18的制作方法

18
f放射性标记的生物分子
技术领域
1.本发明涉及制备可用于对生物分子进行放射性标记的化合物的方法以及制备这样的放射性标记的生物分子的方法。本公开还提供了放射性标记的生物分子的前体和相应的放射性标记的生物分子。这些化合物可以有效地保留来自细胞内内化的生物分子的放射性，使这样的化合物可用于诊断疾病，尤其是癌症。


背景技术：

2.许多单克隆抗体(mab)、mab片段和肽已用不同的放射性核素标记，并然后用于癌症的检测和治疗。许多临床上最相关的分子靶标(诸如her2、表皮生长因子受体(egfr)和肿瘤特异性突变体egfrviii)迅速内化到肿瘤细胞中。从标记的角度来看，这是一个主要问题，因为当放射性标记的生物分子与肿瘤相关受体或抗原结合时，它们被转运到细胞中，被内体/溶酶体吸收，在那里它们迅速降解。困难在于这些放射性降解产物然后可以迅速从肿瘤细胞中逸出。结果，肿瘤细胞内不再存在足够的放射性以允许对肿瘤成像或治疗。
3.例如，考虑用放射性碘标记与egfrviii反应的mab，其中使用的标准标记方法是直接亲电取代。在这样的情况下，由于广泛内化，在受体结合和随后的蛋白水解降解之后，保留在肿瘤内的放射性很低。这是由于主要分解代谢物碘酪氨酸的快速冲刷。为了规避这个问题，已经开发了“残留剂(residualizing agent)”，其试图在标记的mab被内化后捕获肿瘤细胞内的放射性。放射性碘的这样的残留剂包括4-胍基甲基-3-碘苯甲酸n-琥珀酰亚胺酯(sgmib)；n
ε-(3-碘苯甲酰基)-lys
5-n
α-马来酰亚胺基-gly
1-geeek，其中e和k分别代表d-谷氨酸和d-赖氨酸的残基，也称为n
2-(2-(2,5-二氧亚基-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙酰基)-d-谷氨酰-d-谷氨酰-d-谷氨酰-n
′‑
(3-碘苯甲酰基)-d-赖氨酸或ib-malgeeek；以及2,2
′
,2
″‑
(10-(2-((6-(3-(((n-琥珀酰亚胺基)氧基)羰基)-5-碘苯甲酰胺基)己基)氨基)-2-氧乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸(sib-dota)。与直接标记的生物分子相比，当相同的生物分子用这些残留辅基之一标记时，已经看到肿瘤中保留的放射性的相当大的增强。
4.作为最先进的成像技术的正电子发射断层显像(pet)是非常灵敏的并且具有出色的定量能力。全世界最广泛使用的正电子发射放射性核素是氟18，其具有的半衰期为110min。为了将这种成像技术的优势与内化分子的靶向特性相结合，有必要开发残留剂，利用其可以用氟18标记这些生物分子。此外，需要用于制备这样的标记的生物分子的另外有效的方法。


技术实现要素：

5.本发明涉及用放射性卤素原子，特别是用
18
f对生物分子(也称为大分子)进行放射性标记的方法、化合物和组合物。有利地，在体内施用后，这样的方法、化合物和组合物使由于体内脱卤引起的放射性卤素
18
f的损失最小化，保持生物分子的生物活性，使在患病细胞(诸如癌细胞)中的保留最大化，并且使正常组织中的放射性保留最小化。生物分子对特定
类型的细胞具有亲和力。也就是说，生物分子可以特异性结合特定细胞，诸如癌细胞。本发明的组合物包括放射性标记的生物分子。这样的生物分子包括抗体、单克隆抗体、抗体片段、肽、其他蛋白质、纳米颗粒和适配体。用于本发明目的的生物分子的这样的实例包括双抗体、scfv片段、darpins、基于纤维粘连蛋白iii型的支架、亲和体(affibody)、vhh分子(也称为单域抗体片段(sdab)和纳米抗体)、核酸或蛋白质适配体以及纳米颗粒。此外，在本文公开的方法中可以使用更大的分子，诸如》50kda的蛋白质，包括抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和f(ab’)2片段。此外，在本文公开的方法中可以使用大小小于50nm的纳米颗粒。在一些实施方式中，本文公开的原理与vhh分子和其他类型的小蛋白构建体特别相关，如本文将更彻底地描述的。
