一种氟可拉定的纳米胶束制剂及其制备方法和用途与流程

一种氟可拉定的纳米胶束制剂及其制备方法和用途
1.技术领域
2.本发明涉及一种氟可拉定的纳米胶束制剂，该制剂的制备方法和用途，属于医药领域。


背景技术：

3.氟可拉定是在阿可拉定的基础上经过结构优化得到的全新有效单体，其结构式如下式(a)所示：在申请号为201210573072.6的专利公开了上式a的化合物，并且公开了该化合物具有治疗肿瘤，如乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、白血病、肝癌、淋巴癌、肺癌、前列腺癌、胃癌或胰腺癌的作用。然而，申请人在研发过程中发现氟可拉定在水中和油中都具有溶解性差的缺点，很难制成溶剂。
4.在公开号为wo2016127925的专利中公开了黄酮化合物的药物组合物，其中包括了式a化合物的药物组合物，这种药物组合物克服了现有的黄酮化合物在水中和油中难以溶解的特性，将上式a化合物制成了自乳化剂型的方式，充分提高了黄酮化合物在动物体内的生物利用度。
5.然而，申请人发现式a化合物的自乳化剂性在向动物给药过程中，具有安全性差的缺点，因此，需要开发一种安全性高的并且生物利用度高的制剂。
6.

技术实现要素：

7.本发明的一个目的是提供一种氟可拉定纳米胶束制剂，该制剂具有生物利用度高的优点。
8.本发明的另一个目的是提供本发明氟可拉定纳米胶束制剂的制备方法。
9.本发明一方面提供了一种氟可拉定纳米胶束制剂，该制剂包括：氟可拉定和聚合物辅料。
10.优选地，所述的制剂为口服制剂。
11.优选地，所述的制剂为液体制剂或者固体制剂。
12.优选地，所述的制剂为固体制剂时，含有以质量份计：1份氟可拉定和1-20份聚合
物辅料。
13.更优选地，所述的制剂含有以质量份计：1份氟可拉定和4份聚合物辅料。
14.优选地，所述的制剂为液体制剂时，其中含有以质量份计：1份氟可拉定、2-20份聚合物辅料和20-500份水。
15.优选地，所述的制剂为液体制剂时，其中含有以质量份计：1份氟可拉定、4份聚合物辅料和250份水。
16.优选地，所述的制剂为固体制剂时，其中的氟可拉定以无定型态存在。
17.优选地，所述的氟可拉定纳米胶束制剂为固体制剂时的x射线粉末衍射图谱如图3所示。
18.优选地，所述的聚合物辅料选自聚乙烯己内酰胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物、共聚维酮va64、聚乙二醇4000、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮k25、聚乙烯吡咯烷酮k30、聚乙烯吡咯烷酮k90、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯和聚乙二醇-15羟硬脂酸酯中的一种或几种。
19.本发明另一方面还提供了一种制备本发明氟可拉定纳米胶束制剂的方法，该方法包括以下步骤：a）首先将氟可拉定溶解于能够溶解氟可拉定的溶剂中，形成氟可拉定溶液；b）将聚合物辅料溶解于能够溶解所述辅料的溶剂中，形成聚合物溶液；c）将氟可拉定溶液加入到聚合物溶液中，形成悬浊液；d）将悬浊液离心，去除沉淀，收集上清液；e）将上清液浓缩制成胶束浓缩液。
20.优选地，在所述的步骤e之后还包括步骤e’：向氟可拉定胶束浓缩液中加入矫味剂、防腐剂和消泡剂中的一种或几种，混合均匀，得到氟可拉定纳米胶束液体制剂。
21.优选地，所述的方法还包括以下步骤：f）在所述的胶束浓缩液中，加入冻干辅料，冻干制成冻干片剂；优选地，所述的冻干辅料选自甘露糖、右旋糖酐、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘氨酸、海藻糖和聚乙烯吡咯烷酮10k中的一种或几种，并且，所述的冻干辅料是胶束浓缩液中氟可拉定和冻干辅料总质量的1-50%。
