用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒的制作方法

1.本实用新型涉及一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，特别涉及一种结合sers技术可实现抗菌过程中不同的细菌体内发生类酶催化后的单分子水平上结构物质改变动态过程的实时监测的纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，属于生物学技术领域。


背景技术：

2.细菌感染对人类健康的威胁日益严重，由于过度使用抗生素导致的多重耐药性细菌的出现，已成为生物医学领域的一大挑战，而具有类过氧化物酶性质的纳米酶如金纳米粒子和金属有机骨架等作为有效的抗菌剂已显示出巨大的潜力，它们可以将h2o2转化为羟基自由基(
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oh)对细菌产生毒害作用，不仅具有比h2o2更高的抑菌活性，而且避免了更高浓度的h2o2的毒性。而在此基础上提供一种能实时监控抗菌过程，实时呈现抗菌过程中细菌体内结构物质变化的检测方法就显得极有研究意义，而表面增强拉曼散射(sers)光谱作为一种稳定的高灵敏度，甚至单分子特性的有效测试分析工具，在生命科学、生物医学等领域中有着广泛的应用前景。


技术实现要素：

3.本实用新型的主要目的在于提供一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，以克服现有技术中的不足。
4.为实现前述实用新型目的，本实用新型采用的技术方案包括：
5.本发明实施例提供了一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，包括试剂盒主体以及放置仓、孵育仓和细菌固定培养基，所述试剂盒主体内部具有一恒温腔室，所述放置仓和孵育仓设置在所述恒温腔室内，所述细菌固定培养基设置在所述孵育仓内，且所述放置仓还与孵育仓相连接，以使所述放置仓内的孵育物质能够被输送至位于孵育仓内的细菌固定培养基上。
6.与现有技术相比，本实用新型提供的一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，可选择不同的孵育抗菌体系并且呈现不同抗菌体系的孵育结果，同时可以结合sers手段得到抗菌过程中细菌体内结构物质发生改变的动态检测结果，并保持时间上同步性，确保检测结果的可信性，并在最初的材料上预防了染菌的潜在威胁和温度对实验结果的影响。
附图说明
7.为了更清楚地说明本技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
8.图1是本发明一典型实施案例中提供的一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒的俯视结构图；
9.图2是本发明一典型实施案例中提供的一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒中的部分结构示意图。
具体实施方式
10.鉴于现有技术中的不足，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本实用新型的技术方案。如下将对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明。
11.本发明实施例提供了一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，包括试剂盒主体以及放置仓、孵育仓和细菌固定培养基，所述试剂盒主体内部具有一恒温腔室，所述放置仓和孵育仓设置在所述恒温腔室内，所述细菌固定培养基设置在所述孵育仓内，且所述放置仓还与孵育仓相连接，以使所述放置仓内的孵育物质能够被输送至位于孵育仓内的细菌固定培养基上。
12.在一具体实施方案中，所述放置仓经一输送导管与孵育仓相连接，所述放置仓内孵育物质能够沿所述输送导管被输送至位于孵育仓内的细菌固定培养基上。
