抗纤溶酶剂的制作方法

本发明涉及具有抗纤溶酶作用的源自植物的成分。

背景技术

纤溶酶作为分解血栓的主要成分、即纤维蛋白的酶而已知，通常，以作为前体的纤溶酶原的形式存在于血浆中。纤溶酶原通过利用纤溶酶原激活剂(PA)的肽键的切断而被激活，游离出纤溶酶，游离的纤溶酶有助于血栓的溶解。纤溶酶原的激活受纤溶酶原激活抑制剂(PAI)控制，通过PA与PAI的平衡而维持组织的恒定性。

在细胞表面产生的纤溶酶直接或间接地进行细胞外蛋白质的分解，参与细胞的移动、组织修复等。在皮肤组织中，纤溶酶原/纤溶酶体系也已知参与形态形成、疾病的发病等，据报告PA参与表皮细胞的生长(非专利文献1)。

抗纤溶酶剂是通过阻碍利用PA的纤溶酶原的激活来防止纤维蛋白分解、发挥止血作用的药剂，为了阻止利用纤溶酶的作用而使用。作为抗纤溶酶剂的例子，一直以来已知ε-氨基己酸和氨甲环酸之类的合成纤溶酶抑制剂。进而，其后还发现了白桦提取物(专利文献1)、蛇麻提取物和果香菊提取物(专利文献2)之类的植物提取物。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:kirchheimer JC et at.,Eur J Biochem,181,103-107(1989)

专利文献

专利文献1：日本特开平10-338614号公报

专利文献2：日本特开2000-229833号公报

技术实现要素：

发明所要解决的课题

由于源自植物的成分构建了因天然物而导致的复杂的多成分体系，因此根据制剂形态、共存的其他成分而可能是各种各样的、稳定性等性质可能不同。因此，仅用包含迄今已知的植物提取物的抗纤溶酶剂，无法灵活应对越发多样化的制剂配方。

因此，本发明的目的在于，提供一种作为抗纤溶酶剂有用的新的源自植物的成分。

用于解决课题的技术方案

本发明人进行了深入研究，结果发现，在唇形科黄芩属植物、姜科姜黄属植物、蔷薇科地榆属植物、芍药科芍药属植物和豆科松雀花属植物的提取物、以及芸香科柑橘属植物的果汁中，具有抗纤溶酶活性。本发明是基于该见解，通过进一步反复研究而完成的。

即，本发明提供下述方式的发明。

项1.一种抗纤溶酶剂，其特征在于，包含：

唇形科黄芩属植物、姜科姜黄属植物、蔷薇科地榆属植物、芍药科芍药属植物和/或豆科松雀花属植物的提取物；以及/或者

芸香科柑橘属植物的果汁。

项2.根据项1所述的抗纤溶酶剂，其中，所述唇形科黄芩属植物选自由黄芩、美黄芩和半枝莲组成的组。

项3.根据项1或2所述的抗纤溶酶剂，其中，所述姜科姜黄属植物选自由姜黄、芒果姜、郁金、莪术和印尼莪术(“印尼莪术”的日文原文：クスリウコン)组成的组。

项4.根据项1～3中任一项所述的抗纤溶酶剂，其中，所述蔷薇科地榆属植物是地榆和/或小地榆。

项5.根据项1～4中任一项所述的抗纤溶酶剂，其中，所述芍药科芍药属植物选自由牡丹、芍药和山芍药组成的组。

项6.根据项1～5中任一项所述的抗纤溶酶剂，其中，所述豆科松雀花属植物是线叶金雀花。

项7.根据项1～6中任一项所述的抗纤溶酶剂，其中，所述芸香科柑橘属植物选自由来檬、酸橙、甜橙、葡萄柚、箭叶橙、香橙、酸桔、臭橙、柑橘、柠檬、香橼、佛手、夏橙、脐橙、八朔柑、扁实柠檬、立花橘、伊予橘、福橘、温州蜜柑、香柠檬和柚组成的组。

