一种包含CD3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体及其用途的制作方法

技术特征：
1.一种包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，包括：依次连接的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；所述胞外结构域包括抗原识别区和铰链区；所述胞内结构域与跨膜结构域相连的一端连接有cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序。2.如权利要求1所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：(1)所述cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的氨基酸序列如seq id no：1所示；(2)所述胞内结构域包括依次连接的cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序、共刺激信号传导区和cd3ζ胞内段。3.如权利要求2所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，其特征在于，所述共刺激信号传导区选自cd27、cd28、cd134、4-1bb、ox-40和icos中的一种或多种的胞内段。4.如权利要求3所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：(1)所述cd28的胞内段的氨基酸序列如seq id no：2所示；(2)所述cd3ζ胞内段的氨基酸序列如seq id no：3所示。5.如权利要求1所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：a.所述抗原识别区选自针对肿瘤表面抗原的单链抗体，所述肿瘤表面抗原选自cd19、间皮素、cd20、cd22、cd123、cd30、cd33、cd38、cd138、bcma、fibroblast activation protein、glypican-3、cea、egfrviii、psma、her2、il13rα2、cd171和gd2中的一种或多种；b.所述跨膜结构域选自cd28、cd4、cd8α、ox40或h2-kb中一种或多种的跨膜区；c.所述铰链区选自cd28铰链区、cd8α铰链区、cd4铰链区、免疫球抗体igg的铰链区或免疫球抗体igg的铰链区偶联ch2ch3区域的一种或多种。6.如权利要求5所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：d.所述单链抗体选自fmc63；e.所述cd28的跨膜区的氨基酸序列如seq id no：4所示；f.所述cd28铰链区的氨基酸结构如seq id no：7所示。7.如权利要求1-6任一所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：1)所述包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体的抗原识别区选自fmc63、铰链区选自cd28铰链区；所述跨膜结构域选自cd28的跨膜区；胞内结构域包括依次连接的cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序、cd28的胞内段和cd3ζ胞内段。2)所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如seq id no：5所示。8.一种多核苷酸序列，该多核苷酸序列选自：(1)编码权利要求1-7任一所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。
9.如权利要求8所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列如seq id no：6所示。10.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求8-9任一所述的多核苷酸序列；优选的，所述核酸构建物为载体；更优选的，所述核酸构建物为慢病毒载体，含有复制起始位点、3’ltr、5’ltr以及权利要求8-9任一所述的多核苷酸序列。11.一种慢病毒载体系统，所述慢病毒载体系统含有权利要求10所述的核酸构建物及慢病毒载体辅助成分。12.一种基因修饰的t细胞，其特征在于，所述细胞含有权利要求8-9任一所述的多核苷酸序列，或含有权利要求10所述的核酸构建物，或感染了权利要求11所述的慢病毒载体系统。13.权利要求1－7中任一项所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体、权利要求8-9任一所述的多核苷酸序列，或含有权利要求10所述的核酸构建物，或权利要求11所述的慢病毒载体系统在制备以下任一种或多种用途产品中的应用：(1)制备t细胞；(2)提高t细胞存活能力；(3)抑制t细胞凋亡；(4)增强t细胞增殖能力；(5)提高t细胞抗肿瘤能力；(6)抑制t细胞的细胞因子ifn-γ水平。14.权利要求1－7中任一项所述的包含cd3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体、权利要求8-9任一所述的多核苷酸序列，或含有权利要求10所述的核酸构建物，或权利要求11所述的慢病毒载体系统在或权利要求12所述的基因修饰的t细胞在制备肿瘤治疗产品中的应用。

技术总结
本发明提供一种包含CD3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，包括：依次连接的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；所述胞外结构域包括抗原识别区和铰链区；所述胞内结构域与跨膜结构域相连的一端连接有CD3ε胞内碱性氨基酸富集区基序。本发明的包含CD3ε胞内碱性氨基酸富集区基序的嵌合抗原受体，其修饰的T细胞存活能力的提高、凋亡水平的下降、增殖能力的提高可以显著提高T细胞的持续性，从而显著提高T细胞的抗肿瘤能力。该优势在临床应用上可进一步提高肿瘤治疗果，延长疾病缓解时间，降低复发率，提高患者生存期。同时，其修饰的T细胞可下调表达细胞因子IFNγ的水平，降低巨噬细胞单核细胞活化产生炎性细胞因子如IL-1β和IL-6。6。


技术研发人员：许琛琦 周秋萍 吴微 徐心怡 何星
受保护的技术使用者：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
技术研发日：2020.07.27
技术公布日：2022/1/28