13.在一具体实施方案中，所述输送导管的出料口设置在所述孵育仓内部，且所述输送导管的出料口对应设置在所述细菌固定培养基的上方。
14.在一具体实施方案中，所述输送导管上还设置有可打开关闭所述输送导管的开关阀。
15.在一具体实施方案中，所述开关阀为可旋转式开关阀。
16.在一具体实施方案中，所述的试剂盒包括多个放置仓，所述多个放置仓分别与所述孵育仓连接，位于该多个放置仓内的孵育物质能够分别被独立的输送至位于孵育仓内的细菌固定培养基上。
17.在一具体实施方案中，该多个放置仓环绕分布一孵育仓的四周。
18.在一具体实施方案中，所述恒温腔室内具有多个收容空间，该多个放置仓分别对应设置在该多个收容空间内。
19.在一具体实施方案中，所述试剂盒主体包括盒体和盖体，所述盒体内设置有多个收容空间，所述盖体可打开盖合在所述盒体上，并与所述盒体围合形成所述的恒温腔室。
20.在一具体实施方案中，所述盒体的内侧设置有保温层。
21.如下将结合附图以及具体实施案例对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明，除非特别说明的之外，本实用新型实施案例中试剂盒主体以及放置仓、孵育仓的材质均可以采用本领域技术人员已知的，其具体尺寸等可以根据具体场景进行调整，在此不做具体的限定，其中的细菌固定培养基可以采用现有的培养基。
22.请参阅图1和图2，一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，包括试剂盒主体以及多个放置仓2、4、6、8、一个孵育仓7和细菌固定培养基，所述试剂盒主体包括盒体1和盖体，所述盒体1内设置有多个彼此连通的收容空间，所述盖体可打开盖合在所述盒体1上，并与所述盒体1围合形成一具有多个收容空间的恒温腔室，该多个放置仓2、4、6、8和一个孵育仓7均设置在所述恒温腔室内，所述细菌固定培养基设置在所述孵育仓1内，该多个放置仓2、4、6、8还与所述孵育仓7相连接，以使该多个放置仓2、4、6、8内的孵育物质能够分
别独立地被输送至位于孵育仓7内的细菌固定培养基上。
23.在本实施案例中，该多个放置仓2、4、6、8环绕分布在所述孵育仓7的四周，该多个放置仓2、4、6、8分别独立地与所述孵育仓7相连接，且该多个放置仓2、4、6、8与所述孵育仓7的连接方式和连接结构可以是相同的，如下以其中一个放置仓与孵育仓的连接为例：
24.该请再次参阅图2，所述放置仓8经一输送导管3与孵育仓7相连接，所述放置仓8内孵育物质能够沿所述输送导管3被输送至位于孵育仓7内的细菌固定培养基上。
25.在本实施案例中，所述输送导管3的出料口设置在所述孵育仓7内部，且所述输送导管3的出料口对应设置在所述细菌固定培养基的上方，以使经所述输送导管3输送至孵育仓7内的孵育物质能够自流入所述细菌固定培养基内。
26.在本实施案例中，所述输送导管3上还设置有可打开关闭所述输送导管3的开关阀5，在所述开关阀5打开后，多个放置仓2、4、6、8中孵育物质注入到孵育仓7中的细菌固体培养基上，产生更好的孵育效果，需要说明的是，所述开关阀5为可旋转式开关阀，可以理解的，所述开关阀当然还可以采用其他方式打开关闭所述输送导管3，当然所述开关阀5为无菌的聚苯乙烯(ps)塑料制品；还需要说明的是，输送导管3装有旋转式的开关阀5，每一开关阀控制各自放置仓和孵育仓之间输送导管的贯通，且是各自独立的，可随时掌控放置仓中的孵育物质是否要注入到孵育仓中，且由于各自控制阀的独立性，在同一试剂盒中可以有多种孵育体系的选择。
27.在本实施案例中，四个放置仓2、4、6、8中可以分别装有纳米酶溶液、菌液、过氧化氢和无菌水。
28.在本实施案例中，四个放置仓2、4、6、8、输送导管3以及孵育仓7均可以是聚苯乙烯(ps)塑料制品。
29.在本实施案例中，请再次参阅图1，所述盒体1和盖体自身可以具有保温结构，从而使所述盒体1和盖体围合形成的空间具有保温效果，当然，可以如图1中示出的，在所述盒体1的内侧设置有保温层9，保温层9可保持试剂盒内温度的恒定，保持抗菌孵育过程中温度的恒定，避免了温度对孵育实验所带来的影响；可以理解的，也可以在所述盖体的内侧设置保温层，所述保温层9可以是固定设置在所述盒体1的内壁上的，当然，所述保温层也可以是不直接贴合在盒体内壁上的保温板等保温结构，该保温层的材质和尺寸等可以根据具体的需求进行调整，其可以通过市购获得。