6.本发明的方法利用对放射性标记有效的辅化合物(prosthetic compound)。因此，本公开提供了这样的放射性标记化合物以及提供这样的辅化合物的前体。本公开进一步提供了包括这样的化合物/自由基和一种或多种大分子的放射性标记的大分子(例如，生物分子)。在一些这样的实施方式中，这些放射性标记的大分子是靶向放射治疗剂。本发明的辅化合物和放射性标记的化合物可用于例如诊断疾病。
7.一方面，本公开提供了一种制备
18
f标记的生物分子的方法，包括：提供包括亲双烯体的官能化生物分子；提供包括二烯的含18f的试剂；以及使所述官能化生物分子与所述含
18
f的试剂通过逆电子需求第尔斯-阿尔德环加成反应进行反应，以提供所述
18
f标记的生物分子。试剂和所得
18
f标记的生物分子可以变化。在上述方法的一种特定的非限制性实施方式中，含
18
f的试剂包括6-[
18
f]氟烟酰基-peg
4-甲基四嗪。在一种特定的非限制性实施方式中，官能化生物分子包括用tco-gk-peg
4-nhs衍生的生物分子。在一种特定实施方式中，前述方法可用于提供下式的
18
f标记的生物分子：[
18
f]fn-peg
4-tz-tco-gk-peg
4-生物分子，例如包括但不限于[
18
f]fn-peg
4-tz-tco-gk-peg
4-5f7。
[0008]
在本公开的另一方面，提供了一种制备
18
f标记的生物分子的方法，包括：提供包括二烯的官能化生物分子；提供包括亲双烯体的含
18
f的试剂；使所述官能化生物分子与所述含
18
f的试剂通过逆电子需求第尔斯-阿尔德环加成反应进行反应，以提供所述
18
f标记的生物分子。同样，与这样的方法相关的试剂和所得
18
f标记的生物分子可以变化。在上面刚刚提及的方法的一种特定的非限制性实施方式中，含
18
f的试剂包括6-[
18
f]氟烟酰基-peg
4-gk-tco。在一种特定的非限制性实施方式中，官能化生物分子包括用
–
mal-peg
4-tz衍生的生物分子。在一种特定实施方式中，前述方法可用于提供下式的
18
f标记的生物分子：[
18
f]fn-peg
4-gk-tco-tz-peg
4-mal-生物分子，例如包括但不限于[
18
f]fn-peg
4-gk-tco-tz-peg
4-mal5f7ggc。
[0009]
在上述方法的一些实施方式中，含
18
f的试剂包括[
18
f]氟烟酰基(fn)基团。亲双烯体官能团可以变化。在一些实施方式中，亲双烯体包括辛烯部分。例如，一种合适的亲双烯体包括反式环辛烯(tco)部分。同样，二烯官能团可以变化。在一些实施方式中，二烯包括四嗪(tz)部分。适用于ieddar的合适的二烯和亲双烯体的各种其他实例将被本领域技术人员理解。在一些实施方式中，含
18
f的试剂和/或官能化生物分子可以进一步包括接头。这样的接头可以包括例如peg和/或肾刷状缘酶可切割接头。
[0010]
本公开进一步提供了某些
18
f标记的生物分子，包括与选自[
18
f]fn-peg
4-tz-tco-gk-peg
4-和[
18
f]fn-peg
4-gk-tco-tz-peg
4-mal-的
18
f标记的残留剂缀合的生物分子，这样
mal-5f7ggc后获得的一系列最大密度投影(mip)图像：
[0021]
图3是用于合成[
18
f]rl-iii-2rs15d的示例性反应方案；
[0022]
图4a是在具有bt474m1brm3-fluc颅内异种移植物的小鼠中施用[
18
f]rl-iii-5f7后2小时获得的micropet/ct图像；
[0023]
图4b是图2a中小鼠的脑切片，用h&e染色；
[0024]
图4c是小鼠相邻切片的放射自显影图像(其中图4b和图4c中的图像大小不相同)；
[0025]
图5a是sgmib的结构；以及
[0026]