22.更优选地，所述的冻干辅料是胶束浓缩液中氟可拉定和冻干辅料总质量的2-20%。
23.优选地，能够溶解氟可拉定的溶剂包括四氢呋喃、甲醇、乙醇、丙酮、n,n-二甲基甲酰胺或碱的水溶液，所述的碱的水溶液包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或碳酸钠水溶液。
24.优选地，所述的能够溶解所述辅料的溶剂包括石油醚、正己烷、水、盐酸、硫酸、硝酸、亚硫酸或磷酸的水溶液。
25.优选地，所述的矫味剂包括甜味剂和芳香剂，所述的甜味剂为非糖型甜味剂，所述的甜味剂占氟可拉定纳米胶束液体制剂质量的0.01-1%，所述的芳香剂占氟可拉定纳米胶束液体制剂质量的0.01-5%。
26.优选地，所述的防腐剂占氟可拉定纳米胶束液体制剂质量的0.01-1%，所述的消泡剂占氟可拉定纳米胶束液体制剂质量的0.01-1%。
27.优选地，在所述的步骤c）中，聚合物溶液在20-2000转/分钟的搅拌速度下，将氟可
拉定加入其中；在步骤d)中，悬浊液离心的速度为1000-20000转/分钟。
28.优选地，在步骤e）中，浓缩后的浓溶液的浓度为5-50mg氟可拉定/ml。
29.优选地，冻干的温度为-10～-80℃。
30.优选地，所述的非糖甜味剂选自三氯蔗糖、甜菊糖苷、甜菊醇、甘露醇、乳糖醇、麦芽糖醇、阿力甜、阿斯巴甜、糖精、糖精钠、糖精钙、乙酰磺氨酸钾和索马甜中的一种或几种。
31.优选地，所述的芳香剂选自樱桃味、柠檬味、酸橙味、橙子味、桔子味、柑橘味、薄荷味、草莓味、焦糖味、桃味、树莓味、柚子味、香草味、奶油味、巧克力味和葡萄味芳香剂中的一种或者几种。
32.优选地，所述的防腐剂选自尼泊金酯类、氯代丁醇、丙酸和山梨酸酯中的一种或者几种。
33.优选地，所述的消泡剂选自矿物油类、醇类、脂肪酸、脂肪酸酯类、酰胺类、磷酸酯类、有机硅类、聚醚类和聚醚改性聚硅氧烷类消泡剂中的一种或几种。
34.本发明的有益效果在于，本发明提供了氟可拉定的纳米胶束制剂以及该纳米胶束制剂的制备方法。由于本发明氟可拉定纳米胶束制剂中的胶束粒径在纳米级，且以无定型的形态存在，所以其具有生物利用度高的优点。与含有氟可拉定固体分散片的口服制剂相比，生物利用度提高了1.9倍，在动物体内的最大血药浓度提高了将近1.7倍。
附图说明
35.图1 表示本发明氟可拉定纳米胶束的扫描电镜图谱。
36.图2表示本发明氟可拉定纳米胶束溶液的粒径分布图。
37.图3表示本发明实施例2氟可拉定纳米胶束的冻干粉的x射线粉末衍射图谱。
38.图4 表示本发明实施例2氟可拉定固体纳米胶束冻干粉的示差扫描量热法图谱。
39.图5 表示氟可拉定纳米胶束口服液与氟可拉定固体分散片在比格犬体内的药时曲线图。
40.具体实施方式
41.除非另外说明，本文中的术语“纳米胶束”指的是当形成的氟可拉定制剂为液体状态下，包括冻干制剂在加入水的状态下，通过扫描电镜观测到氟可拉定及其聚合物辅料共同形成了外部亲水极性部分和内部疏水部分的缔合体，这种缔合体称为胶束，在扫描电镜观测下，有球形、层状和棒状，每种缔合体的直径或宽度在几十纳米到几百纳米之间。
42.除非另外说明，本文中的术语“固体制剂”既包括本发明中的纳米胶束冻干制剂也包括本发明中的纳米胶束液体制剂干燥后得到的固体制剂。
43.除非另外说明，本文中的术语“无定型态”指的是氟可拉定纳米胶束固体制剂，包括干燥后的液体制剂，通过使用cu-ka射线测量，x射线粉末衍射在2θ值为0-40
º
范围内显示为弥散峰，因此制剂中的氟可拉定为无定型形式存在。
44.除非另外说明，本文中的术语“聚乙烯己内酰胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物”购自巴斯夫(basf)，商品名称色鲁普（soluplus）。
