，方便操作。
附图说明
25.图1为本发明整体结构示意图；
26.图2为本发明无菌培养箱背面结构示意图；
27.图3为本发明玻璃板外表面结构示意图；
28.图4为本发明无菌培养箱内部结构示意图；
29.图5为本发明无菌培养箱内部结构爆炸图；
30.图6为本发明清洗盘内部结构爆炸图；
31.图7为本发明图6的a部分结构放大图；
32.图8为本发明转动盖板外表面结构爆炸图；
33.图9为本发明培养试管外表面结构爆炸图；
34.图10为本发明固定盘外表面结构示意图；
35.图11为本发明卡座内部结构爆炸图。
36.图中：1、无菌培养箱；2、玻璃板；3、侧开箱门；4、显微镜；5、抽吸泵；6、污水筒；7、进水管；8、卡槽；9、卡块；10、乳胶手套；11、清洗盘；12、第二滑槽；13、连接条；14、第一滑槽；15、培养试管；16、离心机；17、方形槽；18、抽拉喷头；19、抽吸管；20、密封橡胶板；21、储物
盒；22、固定螺栓；23、卡接组件；231、转动头；232、齿轮；233、齿条；234、第一弹簧；235、固定轴；236、卡条；24、转动盖板；25、圆形挡片；26、活动槽；27、插销；28、固定套筒；29、第二弹簧；30、支撑杆；31、固定盘；32、方形条；33、固定座；34、观测孔；35、卡座；36、固定槽；37、插槽；38、固定块；39、活动杆；40、第三弹簧；41、固定板；42、三角推块；43、限位连接块；44、第四弹簧。
具体实施方式
37.本发明实施例公开一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，如图1
‑
7所示，包括；
38.无菌培养箱1，无菌培养箱1的外表面固定安装有玻璃板2，玻璃板2的侧壁上固定连接有乳胶手套10，无菌培养箱1的侧面活动铰接有侧开箱门3，侧开箱门3的内侧壁上固定安装有储物盒21，无菌培养箱1的顶部固定安装有显微镜4，无菌培养箱1的内底部固定安装有离心机16，无菌培养箱1的内部设有支撑杆30，支撑杆30的下表面活动卡接有固定盘31，固定盘31的内部活动插接有培养试管15，培养试管15的顶端内部设有密封塞；
39.抽吸泵5，抽吸泵5的一端延伸至无菌培养箱1的内部活动安装有抽吸管19，抽吸泵5的另一端设有污水筒6，无菌培养箱1的内侧壁上活动安装有抽拉喷头18，无菌培养箱1的内侧壁上活动卡接有清洗盘11。
40.参照附图2和5，抽吸管19和抽吸泵5之间固定连接有抽拉软管，无菌培养箱1的背面固定连接有进水管7，抽拉喷头18的末端通过抽拉软管与进水管7相连接，无菌培养箱1的背面开设有卡槽8，污水筒6的外表面固定连接有卡块9，卡块9活动卡接在卡槽8的内部，通过设置抽拉软管使得抽拉喷头18和抽吸管19能够在无菌培养箱1的内部进行移动，方便对脐带进行冲洗，同时在冲洗结束后通过抽吸管19将污水抽出进入到污水筒6的内部，进行集中处理。
41.参照附图4、6和7，无菌培养箱1的内侧壁上开设有第一滑槽14，清洗盘11的顶端侧面固定连接有限位轴，限位轴滑动连接在第一滑槽14的内部，清洗盘11的底端内部设有卡接组件23，卡接组件23与无菌培养箱1的内侧壁活动卡接，卡接组件23包括转动头231、齿轮232、齿条233、第一弹簧234、固定轴235和卡条236，转动头231转动连接在清洗盘11的外表面，齿轮232固定连接在转动头231的端部，齿条233滑动连接在清洗盘11的内部，齿轮232与齿条233相啮合，第一弹簧234活动卡接在齿条233的一端内部，卡条236固定连接在齿条233的另一端，固定轴235的一端固定连接在清洗盘11的内部，固定轴235的另一端与第一弹簧234相抵，在使用时通过旋转转动头231，使得齿轮232带动两组齿条233进行移动，使得两组卡条236从无菌培养箱1的内侧壁中移出，然后将清洗盘11的底端向靠近侧开箱门3一侧拉动，使得清洗盘11的顶端向上滑动，最终使得清洗盘11处于离心机16的上表面。
42.参照附图4
‑
