一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素A眼药水的方法与流程

一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法
技术领域
1.本发明涉及环孢素a眼药水技术领域，具体为一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法。


背景技术：

2.干眼症是指由多种因素所导致的、以眼睛干涩为主要症状的泪液分泌障碍性眼病，常伴有双眼痒感、异物感、烧灼感，或畏光、视物模糊、视力波动等表现，常见之症状包括眼睛干涩、容易疲倦、眼痒、有异物感、痛灼热感、分泌物黏稠、怕风、畏光、对外界刺激很敏感；有时眼睛太干，基本泪液不足，反而刺激反射性泪液分泌，而造成常常流泪；较严重者眼睛会红肿、充血、角质化、角膜上皮破皮而有丝状物黏附，这种损伤日久则可造成角结膜病变，并会影响视力。
3.该病还会导致视觉功能受损，会降低患者工作效率和生活质量，大多数被诊断出的患者无法通过目前的处方药物获得满意的疾病缓解，眼药水大多治标不治本，除了部分无防腐剂的眼药水以外不建议长期使用，缓解视疲劳的最好方法是休息。
4.环孢素a是由11个氨基酸组成的环性多肽类物质，是一种新型的强效免疫抑制剂，环孢素a因含疏水性氨基酸较多，故不溶于水，但能溶于甲醇、乙醇、丙酮等多种有机溶剂，市面上常见的环孢素制剂都是油剂的或者微乳制剂，广泛存在药物渗透性低，起效慢，容易导致过敏反应等缺点。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，该方法制备的眼药水具有刺激性小，效果显著，起效快，并具有良好的耐受性的优点，解决了油剂或微乳剂环孢素眼药水药物渗透性低，起效慢，且容易导致过敏反应的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：
7.s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液，胆固醇配置氯仿溶液，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液，环孢素a配置氯仿溶液；
8.s2：取氢化大豆磷脂溶液，胆固醇溶液，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液，环孢素a溶液，放入5ml烧杯中进行混匀；
9.s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干；
10.s4：将双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
11.优选的，所述s1中氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml；环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml。
12.优选的，所述s2中分别取取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液100-1000ul，二硬
脂酰磷脂酰乙醇胺溶液1-2ml，环孢素a溶液100-500ul。
13.优选的，所述s3中真空干燥器中过夜抽干后，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘。
14.优选的，所述s4中取10ml双蒸水，水浴温度为50-80℃，水浴水浴30-60min，然后超声波处理30-60min。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：本发明制备的水溶性环孢素a眼药水，能够缓解视觉疲劳，减轻眼部干涩，预防结膜炎和角膜炎等并发症，并治愈干眼症，降低给药刺激性，提高患者的依从性，有利于人们的使用。
附图说明
16.图1为本发明制备的环孢素a纳米脂质体溶液图；
17.图2为本发明环孢素a纳米脂质体溶液放置不同天数的数值变化图。
具体实施方式
18.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
19.实施例1
20.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液100ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液1ml，环孢素a溶液100ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为50-℃，水浴水浴30-min，超声波处理30min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
21.实施例2
22.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液500ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液2ml，环孢素a溶液300ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为60℃，水浴水浴40min，超声波处理40min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
23.实施例3
24.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固
醇溶液700ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液1ml，环孢素a溶液500ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为80℃，水浴水浴60min，超声波处理60min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
25.实施例4
26.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液1000ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液2ml，环孢素a溶液400ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为70℃，水浴水浴50min，超声波处理40min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
27.实施例5
28.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液300ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液2ml，环孢素a溶液400ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为60℃，水浴水浴60min，超声波处理60min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
29.实施例6
30.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液600ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液2ml，环孢素a溶液600ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为50℃，水浴水浴30min，超声波处理30min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
31.实施例7
32.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液800ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液1ml，环孢素a溶液400ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产
品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为60℃，水浴水浴50min，超声波处理40min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
33.实施例8
34.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液700ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液2ml，环孢素a溶液400ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为70℃，水浴水浴35min，超声波处理45min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
35.实施例9
36.一种用纳米脂质体技术制备水溶性环孢素a眼药水的方法，包括以下步骤：s1：氢化大豆磷脂配置氯仿溶液50mg/ml，胆固醇配置氯仿溶液50mg/ml，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺配置氯仿溶液25mg/ml，环孢素a配置氯仿溶液100mg/ml；s2：取氢化大豆磷脂溶液2ml，胆固醇溶液200ul，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶液1-2ml，环孢素a溶液200ul，放入5ml烧杯中进行混匀；s3：混匀之后，用氮气轻轻吹干，边吹边旋转烧杯，在烧杯中形成一层膜，然后放在真空干燥器中过夜抽干，用封口纸封住烧杯以免进入灰尘；s4：将10ml双蒸水加入到吹干后的产品中进行重新溶解，进行水浴和超声处理，水浴温度为60℃，水浴水浴40min，超声波处理50min，过200nm滤膜，得到水溶性环孢素a眼药水。
37.在图1制备的环孢素a纳米脂质体溶液中测得纳米脂质体直径集中在110nm，多分散性指数pdi为0.179；
38.图2显示室温放置2天到21天内的数值无变化，脂质体粒径仍然保持在110nm，多分散性指数pdi为0.184。
39.说明该方法制备的水溶性环孢素a眼药水稳定性良好。
40.对比试验：
41.实验药物：水溶性环孢素a眼药水、环孢素油剂眼药水和环孢素微乳剂眼药水。
42.实验动物：小白鼠12只。
43.实验方法：将小白鼠随机分为两组，每组6只，分别用水溶性环孢素a眼药水、环孢素油剂眼药水和环孢素微乳剂眼药水，每眼50ul给药，共给药13次，给药间隔30分钟，最后一次给药后1h，6h，12h，24h裂隙灯下观察眼部刺激性，根据眼部刺激性常用评分标准打分：
44.[0045][0046]
表1眼部刺激性评分总分
[0047]
从上述实验表明，环孢素油剂眼药水和环孢素微乳剂眼药水对实验动物眼部刺激性很大，尤其结膜红肿，充血，而本发明制备的水溶性环孢素a眼药水产生的刺激性明显降低。
[0048]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。