45.除非另外说明，本文中的术语“共聚维酮va64”指的是n-乙烯-2-吡咯烷酮及乙酸
乙烯酯按照60：40的比例合成的水溶性共聚物。本文中的共聚维酮va64购自巴斯夫，商品名称为考利弗va 64（kollidonva 64）和考利弗va 64粉末（kollidon va 64 fine）。
46.除非另外说明，本文中的术语“聚乙二醇4000”指的是环氧乙烷和水缩聚而成的高分子聚合物，分子式以ho(ch2ch2o)nh表示,其中n代表氧乙烯基的平均数，在聚乙二醇4000中的n为4000左右。
47.除非另外说明，本文中的术语“羧甲基纤维素钠”购自亚什兰(ashland)，分子量为250000-720000。
48.除非另外说明，本文中的术语“聚乙烯吡咯烷酮k25”表示乙烯吡咯烷酮的聚合物，其中k值代表乙烯吡咯烷酮聚合物的平均分子量范围。k值实际上是与pvp水溶液相对黏度有关的特征值，而黏度又是与高聚物分子量有关的物理量，因此可以用k值表征pvp的平均分子量。通常k值越大，其黏度越大，粘结性越强。本文中的聚乙烯吡咯烷酮k25购自亚什兰(ashland)，商品名称为普兰斯通k25 (plasdone pvp k25)。
49.除非另外说明，本文中的术语“聚乙烯吡咯烷酮k30”的定义参照聚乙烯吡咯烷酮k25，。本文中的聚乙烯吡咯烷酮k30购自购自亚什兰(ashland)，商品名称为普兰斯通k30 (plasdone pvp k30)。
50.除非另外说明，本文中的术语“聚乙烯吡咯烷酮k90”的定义参照聚乙烯吡咯烷酮k25。本文中的聚乙烯吡咯烷酮k90购自亚什兰(ashland)，商品名称为普兰斯通k90 (plasdone pvp k90)。
51.除非另外说明，本文中的术语“泊洛沙姆188”也称为普朗尼克f68，指的是聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧乙烯组成的peo-ppo-peo三嵌段共聚物，其中氧乙烯单元为75-85%，氧丙烯单元为25-30%。平均分子量为7680-9510。商品名称为考利弗p188(kolliphor p188)。
52.除非另外说明，本文中的术语“泊洛沙姆407”由约70%的乙烯氧化物和30%的丙烯氧化物组成，平均分子量为9840-14600。商品名称为考利弗p407(kolliphor p407)。
53.除非另外说明，本文中的术语“生育酚聚乙二醇琥珀酸酯和2-羟乙基12-羟基-18酸酯”简称tpgs，cas号为：9002-96-4。商品名称为考利弗tpgs (kolliphor tpgs)。
54.除非另外说明，本文中的术语“聚乙二醇-15羟硬脂酸酯”英文名称为“solutol hs 15”，cas号为：70142-34-6。
55.除非另外说明，本文中的术语“矫味剂”指的是在药品中用以改善或屏蔽药物不良气味和味道，使服药者难以觉察药物的强烈苦味(或其它异味如辛辣、刺激等等)的药用辅料。
56.除非另外说明，本文中的术语“甜味剂”指的是赋予本发明制剂甜味口感的药品添加剂。
57.除非另外说明，本文中的术语“芳香剂”指的是赋予本发明制剂嗅觉气味的药品添加剂。
58.除非另外说明，本文中的术语“西甲硅油”购自广州标美药用辅料有限公司，cas号 8050-81-5，在本发明中作消泡剂使用。
59.除非另外说明，本文中的术语“司盘85”，又称为“山梨醇酐三油酸酯”，购自西安晋湘药辅有限公司，商品号18091874298，在本发明中作消泡剂使用。
60.除非另外说明，本文中的术语“冻干辅料”也称为冻干支撑剂或冻干赋形剂，指的
是在药品冻干时后，维持制剂的状态和稳定性及良好复溶性的辅料。
61.除非另外说明，本文中的术语“auc