5，无菌培养箱1的侧壁上开设有第二滑槽12，侧开箱门3的两侧均活动铰接有连接条13，连接条13的另一端滑动连接在第二滑槽12的内部，侧开箱门3的内侧壁上固定连接有密封橡胶板20，储物盒21固定连接在密封橡胶板20的外表面，侧开箱门3的顶部转动连接有固定螺栓22，固定螺栓22的端部螺纹连接在无菌培养箱1的外表面，通过设置密封橡胶板20，提高无菌培养箱1的密封性能，同时通过设置储物盒21，方便对细胞组织处理和培养过程中所需要使用的器材进行存放。
43.参照附图8，离心机16的顶部活动铰接有转动盖板24，转动盖板24的下表面设有圆形挡片25，离心机16的上表面开设有方形槽17，固定盘31的下表面固定连接有与方形槽17相适配的方形条32，转动盖板24的上表面开设有活动槽26，活动槽26的内部滑动连接有插销27，插销27与离心机16活动插接，转动盖板24的下表面固定连接有固定套筒28，固定套筒28的内部活动卡接有第二弹簧29，圆形挡片25的顶端转动连接有插杆，插杆的顶端活动插接在固定套筒28的内底部，通过将固定盘31和培养试管15同步放入到离心机16的内部，然后关闭转动盖板24，此时圆形挡片25在第二弹簧29的作用下与培养试管15的上表面相抵，避免培养试管15顶部的密封塞掉落。
44.参照附图9
‑
11，无菌培养箱1的内侧壁上固定连接有固定座33，支撑杆30的一端活动铰接在固定座33的下表面，支撑杆30的外表面开设有观测孔34，观测孔34正对显微镜4的底端，支撑杆30的另一端转动连接有卡座35，固定盘31的上表面中部开设有固定槽36，固定盘31的外表面四周开设有插槽37，卡座35的底端活动卡接在固定槽36的内部，培养试管15活动插接在插槽37的内部，卡座35的上表面活动插接有活动杆39，活动杆39的外表面活动套接有第三弹簧40，活动杆39的底端固定连接有固定板41，固定板41的底端固定连接有三角推块42，卡座35的底部固定连接有固定块38，固定块38的内部两侧均活动卡接有限位连接块43，两组限位连接块43相对的一侧活动卡接有第四弹簧44，三角推块42的底端与两组限位连接块43相背的一侧外表面相抵，通过将活动杆39向下按压，使得第三弹簧40被压缩，同时使得活动杆39的底端带动三角推块42向下移动，此时两组三角推块42将两组限位连接块43向中部挤压，使得第四弹簧44被压缩，同时使得限位连接块43的底端向固定块38的内部移动，此时将固定盘31从支撑杆30的外表面取下。
45.参照附图1
‑
11，首先取新鲜脐带一条将其充分冲洗，去除脐带中残留血，然后将脐带剪碎加入到培养试管15中，然后向内部添加千分之一浓度的胶原酶ⅳ，然后静置三十分钟等待细胞组织消化，然后向其中加入十分之一浓度的fbs终止消化，然后对其进行过滤，将获得的细胞滤液进行离心；
46.然后向培养试管15中加入含有lg
‑
dmem培养液，培养三四天后更换培养液，然后再向培养试管15中加入终浓度为千分之一的胰酶，进行搅拌三十分钟，等待组织进一步消化，然后再加入十分之一浓度的pbs终止消化，然后再一次过滤，再次对滤液进行离心，离心后的细胞滤液中加入含有lg
‑
dmem培养液，培养三四天后进行过滤，然后更换培养液，并去除其中未贴壁细胞，之后每隔三天进行一次过滤和换液，直到细胞充分融合传代；
47.最后，等到细胞融合生长至七八成后，再次向培养试管15内部加入加入浓度为千分之二浓度的的edta进行消化，此时轻轻摇动培养试管15，使得消化液能够覆盖全部细胞表面，然后过滤掉细胞培养液后，再加上三至五毫升的消化液，此时在光学显微镜下观察脐带间充质干细胞的生长情况。
48.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，并通过实施例的方式，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
49.实施例一、
50.如图1
‑