图5b是用于合成[
18
f]tfpfgmb的示例性反应方案。
具体实施方式
[0027]
本公开一般地提供了某些用于生物分子的
18
f标记的方法，以及由此提供的某些前体和产物。所公开的方法主要集中于某些
18
f标记的残留剂和某些示例性标记的生物分子的制备；然而，这样的方法在某些情况下具有更广泛的适用性，例如，如zalutsky et al.的美国专利号9,839,704或zalutsky et al.的国际专利申请公开号wo2018/178936(其通过援引整体并入本文)中公开的其他标记的生物分子的制备。本公开进一步提供了某些
18
f标记的残留剂和某些
18
f标记的生物分子，以及包括其的组合物，以及使用这样的标记的生物分子和/或组合物用于成像目的的方法。
[0028]
某些缩写在本技术通篇中使用，并且按照本领域公认的方式使用；为方便起见，它们的定义如下。
[0029]
2rs15d：一种纳米抗体，如例如vaneycken i,et al(2011)preclinical screening of anti-her2 nanobodies for molecular imaging of breast cancer.faseb j 25:2433
–
2446中所述，其通过援引整体并入本文。
[0030]
5f7：一种纳米抗体，如例如m.pruszynski et al.,nuclear medicine and biology 40(2013)52
–
59中所述；
[0031]
5f7-gcc：一种在其c末端包含半胱氨酸的5f7纳米抗体变体，如例如m.pruszynski et al./nuclear medicine and biology 40(2013)52
–
59中所述。
[0032]
boc：叔丁氧基羰基保护基团
[0033]
dma：二甲基乙酰胺
[0034]
fn：氟烟酰基
[0035]
gk：甘氨酸赖氨酸
[0036]
her-2：人表皮生长因子受体2蛋白
[0037]
hplc：高效液相色谱
[0038]
ieddar：逆电子需求第尔斯-阿尔德环加成反应
[0039]
异-[
131
i]sgmib：3-胍基甲基-5-[
131
i]碘苯甲酸n-琥珀酰亚胺酯
[0040]
mal：马来酰亚胺基
[0041]
peg：聚(乙二醇)
[0042]
rbbe：肾刷状缘酶
[0043]
rcy:放射化学产率
[0044]
sdabs：单域抗体片段
[0045]
[*i]sgmib：4-胍基甲基-3-[*i]碘苯甲酸n-琥珀酰亚胺酯
[0046]
tco：含反式环辛烯的部分
[0047]
tfa：三氟乙酸
[0048]
tfp：四氟苯基
[0049]
tz：含四嗪的部分(包括但不限于四嗪、3-甲基-6-苯基-1,2,4,5-四嗪和另外的衍生物)。
[0050]
vhh：仅重链抗体(又名sdab，纳米抗体)的可变结构域。
[0051]
根据本公开的一种实施方式，提供了一种
18
f标记的方法，该方法可以特别用于标记sdab和其他类型的小蛋白构建体的情况。该方法涉及逆电子需求第尔斯-阿尔德环加成反应(ieddar)。这样的方法涉及以下步骤：a)提供含
18
f的试剂；以及b)使用ieddar使含
18
f的试剂与官能化生物分子(例如sdab或其他小蛋白构建体)偶联，以提供
18
f标记的生物分子。
[0052]
所公开的方法可以提供非位点特异性标记或位点特异性标记。有利地，这样的方法可以允许高产物产率以及保留亲和力和/或免疫反应性。一般地，除了
18
f部分之外，含
18
f的试剂还包括适用于ieddar的部分(即，二烯或亲双烯体官能团)。类似地，除了生物分子之外，官能化生物分子包括适用于ieddar的互补部分，使得当
18
f部分包括二烯时，官能化生物分子包括亲双烯体，以及当
18
f部分包括亲双烯体时，官能化生物分子包括二烯。在一些实施方式中，这样的试剂的选择和/或制备可以提供生物分子的位点特异性或非位点特异性标记。