last”表示从给药时间开始到最后一个点的这段时间的血药浓度曲线与时间轴包围的面积。“auc
last”又常称为“药物暴露量”。
62.除非另外说明，本文中的术语“auc
inf”表示从0到无穷大时间血药浓度曲线与时间轴包围的面积。
63.实施例1氟可拉定纳米胶束口服液的制备将氟可拉定原料2.4g溶解于120ml的0.2mol/l的氢氧化钠水溶液中，并将聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物4.8g和4.8g泊洛沙姆407溶解于480ml的0.05mol/l的盐酸水溶液中。在1000转/分钟高速搅拌下，通过蠕动泵将混合有氟可拉定的氢氧化钠溶液加入到聚合物的盐酸水溶液中，然后继续搅拌20分钟。接着在10000 转/分钟的转速下离心20分钟，去除沉淀，上清液即为氟可拉定胶束溶液。氟可拉定的浓度为3.6mg/ml。将所得溶液在超滤杯内采用再生纤维素过滤膜（100kda）进行超滤，能够得到更高浓度的氟可拉定胶束溶液，氟可拉定的浓度30mg/ml。
64.将得到的氟可拉定混合溶液放在透明测试瓶中，将一束光透过溶液中，从垂直入射光方向可以观察到溶液出现一条光亮的“通路”，因此氟可拉定混合溶液出现了丁达尔效应，形成了氟可拉定的混合胶束溶液。
65.将氟可拉定胶束溶液进行电镜检测（10kv，扫描电镜），得到图1所示电镜下图谱，从图1与标尺的对照，可以看出，氟可拉定胶束颗粒的粒径分布是纳米级别，粒径在200纳米以内。
66.将实施例1得到的胶束溶液，采用动态光散射激光粒度仪（马尔文master size nano zs），得到图2的粒径分布图。通过图2的粒径分布曲线可见，氟可拉定胶束呈单分散体系，平均粒径为80nm左右。
67.实施例2氟可拉定胶束浓缩液的制备将氟可拉定原料2g溶解于140 ml的丙酮中，并将聚乙二醇15羟硬脂酸酯20.0 g和5.0 g生育酚聚乙二醇琥珀酸酯溶解于500 ml纯化水中。通过蠕动泵在1000转/分钟高速搅拌下，将溶解有氟可拉定的丙酮溶液滴加到聚乙二醇15羟硬脂酸酯和生育酚聚乙二醇琥珀酸酯的溶液中，滴加完成后然后继续搅拌20分钟。随后将反应液置于通风处内在200 转/分钟搅拌下挥发反应液内的丙酮36小时以上至丙酮挥发完全，剩余溶液在20℃，12000转/分钟条件下离心20分钟，去除沉淀，上清液即为氟可拉定胶束溶液。氟可拉定的浓度为6 mg/ml。采用再生纤维素过滤膜（100 kda）进行膜过滤浓缩，能够得到12 mg/ml的氟可拉定胶束浓缩溶液。
68.实施例3氟可拉定胶束浓缩液的制备将1.0 g氟可拉定溶解于70 ml丙酮中，并将20.0 g 聚乙二醇15羟硬脂酸酯和0.25 g十二烷基硫酸钠溶解于200 ml纯化水中。在1000转/分钟高速搅拌下，通过蠕动泵将溶解有氟可拉定的丙酮溶液滴加到聚乙二醇15羟硬脂酸酯和十二烷基硫酸钠的溶液中，滴加完成后然后继续搅拌10分钟。随后将反应液置于通风处内在300 转/分钟搅拌下挥发反应液内
的丙酮24小时以上至丙酮挥发完全，剩余溶液在20℃，12000转/分钟条件下离心20分钟，去除沉淀，上清即为氟可拉定胶束溶液。氟可拉定的浓度为5 mg/ml。采用再生纤维素过滤膜（100kda）进行膜过滤浓缩，能够得到45 mg/ml的氟可拉定胶束溶液。
69.实施例4氟可拉定胶束浓缩液的制备将氟可拉定原料1.2 g溶解于60 ml的0.2 mol/l的氢氧化钠水溶液中，并将2.4 g生育酚聚乙二醇琥珀酸酯和1.2 g泊洛沙姆188溶解于240 ml的0.05 mol/l的盐酸水溶液中。在1000转/分钟高速搅拌下，通过蠕动泵将混合有氟可拉定的氢氧化钠溶液加入到聚合物的盐酸水溶液中，然后继续搅拌20分钟。接着在10000转/分钟转速下离心20分钟，去除沉淀，上清即为氟可拉定胶束溶液。氟可拉定的浓度为3.8 mg/ml。将所得溶液在超滤杯内采用再生纤维素过滤膜（100 kda）进行超滤，得到更高浓度的氟可拉定胶束溶液，氟可拉定的浓度20 mg/ml。