7所示一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，包括无菌培养箱1，无菌培养箱1的外表面固定安装有玻璃板2，玻璃板2的侧壁上固定连接有乳胶手套10，无菌培养箱1的侧面活动铰接有侧开箱门3，侧开箱门3的内侧壁上固定安装有储物盒
21，无菌培养箱1的顶部固定安装有显微镜4，无菌培养箱1的内底部固定安装有离心机16，无菌培养箱1的内部设有支撑杆30，支撑杆30的下表面活动卡接有固定盘31，固定盘31的内部活动插接有培养试管15；
51.还包括抽吸泵5，抽吸泵5的一端延伸至无菌培养箱1的内部活动安装有抽吸管19，抽吸泵5的另一端设有污水筒6，无菌培养箱1的内侧壁上活动安装有抽拉喷头18，无菌培养箱1的内侧壁上活动卡接有清洗盘11，抽吸管19和抽吸泵5之间固定连接有抽拉软管，无菌培养箱1的背面固定连接有进水管7，抽拉喷头18的末端通过抽拉软管与进水管7相连接，无菌培养箱1的背面开设有卡槽8，污水筒6的外表面固定连接有卡块9，卡块9活动卡接在卡槽8的内部，无菌培养箱1的内侧壁上开设有第一滑槽14，清洗盘11的顶端侧面固定连接有限位轴，限位轴滑动连接在第一滑槽14的内部，清洗盘11的底端内部设有卡接组件23，卡接组件23与无菌培养箱1的内侧壁活动卡接，卡接组件23包括转动头231、齿轮232、齿条233、第一弹簧234、固定轴235和卡条236，转动头231转动连接在清洗盘11的外表面，齿轮232固定连接在转动头231的端部，齿条233滑动连接在清洗盘11的内部，齿轮232与齿条233相啮合，第一弹簧234活动卡接在齿条233的一端内部，卡条236固定连接在齿条233的另一端，固定轴235的一端固定连接在清洗盘11的内部，固定轴235的另一端与第一弹簧234相抵；
52.该装置在初始状态下，清洗盘11活动卡接在无菌培养箱1的内侧壁上，此时操作人员通过从玻璃板2位置将双手插入到乳胶手套10的内部，此时通过佩戴乳胶手套10的手对无菌培养箱1的内部进行操作，通过旋转转动头231，使得齿轮232带动两组齿条233进行移动，使得两组卡条236从无菌培养箱1的内侧壁中移出，同时使得第一弹簧234被压缩，然后将清洗盘11的底端向靠近侧开箱门3一侧拉动，使得清洗盘11的顶端向上滑动，最终使得清洗盘11处于离心机16的上表面，如附图4所示状态，此时通过侧开箱门3将准备好的脐带放入到清洗盘11的上表面，然后将后续培养所需要使用到的切割和搅拌器材以及需要使用的装有胶原酶溶液和胰酶溶液的瓶子放入到储物盒21的内部，然后将侧开箱门3关闭，并通过固定螺栓22进行锁死固定，此时通过将抽拉喷头18从无菌培养箱1内侧壁上取下对脐带进行冲洗，去除脐带中残留血，此时冲洗产生的废水留存在清洗盘11的内部，然后将脐带剪碎，此时将培养试管15从固定盘31的外表面取下，然后向所有培养试管15内部加入一小部分脐带组织，然后向内部添加千分之一浓度的胶原酶ⅳ，然后静置三十分钟等待细胞组织消化，此时通过抽吸管19将清洗盘11上的清洗脐带所产生的废水向外抽出，然后将清洗盘11向上转动收起，使得清洗盘11再次通过卡条236活动卡接在无菌培养箱1的内侧壁上，此时完成干细胞的初步处理。
53.实施例二、
54.如图1
‑
7所示一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，包括无菌培养箱1，无菌培养箱1的外表面固定安装有玻璃板2，玻璃板2的侧壁上固定连接有乳胶手套10，无菌培养箱1的侧面活动铰接有侧开箱门3，侧开箱门3的内侧壁上固定安装有储物盒21，无菌培养箱1的顶部固定安装有显微镜4，无菌培养箱1的内底部固定安装有离心机16，无菌培养箱1的内部设有支撑杆30，支撑杆30的下表面活动卡接有固定盘31，固定盘31的内部活动插接有培养试管15；
55.无菌培养箱1的内侧壁上固定连接有固定座33，支撑杆30的一端活动铰接在固定座33的下表面，支撑杆30的外表面开设有观测孔34，观测孔34正对显微镜4的底端，支撑杆
