谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl0717及其表面展示系统和构建方法与流程

技术特征：
1.一种谷氨酸棒杆菌蛋白ncgl0717，其特征在于：氨基酸序列如seq id no:1所示。2.编码权利要求1所述谷氨酸棒杆菌蛋白ncgl0717的基因，其特征在于：核苷酸序列如seq id no:2所示。3.权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌蛋白ncgl0717作为锚定蛋白在表面展示系统中的应用，其特征在于：所述的表面展示系统为谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统。4.一种谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统，其特征在于：是以权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌壁蛋白ncgl0717为锚定蛋白，将靶蛋白固定在谷氨酸棒杆菌细胞表面构成的。5.根据权利要求4所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统，其特征在于：所述的靶蛋白为荧光蛋白或淀粉酶中的任意一种。6.根据权利要求5所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统，其特征在于：所述的靶蛋白为增强绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白或α
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淀粉酶。7.权利要求4～6任一项所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将编码权利要求1所述谷氨酸棒杆菌蛋白ncgl0717的基因克隆到表达载体的表达盒中，得到以谷氨酸棒杆菌壁蛋白ncgl0717为锚定蛋白的表面展示表达载体；(2)将靶蛋白的基因序列克隆到步骤(1)中得到的表面展示表达载体的谷氨酸棒杆菌壁蛋白ncgl0717的基因序列的上游，与所述谷氨酸棒杆菌壁蛋白ncgl0717的基因形成融合基因；(3)转化谷氨酸棒杆菌，然后根据表达载体上的筛选标记筛选阳性转化子，即得到所述谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统。8.根据权利要求7所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(i)将编码权利要求1所述谷氨酸棒杆菌蛋白ncgl0717的基因、靶蛋白的基因和表达载体通过同源重组的方式，构建得到重组质粒；(ii)将步骤(i)中得到重组质粒转化谷氨酸棒杆菌，挑取阳性转化子，得到所述谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统；步骤(i)中所述的靶蛋白为荧光蛋白或淀粉酶中的任意一种；进一步为增强绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白或α
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淀粉酶；所述的增强绿色荧光蛋白的核苷酸序列如seq id no:5所示；所述的红色荧光蛋白的核苷酸序列如seq id no:17所示；所述的α
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淀粉酶的核苷酸序列如seq id no:21所示；步骤(i)中所述的表达载体为带有卡那霉素抗性的谷氨酸棒杆菌表达载体；进一步为谷氨酸棒杆菌表达载体pec
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xk99e。9.权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌蛋白ncgl0717、编码权利要求1所述谷氨酸棒杆菌蛋白ncgl0717的基因或权利要求4～6任一项所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统在制备淀粉酶中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的淀粉酶为α
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淀粉酶。

技术总结
本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl0717及其表面展示系统和构建方法。该谷氨酸棒杆菌壁蛋白Ncgl0717的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，该谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl0717在谷氨酸棒杆菌中表达量较高，可将其用于构建高展示效率的谷氨酸棒杆菌表面展示系统。本发明中的谷氨酸棒杆菌表面展示系统是以所述的谷氨酸棒杆菌壁蛋白Ncgl0717为锚定蛋白，将靶蛋白固定在谷氨酸棒杆菌细胞表面构成的。本发明丰富了谷氨酸棒杆菌表面展示系统的内源锚定蛋白的表达种类。蛋白的表达种类。蛋白的表达种类。


技术研发人员：郑穗平 林珂瑞 韩双艳 林影
受保护的技术使用者：华南理工大学
技术研发日：2021.08.17
技术公布日：2021/12/16