[0053]
在一种实施方式中，除了标记物(
18
f)之外，含
18
f的试剂(其被提供然后偶联到官能化生物分子上)还包括适用于上述步骤b)的ieddar的二烯。一种示例性二烯是含四嗪的部分，其可以有利地包括在含
18
f的试剂中。有利地，在一些这样的实施方式中，含
18
f的试剂包括氟烟酰基部分，其中氟烟酰基部分包括
18
f。各种其他官能团可以存在于含
18
f的试剂内，只要这样的其他官能团不会负面干扰期望的ieddar即可。例如，含
18
f的试剂可以进一步包括不同长度的接头(例如，peg)。可以有效地用于所公开的方法中的一种特定的示例性的含
18
f(二烯)的试剂是6-[
18
f]氟烟酰基-peg
4-甲基四嗪。
[0054]
当含
18
f的试剂包括适用于步骤b)的ieddar的二烯时，该方法中使用的官能化生物分子包括亲双烯体。适用于本文公开的ieddar的一种示例性亲双烯体是辛烯部分(例如，在tco官能团内)。这种“官能化生物分子”的生物分子一般地可以包括各种sdab或其他小蛋白质构建体。在一种特定的实施方式中，生物分子包括抗her2 sdab。已有效证明该方法的一种示例性生物分子是5f7；然而，该方法不限于此。在一些这样的实施方式中，官能化生物分子可以用一个或多个化学部分(例如一个或多个接头)进一步修饰。在某些实施方式中，接头包括肾刷状缘酶(rbbe)可切割接头。同样，在一些实施方式中，各种其他官能团可以包含在官能化生物分子内，只要这样的其他官能团不会负面干扰期望的ieddar即可。在可用于所公开方法的一种特定实施方式中，官能化生物分子包括tco-gk-peg
4-nhs接头。官能化生物分子(通过其亲双烯体)与含
18
f的试剂(通过其二烯)之间的反应可以提供争夺ieddar的期望的标记的生物分子。
[0055]
在其他实施方式中，与官能化生物分子和含
18
f的试剂缔合的部分被转换(例如，使得二烯与官能化生物分子(而不是如上所述的含
18
f的试剂)缔合并且亲双烯体与含
18
f的试
剂(而不是如上所述的官能化生物分子)缔合。有利地，在一些实施方式中，含
18
f的试剂包括氟烟酰基部分，其中氟烟酰基部分包括
18
f。在这样的实施方式中，除了标记物(
18
f)之外，含
18
f的试剂(其被提供然后偶联到官能化生物分子上)还包括适用于上述步骤b)的ieddar的亲双烯体。适用于本文公开的ieddar的一种示例性亲双烯体是辛烯部分(例如，在tco官能团内)。各种其他官能团可以存在于含
18
f的试剂内，只要这样的其他官能团不会负面干扰期望的ieddar即可。例如，含
18
f的试剂可以进一步包括不同长度的接头，其中该接头包括例如peg和/或肾刷状缘酶(rbbe)可切割接头。可以有效地用于所公开的方法中的一种特定的示例性含
18
f(亲双烯体)试剂是6-[
18
f]氟烟酰基-peg
4-gk-tco。
[0056]
当含
18
f的试剂包括适用于步骤b)的ieddar的亲双烯体时，该方法中使用的官能化生物分子包括二烯。一种示例性二烯是含四嗪的部分，其可以有利地包括在官能化生物分子内。这种“官能化生物分子”的生物分子通常同样可以包括各种sdab或其他小蛋白质构建体。在一种特定的实施方式中，生物分子包括抗her2 sdab。已有效证明该方法的一种示例性生物分子是5f7-ggc；然而，该方法不限于此。各种其他官能团可以存在于官能化生物分子内，只要这样的其他官能团不会负面干扰期望的ieddar即可。例如，官能化生物分子可以进一步包括不同长度的接头(例如，peg)。在另外的实施方式中，含
18
f的试剂包括rbbe可切割接头。可以有效地用于所公开的方法中的一种特定的示例性官能化生物分子(二烯)试剂是5f7-ggc-mal-peg
4-tz。官能化生物分子(通过其二烯)与含
18
f的试剂(通过其亲双烯体)之间的反应可以提供争夺ieddar的期望的标记的生物分子。
[0057]
在一种实施方式中，参考方法提供了
18