70.实施例5氟可拉定胶束浓缩液的制备将氟可拉定原料2.4 g溶解于60 ml的0.4 mol/l的氢氧化钠水溶液中，并将9.6 g共聚维酮va64溶解于240 ml的0.1 mol/l的盐酸水溶液中。在1000转/分钟高速搅拌下，通过蠕动泵将混合有氟可拉定的氢氧化钠溶液加入到聚合物的盐酸水溶液中，然后继续搅拌20分钟。接着在5000转/分钟转速下离心20分钟，去除沉淀，上清即为氟可拉定胶束溶液。氟可拉定的浓度为7.8 mg/ml。将所得溶液在超滤杯内采用聚苯醚砜过滤膜（100 kda）进行超滤，得到更高浓度的氟可拉定胶束溶液，氟可拉定的浓度28 mg/ml。
71.实施例6氟可拉定胶束口服液的制备按照实施例1~3的方法制备得到氟可拉定胶束浓溶液。按照处方组成加入其它组分，如下表所示：处方组成处方1处方2处方3氟可拉定胶束浓缩液30mg/ml12mg/ml45mg/ml西甲硅油0.20g//草莓味香精/0.40g0.40g香草味香精0.80g/0.80g三氯蔗糖0.30g0.10g0.45g尼泊金甲酯0.45g0.45g0.45g磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液ph=6.8ph=6.8ph=6.8总体积400ml400ml400ml在不断搅拌下，向实施例1~3溶液中参照处方用量及比例，依次加入消泡剂西甲硅油、草莓味香精、香草味香精、三氯蔗糖、尼泊金甲酯。然后用磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液调ph至6.8，充分搅拌均匀，经过滤，将制备的溶液装入琥珀色玻璃瓶中，进行封闭保存。
[0072] 实施例7氟可拉定胶束口服液的制备
ꢀ
按照实施例4~5的方法制备得到氟可拉定胶束浓溶液。按照处方组成加入其它组分，如下表所示：处方组成处方4处方5氟可拉定胶束浓缩液20mg/ml28mg/ml西甲硅油0.10g/司盘85/0.20g草莓味香精0.40g/香草味香精0.40g0.80g三氯蔗糖0.20g0.30g尼泊金甲酯0.45g0.30g尼泊金丙酯/0.20g磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液ph=6.0ph=6.0总体积400ml400ml在不断搅拌下，向实施例1-3溶液中参照处方用量及比例，依次加入消泡剂西甲硅油、司盘85、草莓味香精、香草味香精、三氯蔗糖、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯。然后用磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液调ph至6.0，充分搅拌均匀。
[0073]
经过滤，将制备的溶液装入琥珀色玻璃瓶中，进行封闭保存。
[0074]
实施例8实施例2的浓缩胶束溶液加入氟可拉定和蔗糖总重量5%蔗糖，混合搅拌均匀，将胶束溶液分装。置于10 ml玻璃瓶内（3 ml/瓶），冻干48 h，形成氟可拉定纳米胶束的冻干粉。将该冻干粉进行xrpd衍射图谱鉴定，得到附图3所示的图谱。通过附图3可见，x射线粉末衍射图谱上出现弥散峰。再次进行示差扫描热分析检测，附图4表示本实施例的氟可拉定纳米胶束的冻干粉和氟可拉定无水晶型的示差扫描量热法分析曲线分别为曲线b和曲线a，曲线b为一条平坦的曲线，在38-388℃整个温度区间内没有发生热量的变化，曲线a是氟可拉定无水晶型的曲线，在大约260度出现明显的熔融吸热峰，由此可见，通过本实施例方法，得到的氟可拉定固体纳米胶束的冻干粉中不再含有氟可拉定的晶体，而是氟可拉定的无定型态。
