基于四环素和Cumate的共调控序列的制作方法

技术特征：
1.核酸序列，所述核酸序列包含至少2个拷贝的能与受四环素或其衍生物调控的反式激活物rtta结合的teto-操作子序列、1个拷贝的包含tata盒序列的最小启动子序列和至少1个拷贝的与受cumate调控的转录阻遏物cymr结合的cuo-操作子序列，其中所述cuo-操作子序列在所述tata盒序列的3’端下游，和所述tata盒的距离间隔为10bp至100bp，优选为30bp至50bp，更优选为50bp。2.根据权力要求1所述的核酸序列，其中所述teto-操作子序列如seq id no:24所示，及/或所述最小启动子序列如seq id no:25或seq id no:26所示，及/或所述cuo-操作子序列如seq id no:27所示。3.根据权力要求2所述的核酸序列，所述核酸序列如seq id no:23、seq id no:28、seq id no:29或seq id no:30所示。4.根据权利要求1-3中任一项所述的核酸序列，所述核酸序列在3’端还包含可剪接的内含子序列。5.载体，所述载体包含根据权利要求1-4中任一项所述的核酸序列。6.根据权利要求5所述的载体，其中所述载体是表达载体，所述表达载体包含处于根据权利要求1-4中任一项所述的核酸序列的3’端下游的目的核酸片段，并且所述目的核酸片段的转录受根据权利要求1-4中任一项所述的核酸序列的控制。7.宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求1-4中任一项所述的核酸序列或根据权利要求5或6所述的载体。8.在宿主细胞中诱导表达目的核酸片段的方法，所述方法包括以下步骤：(1)将根据权利要求6所述的载体以及rtta的编码序列和cymr的编码序列转入所述宿主细胞中；(2)在经过(1)的所述宿主细胞中表达rtta和cymr；以及(3)向经过(2)的所述宿主细胞提供四环素或其衍生物以及cumate或其功能类似物。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述rtta是rtta
adv
或rtta
3g
，优选为rtta
3g
，更优选地所述rtta的编码序列如seq id no.18所示。10.根据权利要求8所述的方法，其中所述cymr的编码序列如seq id no.15所示。

技术总结
本申请提供一种用于调控目的核酸片段的转录的核酸序列，所述核酸序列包含至少2个拷贝的能与受四环素或其衍生物调控的反式激活物rtTA结合的TetO-操作子序列、1个拷贝的包含TATA盒序列的最小启动子序列和至少1个拷贝的与受cumate调控的转录阻遏物CymR结合的CuO-操作子序列。本申请还提供包含所述核酸序列的载体和宿主细胞以及用于在宿主细胞中诱导表达目的核酸片段的方法。达目的核酸片段的方法。达目的核酸片段的方法。


技术研发人员：薛博夫 杨银辉 刘科 马墨
受保护的技术使用者：深圳市深研生物科技有限公司
技术研发日：2020.05.22
技术公布日：2021/11/25