30的另一端转动连接有卡座35，固定盘31的上表面中部开设有固定槽36，固定盘31的外表面四周开设有插槽37，卡座35的底端活动卡接在固定槽36的内部，培养试管15活动插接在插槽37的内部，卡座35的上表面活动插接有活动杆39，活动杆39的外表面活动套接有第三弹簧40，活动杆39的底端固定连接有固定板41，固定板41的底端固定连接有三角推块42，卡座35的底部固定连接有固定块38，固定块38的内部两侧均活动卡接有限位连接块43，两组限位连接块43相对的一侧活动卡接有第四弹簧44，三角推块42的底端与两组限位连接块43相背的一侧外表面相抵；
56.在完成实施例一的操作后，向培养试管15内加入fbs溶液终止消化，然后通过将插销27在活动槽26内部向一侧滑动，然后将转动盖板24转动打开，然后将活动杆39向下按压，使得活动杆39的底端带动三角推块42向下移动，此时两组三角推块42将两组限位连接块43向中部挤压，使得第四弹簧44被压缩，同时使得限位连接块43的底端向固定块38的内部移动，此时将固定盘31从支撑杆30的外表面取下。
57.实施例三、
58.如图1
‑
7所示一种脐带间充质干细胞无血清培养设备及其培养方法，包括无菌培养箱1，无菌培养箱1的外表面固定安装有玻璃板2，玻璃板2的侧壁上固定连接有乳胶手套10，无菌培养箱1的侧面活动铰接有侧开箱门3，侧开箱门3的内侧壁上固定安装有储物盒21，无菌培养箱1的顶部固定安装有显微镜4，无菌培养箱1的内底部固定安装有离心机16，无菌培养箱1的内部设有支撑杆30，支撑杆30的下表面活动卡接有固定盘31，固定盘31的内部活动插接有培养试管15；
59.无菌培养箱1的侧壁上开设有第二滑槽12，侧开箱门3的两侧均活动铰接有连接条13，连接条13的另一端滑动连接在第二滑槽12的内部，侧开箱门3的内侧壁上固定连接有密封橡胶板20，储物盒21固定连接在密封橡胶板20的外表面，侧开箱门3的顶部转动连接有固定螺栓22，固定螺栓22的端部螺纹连接在无菌培养箱1的外表面，离心机16的顶部活动铰接有转动盖板24，转动盖板24的下表面设有圆形挡片25，离心机16的上表面开设有方形槽17，固定盘31的下表面固定连接有与方形槽17相适配的方形条32，转动盖板24的上表面开设有活动槽26，活动槽26的内部滑动连接有插销27，插销27与离心机16活动插接，转动盖板24的下表面固定连接有固定套筒28，固定套筒28的内部活动卡接有第二弹簧29，圆形挡片25的顶端转动连接有插杆，插杆的顶端活动插接在固定套筒28的内底部；
60.然后将固定盘31和培养试管15同步放入到离心机16的内部，然后关闭转动盖板24，此时圆形挡片25在第二弹簧29的作用下与培养试管15的上表面相抵，此时启动离心机16进行离心，待离心结束后，将培养试管15和固定盘31从离心机16内部取出，然后活动卡接到支撑杆30的下表面培养三四天后更换培养液，然后对其进行过滤，将获得的细胞滤液进行离心向培养试管15中加入含有lg
‑
dmem培养液，培养三四天后更换培养液，然后再向培养试管15中加入终浓度为千分之一的胰酶，进行搅拌三十分钟，等待组织进一步消化，然后再加入十分之一浓度的pbs终止消化，然后再一次过滤，再次对滤液进行离心，离心后的细胞滤液中加入含有lg
‑
dmem培养液，培养三四天后进行过滤，然后更换培养液，并去除其中未贴壁细胞，之后每隔三天进行一次过滤和换液，直到细胞充分融合传代。
61.最后，等到细胞融合生长至七八成后，再次向培养试管15内部加入加入浓度为千分之二浓度的的edta进行消化，此时轻轻摇动培养试管15，使得消化液能够覆盖全部细胞
表面，然后过滤掉细胞培养液后，再加上三至五毫升的消化液，此时在光学显微镜下观察脐带间充质干细胞的生长情况通过显微镜4透过观测孔34对培养试管15内的干细胞生长情况进行观察，并且可以通过转动固定盘31，使得固定盘31和卡座35在支撑杆30的端部进行转动，方便对每一组培养试管15进行观察。
62.以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。