30.在本实施案例中，所述盖体可以通过铰接的方式与所述盒体连接，可以理解的，所述盖体当然还可以采用其他连接实现与盒体连接并实现与盒体的可打开配合。
31.本实用新型实施例提供的一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒的使用方法可以包括：
32.在放置仓2中放置配置好的2mg/ml的有着类过氧化物酶性质的纳米酶：金属有机骨架(mof)作为抗菌实验中的催化剂，在放置仓4中放置培养且稀释好的大肠杆菌菌液，作为抗菌实验中的催化对象，在放置仓6中放置稀释完好的过氧化氢溶液(10-3mol/l)，以具有类过氧化物酶活性的mof催化过氧化氢产生羟基自由基以氧化大肠杆菌，并起到破坏细菌体内单分子结构物质的效果；最后于放置仓8中加入无菌蒸馏水，以作配平溶液之用。
33.如图2所示，控制如输送管道3上的开关阀5来控制各个放置仓中的孵育物质流入到孵育仓7中进行不同体系的孵育实验：
34.首先打开与放置仓4和放置仓8对应的开关阀，以获得800ul菌液 200ul无菌水的孵育体系一，可作为纳米酶杀菌效果和后序sers检测的空白对照；
35.而后打开放置仓4、6、8对应的开关阀，并获得800ul菌液 100ul的h2o2(10-3m) 100ul无菌水的孵育体系，获得浓度为10-4mol/ml的过氧化氢本身是否会对大肠肝菌产生灭杀作用的对照；
36.接着打开放置仓2、4、8对应的开关阀就可获得800ul菌液 100ul的纳米酶(2mg/m1) 100ul无菌水的孵育体系三，可作为纳米酶本身是否会对大肠杆菌产生灭杀作用的佐证，以此来证明纳米酶本身是否具有生物相容性；
37.最后打开放置仓2、4、6对应的开关阀而获得800ul菌液 100ul的纳米酶(2mg/ml) 100ul的h2o2(10-3m)的孵育催化抗菌体系四，孵育体系四可作为类过氧化物酶催化低浓度h2o2(10-4m)产生羟基自由基催化抗菌的证明。
38.由于多个开关阀之间具有的独立性，导致这四种孵育体系可分别在同一个本实用新型提供的试剂盒中实现，也可在四个本本实用新型提供的试剂盒中同时得到。
39.在本实施案例中，上述四种体系在本实用新型提供的试剂盒中孵育30min后进行sers检测，所用的sers激发光为532nm，在sers测试中首先通过体系一获得大肠杆菌自身本体的sers图谱作为对照参考，再通过体系二获得当单独存在低浓度的过氧化氢(10-4mol/l)和大肠孵育30min时的sers图谱，接着通过体系三获得纳米酶对大肠杆菌的sers增强的拉曼光谱，最后通过体系四获得在类过氧化物酶纳米酶催化过氧化氢(10-4mol/l)来氧化大肠杆菌30min后的sers光谱，通过sers图谱的对照分析，看相比于大肠杆菌自身的sers光谱后者孵育之后得到的sers具体发生了哪些变化以此来分析抗菌过程中细菌体内的哪些单分子结构物质发生了变化。
40.本实用新型提供的一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，可以结合sers技术实现抗菌过程中不同的细菌体内发生类酶催化后的单分子水平上结构物质改变动态过程的实时监测的纳米酶表面增强拉曼抗菌检测，在生物检测技术领域有着潜在的应用前景。
41.本实用新型提供的一种用于纳米酶表面增强拉曼抗菌检测的试剂盒，可选择不同的孵育抗菌体系并且呈现不同抗菌体系的孵育结果，同时可以结合sers手段得到抗菌过程中细菌体内结构物质发生改变的动态检测结果，并保持时间上同步性，确保检测结果的可信性，并在最初的材料上预防了染菌的潜在威胁和温度对实验结果的影响。
42.应当理解，上述实施例仅为说明本实用新型的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本实用新型的内容并据以实施，并不能以此限制本实用新型的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本实用新型的保护范围之内。