发明效果

根据本发明，可提供作为抗纤溶酶剂有用的新的源自植物的成分。

附图说明

图1示出各源自植物的成分的纤溶酶活性的测定结果。

具体实施方式

本发明的抗纤溶酶剂的特征在于，包含唇形科黄芩属植物、姜科姜黄属植物、蔷薇科地榆属植物、芍药科芍药属植物和/或豆科松雀花属植物的提取物；以及/或者芸香科柑橘属植物的果汁作为有效成分。以下，针对本发明的抗纤溶酶剂进行详细描述。

唇形科黄芩属植物提取物

唇形科(Labiatae)黄芩属(Scutellaria)植物提取物是已知具有抗过敏作用、抗菌作用、收敛作用、保湿作用等的公知成分。本发明中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，作为唇形科黄芩属植物提取物的优选的例子，可以举出黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的提取物、美黄芩(Scutellaria lateriflora Linne)的提取物和半枝莲(Scutellaria barbata D.Don.)的提取物。这些植物提取物可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。

上述的植物提取物之中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，可以优选举出黄芩的提取物。黄芩的提取物在准药品原料标准等中表示为黄芩提取物。具体而言，黄芩的提取物可以从黄芩的根通过使用提取溶剂进行提取处理而得到。作为黄芩的提取处理中使用的提取溶剂，可以举出例如水；乙醇、异丙醇等低级醇；1,3-丁二醇、丙二醇、甘油等多元醇；它们的混合液等极性溶剂，可以优选举出水、乙醇、1,3-丁二醇、甘油或它们的混合溶剂。黄芩提取物可以从例如Yamadayaken Co.,Ltd.、ICHIMARU PHARCOS株式会社、丸善制药株式会社等商业获取。

作为本发明的抗纤溶酶剂中的唇形科黄芩属植物提取物的含量，没有特别限定，可以根据要给与的抗纤溶酶效果而适当确定，可以举出例如以干燥重量换算量计0.00009～10重量％、优选为0.0009～5重量％、更优选为0.009～3重量％、进一步优选为0.09～0.9重量％。

姜科姜黄属植物提取物

姜科(Zingiberaceae)姜黄属(Curcuma)植物提取物是抗氧化作用、抗老化作用等为已知的公知成分。本发明中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，作为姜科姜黄属植物提取物的优选的例子，可以举出姜黄(Curcuma longa Linne)的提取物、芒果姜(Curcuma amada Roxb.)的提取物、郁金(Curcuma aromatica Salisb.)的提取物、莪术(Curcuma zedoaria Roscoe)的提取物和印尼莪术(Curcuma domestica Valeton)的提取物。这些植物提取物可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。

上述的植物提取物之中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，可以优选举出姜黄的提取物。姜黄的提取物在准药品原料标准等中表示为姜黄提取物。具体而言，姜黄的提取物可以从姜黄的根茎通过使用提取溶剂进行提取处理而得到。作为姜黄的提取处理中使用的提取溶剂，可以举出例如水；乙醇、异丙醇等低级醇；1,3-丁二醇、丙二醇、甘油等多元醇；它们的混合液等极性溶剂，可以优选举出水、乙醇、1,3-丁二醇或它们的混合溶剂。姜黄提取物可以从例如Yamadayaken Co.,Ltd.、ICHIMARU PHARCOS株式会社、丸善制药株式会社、日油株式会社等商业获取。

作为本发明的抗纤溶酶剂中的姜科姜黄属植物提取物的含量，没有特别限定，可以根据要给与的抗纤溶酶效果而适当确定，可以举出例如以干燥重量换算量计0.00008～10重量％、优选为0.0008～5重量％、更优选为0.008～1重量％、进一步优选为0.08～0.8重量％。