[0075]
实施例9 氟可拉定冻干片的制备按照实施例1的方法制备得到氟可拉定胶束浓溶液。按照处方组成加入其它组分，如下表所示：处方组成处方氟可拉定胶束浓缩液3ml，20mg/ml西甲硅油0.03g香草味香精0.15g甜菊糖苷0.03g蔗糖0.1g磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液ph=6.8向氟可拉定胶束浓溶液中按照处方量依次加入西甲硅油、香精、甜菊糖苷、蔗糖，搅拌均匀，加入磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液调ph至6.8。
[0076]
将溶液灌装至双铝包装模具中，转移至冻干设备进行冻干，制备得到冻干片。
[0077]
比较例氟可拉定软胶囊的制备将纯度在97%以上的氟可拉定无水晶型研磨过170目筛，其中氟可拉定原料的制备参见201710565804.x的描述。经检测磨细的氟可拉定粒度小于90μm；将0.4g蜂蜡、15g玉米油加热到70℃溶解混合均匀；将氟可拉定加入到玉米油和蜂蜡的溶液中，得到的油溶物加入软胶囊中，制成氟可拉定油溶性软胶囊，每粒氟可拉定软胶囊含有氟可拉定的质量为100 mg。
[0078]
实施例10比格犬体内药代动力学实验雄性比格犬（年龄2-3岁，体重大约8-10kg）购自北京玛斯生物技术有限公司（beijing marshall biotechnology co. ltd.）。比格犬安置在23
±
2℃和55
±
10%湿度下的房间内，在白天/夜晚间隔周期12 h，并且允许自由进食和水。给药前禁食24小时。向比格犬给予实施例1中的氟可拉定纳米胶束口服液和比较例中的氟可拉定软胶囊，给药剂量均为20mg氟可拉定/kg体重。分别在0、0.167、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时从外周静脉采集血液样品，接着在4000转/分钟离心速度下，在2-8℃离心10分钟得到血浆。接着将血浆转移到-75
±
15℃进行存储。氟可拉定纳米胶束口服液为组1，氟可拉定软胶囊为组2。
[0079]
为了评价组1相对于组2是否更能够提高氟可拉定的口服生物利用度。由于比格犬体内的药代参数与老鼠体内不同，但与人体的相对接近，所以在比格犬体内进行药代动力学研究。四只比格犬用于组1的研究；六只比格犬用于组2的研究。药代动力学参数和比较值列于表1中。整个实验过程中的血药浓度曲线显示在图5。口服给药之后，组1在空腹状态，氟可拉定最大浓度c
max
是595
±
350ng/ml，它高于组2浓度的9.5倍（p＜0.05）；组1的auc
last
是3592
±
2267小时*ng/ ml，大于组2的浓度的14.9倍（p＜0.05）。这些结果显示了组1的纳米胶束制剂形态能够显著提高氟可拉定的吸收度。这是由于组1氟可拉定的溶解度渗透性都高于组2，因此导致了氟可拉定最大浓度c
max
和auc
last
都有显著提高。
[0080]
向比格犬口服给药组1和组2后的药代动力学参数。
[0081]
表1pk参数
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
组1（n=4）
ꢀꢀ
组2（n=6）t
max
（小时） 1.25
±
0.501.42
±
0.66c
max
（ng/ml） 595
±
35062.7
±
14.3 t
半衰期
（小时） na2.04
±
0.32auc
last
（hr*ng/ml） 3592
±
2267241
±
283auc
inf
（hr*ng/ml） na245
±
293 na:无法报告数值。