蔷薇科地榆属植物提取物

蔷薇科(Rosaceae)地榆属(Sanguisorba)植物提取物是收敛作用、抗菌作用、抗过敏作用、抗老化作用、育发作用、除臭作用等为已知的公知成分。本发明中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，作为蔷薇科地榆属植物提取物的优选的例子，可以举出地榆(Sanguisorba officinalis Linne)的提取物、小地榆(Sanguisorba minor Scop.)的提取物。这些植物提取物可以单独使用1种，也可以组合使用2种。

上述的植物提取物之中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，可以优选举出地榆的提取物。地榆的提取物在准药品原料标准等中表示为地榆提取物。具体而言，地榆的提取物可以从地榆的根和根茎通过使用提取溶剂进行提取处理而得到。作为地榆的提取处理中使用的提取溶剂，可以举出例如水；乙醇、异丙醇等低级醇；1,3-丁二醇、丙二醇、甘油等多元醇；它们的混合液等极性溶剂，可以优选举出水、乙醇、1,3-丁二醇或它们的混合溶剂。地榆提取物可以从例如丸善制药株式会社等商业获取。

作为本发明的抗纤溶酶剂中的蔷薇科地榆属植物提取物的含量，没有特别限定，可以根据要给与的抗纤溶酶效果而适当确定，可以举出例如以干燥重量换算量计0.00008～10重量％、优选为0.0008～5重量％、更优选为0.008～3重量％、进一步优选为0.08～0.8重量％。

芍药科芍药属植物提取物

芍药科(Paeoniaceae)芍药属(Paeonia)植物提取物是细胞赋活作用、抗菌作用、保湿·隔离改善作用、抗皱纹作用等为已知的公知成分。本发明中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，作为芍药科芍药属植物提取物的优选的例子，可以举出牡丹(Paeonia suffruticosa Andrews)的提取物、芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的提取物、山芍药(Paeonia japonica(Makino)Miyabe et Takeda)的提取物。这些植物提取物可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。

上述的植物提取物之中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，可以优选举出芍药的提取物。芍药的提取物在准药品原料标准等中表示为芍药提取物。具体而言，芍药的提取物可以从芍药的根通过使用提取溶剂进行提取处理而得到。作为芍药的提取处理中使用的提取溶剂，可以举出例如水；乙醇、异丙醇等低级醇；1,3-丁二醇、丙二醇、甘油等多元醇；它们的混合液等极性溶剂，可以优选举出水、乙醇、1,3-丁二醇或它们的混合溶剂。芍药提取物可以从例如Yamadayaken Co.,Ltd.、ICHIMARU PHARCOS株式会社、丸善制药株式会社等商业获取。

作为本发明的抗纤溶酶剂中的芍药科芍药属植物提取物的含量，没有特别限定，可以根据要给与的抗纤溶酶效果而适当确定，可以举出例如以干燥重量换算量计0.0001～10重量％、优选为0.001～5重量％、更优选为0.01～3重量％、进一步优选为0.1～1重量％。

豆科松雀花属植物提取物

豆科(Fabaceae)松雀花(Aspalathus)属植物提取物是抗过敏作用、抗氧化作用等为已知的公知成分。本发明中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，作为豆科松雀花属植物提取物的优选的例子，可以举出线叶金雀花(Aspalathus Linearis(Burm.f.)R.Dahlgren)的提取物。

线叶金雀花的提取物在准药品原料标准等中表示为线叶金雀花提取物(Aspalathus Linearis extract)。具体而言，线叶金雀花的提取物可以从线叶金雀花的全草通过使用提取溶剂进行提取处理而得到。作为线叶金雀花的提取处理中使用的提取溶剂，可以举出例如水；乙醇、异丙醇等低级醇；1,3-丁二醇、丙二醇、甘油等多元醇；它们的混合液等极性溶剂，可以优选举出1,3-丁二醇。针对线叶金雀花提取物，可以从例如丸善制药株式会社、Yamadayaken Co.,Ltd.、ICHIMARU PHARCOS株式会社等商业获取。

作为本发明的抗纤溶酶剂中的豆科松雀花属植物提取物的含量，没有特别限定，可以根据要给与的抗纤溶酶效果而适当确定，可以举出例如以干燥重量换算量计0.0005～10重量％、优选为0.005～7.5重量％、更优选为0.05～6重量％、进一步优选为0.5～5重量％。

芸香科柑橘属的果汁

芸香科(Rutaceae)柑橘属(Citrus)的果汁是抗氧化作用、保湿作用、收敛作用、去角质(ピーリング)作用、角质柔软作用等为已知的公知成分。本发明中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，作为芸香科柑橘属植物提取物的优选的例子，可以举出来檬(Citrus aurantifolia Swingle)的果汁、酸橙(Citrus aurantium Linne)的果汁、甜橙(Citrus sinensis(L.)Osbeck)的果汁、葡萄柚(Citrus paradisi Macfad.)的果汁、箭叶橙(Citrus hystrix DC.)的果汁、香橙(Citrus junos Siebold ex Tanaka)的果汁、酸桔(Citrus sudachi Hort.ex Shirai)的果汁、臭橙(Citrus sphaerocarpa Hort.ex Tanaka)的果汁、柑橘(Citrus reticulata Blanco)的果汁、柠檬(Citrus limon(Linne)Osbeck)的果汁、香橼(Citrus medica L.)的果汁、佛手(Citrus medica Linne var.sarcodactylis(Hoola van Nooten)Swingle)的果汁、夏橙(Citrus natsudaidai Hayata)的果汁、脐橙(Citrus sinensis Osbeck)的果汁、八朔柑(Citrus aurantium L.subsp.hassaku Hiroe)的果汁、扁实柠檬(Citrus depressa Hayata)的果汁、立花橘(Citrus tachibana(Makino)Tanaka)的果汁、伊予橘(Citrus iyo Hort.ex Tanaka)的果汁、福橘(Citrus tangerina Hort.ex Tanaka)的果汁、温州蜜柑(Citrus unshiu(Swingle)Marcow.)的果汁、香柠檬(Citrus bergamia Risso et Poit.)的果汁、柚(Citrus grandis Osbeck)的果汁。这些植物果汁可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。

上述的植物果汁之中，从得到更进一步优选的抗纤溶酶活性的观点出发，可以优选举出来檬的果汁。具体而言，来檬的果汁可以压榨来檬果实而得到。作为来檬果汁的具体形态，可以举出生果汁和干燥果汁。来檬果汁针中，生果汁可以从例如丸善制药株式会社等商业获取。

作为本发明的抗纤溶酶剂中的芸香科柑橘属的果汁的含量，没有特别限定，可以根据要给与的抗纤溶酶效果而适当确定，可以举出例如以干燥重量换算量计0.001～10重量％、优选为0.01～10重量％、更优选为0.1～10重量％、进一步优选为1～10重量％。

其他成分

本发明的抗纤溶酶剂除了上述成分之外，还可以根据需要含有其他药理成分。作为这样的药理成分，可以举出例如抗炎症剂、抗氧化剂、杀菌剂、清凉化剂、维生素类、粘多糖类等。

此外，本发明的抗纤溶酶剂为了制成期望的制剂形态，可以根据需要包含基剂、添加剂。针对这样的基剂、添加剂，以药学可接受为限度，没有特别限制，可以举出例如水、低级醇(乙醇、异丙醇等)、多元醇(甘油、丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇等)等水性基剂；天然来源油、矿物油、酯油、脂肪酸烷基酯、脂肪酸、脂肪酸酯、高级醇等油性基剂；表面活性剂；清凉化剂、防腐剂、增香剂、着色剂、粘稠剂、pH调节剂、润湿剂、稳定化剂、抗氧化剂、紫外线吸收剂、螯合剂、粘合剂、缓冲剂、增溶剂、助溶剂、保存剂等添加剂。

用途·制剂形态

本发明的抗纤溶酶剂用于对纤溶酶、纤溶酶原激活剂活性发挥拮抗作用、直接或间接地阻碍纤溶酶的活性表达的用途。此外，针对本发明的抗纤溶酶剂的制剂形态，没有特别限制，可以为液状、固体状、半固体状等任一者。

实施例

以下示出实施例，更具体地说明本发明，但本发明不限于此。

针对表1所示的源自植物的原材料(表中，BG表示1,3-丁二醇)，依据文献R Homma et al.,The International Journal of Biochemistry&Cell Biology 37(2005)1911-1920中记载的方法，通过以下记载的方法测定纤溶酶活性，由此测定抗纤溶酶活性能。

(源自植物的原材料)

[表1]

(纤溶酶活性测定方法)

(1)试剂和样本制备

(1-1)基质溶液

向基质(Boc-Val-Leu-Lys-MCA；PEPTIDE INSTITUTE,INC.；3104-v)5.3mg中，添加DMSO 860.7μl，制备10mM储备溶液，在-20℃下保管。使用时，用200mM Tris-HCl(pH8.0)以基质浓度成为2mM的方式稀释。

(1-2)纤溶酶溶液

向34U/μL的纤溶酶溶液(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation；166-24231)1μl中，添加200mM Tris-HCl(pH8.0)33μl，制备纤溶酶1U/μl储备溶液。使用时，用200mM Tris-HCl(pH8.0)以纤溶酶浓度成为100mU/ml的方式稀释。

(1-3)样本溶液

针对黄芩根提取物，以提取物的干燥重量换算计成为0.09重量％、0.45重量％和0.90重量％的方式，分别制备样本溶液。

针对姜黄根茎提取物，以提取物的干燥重量换算计成为0.08重量％、0.40重量％和0.80重量％的方式，分别制备样本溶液。

针对地榆(根和根茎)提取物，以提取物的干燥重量换算计成为0.08重量％、0.40重量％和0.80重量％的方式，分别制备样本溶液。

针对芍药根提取物，以提取物的干燥重量换算计成为0.10重量％、0.50重量％和1.00重量％的方式，分别制备样本溶液。

针对线叶金雀花(全草)提取物，以提取物的干燥重量换算计成为0.50重量％、2.50重量％和5.00重量％的方式，分别制备样本溶液。

针对来檬果汁，以果汁的干燥重量换算计成为1.00重量％、5.00重量％和10.00重量％的方式，分别制备样本溶液。

应予说明，样本溶液的制备中，在将表1所示的各商品稀释的情况下，使用与各商品中使用的溶剂相同组成的溶剂进行稀释。

(2)测定方案

(2-1)分注操作

(样品)

在96孔微孔板中，以各40μL分注样本溶液。

在分注了样本溶液的孔中，以各50μL分注基质溶液。

在分注了基质溶液的孔中，以各10μL分注纤溶酶溶液。

(对照)

替代样本溶液而分注1,3-BG水溶液，除此之外，与上述同样地，进行基质溶液和纤溶酶溶液的分注操作。

(空白)

在96孔微孔板中，以各40μL分注样本溶液或对照后，在各孔中以各60μL分注200mM Tris-HCl。

(2-2)测定

在37℃下进行纤溶酶与基质的酶反应。酶反应时间设为在纤溶酶与基质的酶反应开始后60分钟。通过酶反应，与基质结合的MCA被切断，由此，荧光物质AMC游离，发出荧光。纤溶酶活性越高，荧光强度越强。即，荧光强度越弱，抗纤溶酶活性越高。通过EnSight(测定波长：Ex380nm，Em460nm)测定所得荧光。

(3)解析

从各样品各自的荧光强度分别减去空白的荧光强度，以对照的纤溶酶活性设为100％，求出各源自植物的成分的纤溶酶活性的比率(％)。结果示于图1。

如图1所示，任一源自植物的成分均确认到抗纤溶酶活性，也能够确认到浓度依赖性。