f标记的生物分子(例如，根据上文参考的方法之一制备)。两种示例性的这样的
18
f标记的生物分子在下面示出为式i和ii。
[0058][0059]
式i：[
18
f]fn-peg
4-tz-tcogk-peg
4-生物分子
[0060][0061]
式ii：[
18
f]fn-peg
4-gk-tco-tz-peg
4-mal-5f7ggc
[0062]
在另一种实施方式中，提供了一种用于制备
18
f标记的残留剂和
18
f标记的生物分子的方法，该方法包括点击反应(例如，铜催化的点击反应)。所公开的反应包括以下步骤：a)提供包括炔部分的具有胍的化合物；b)提供包括氟烷基叠氮化物并且包括peg接头的化合物；c)使步骤a)和b)的化合物通过点击化学反应；以及任选地，为了形成放射性标记的生物分子，d)使所得化合物与生物分子反应。当点击反应是铜催化时，使用的铜催化剂可以变化，并且可以是适合催化反应的任何含铜化合物或盐。在一种特定的实施方式中，铜催化剂
是硫酸铜。有利地，在一些实施方式中，基于点击反应的方法可以提供比先前报道的其中叠氮部分存在于具有胍的化合物上并且该化合物与炔烃(6-[
18
f]氟己炔)反应的类似反应更高的放射化学产率。参见glaser,bioconjugate chem.2007,18,989-993，其通过援引整体并入本文。
[0063]
包括氟烷基叠氮化物并且包括peg接头的化合物可以变化。在一种实施方式中，该化合物是1-叠氮-2-(2-(2-(2-[
18
f]氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷。类似地，与其反应的化合物(即，具有胍的化合物)可以变化。一种示例性的这样的化合物是3-((2,3-双(叔丁氧基羰基)胍)甲基)-5-乙炔基苯甲酸n-琥珀酰亚胺酯)。
[0064]
通过上述步骤a)-c)提供的
18
f-标记的残留剂可以与各种生物分子反应以得到
18
f-标记的生物分子。该方法中采用的生物分子一般可以包括各种sdab或其他小蛋白质构建体(例如，上文概述的生物分子类型)。在一种特定的实施方式中，生物分子包括抗her2 sdab。已有效证明该方法的两种示例性生物分子是2rs15d和5f7；然而，该方法不限于此。该方法可以提供比用于制备这样的化合物的先前点击化学方法更简单的合成操作，并且在一些实施方式中可以提供更高的总体放射化学产率。本公开进一步提供了由这样的反应提供的
18
f标记的生物分子和中间体(包括
18
f标记的残留剂)。一种示例性的
18
f标记的生物分子示出在下面的式iii中。
[0065][0066]
式iii：[
18
f]rl-iii-2rs15d
[0067]
本文提供了用于生产
18
f标记的残留剂和
18
f标记的生物分子的另外的方法，其采用氟脱硼基化。在特定的实施方式中，该方法涉及提供包含tfp酯和胍部分的硼酸酯前体，其中胍部分上的氮原子被保护(例如，用boc基团或其他合适的保护基团，其可以在不会对期望反应产生负面影响的条件下引入/去除)。通过用适当的含
18
f的试剂(例如，[
18
f]四乙基氟化铵[
18
f]teaf)处理，使硼酸酯前体进行
18
f-氟脱硼基化。这种氟脱硼基化有利地由例如铜试剂(包括但不限cu(py)4(otf)2)催化。然后可以处理所得化合物以将胍部分上的氮原子脱保护(例如，当保护基团是boc时，这些基团可以通过用tfa处理去除)。
[0068]
然后可以将该脱保护的
18
f标记的残留剂与生物分子缀合，该生物分子可以包括上文所述的任何生物分子。在一种特定的非限制性的实施方式中，生物分子是纳米抗体，例如，诸如5f7或5f7的变体。本公开进一步提供了由这样的反应提供的
18
f标记的生物分子和中间体。一种示例性的这样的
18
f标记的生物分子示出在下面的式iv中。
tco-gk-peg
4-5f7在76.0％rcy中获得，其rcp通过sds-page为》99％；kd和irf分别为5.4
±
0.7nm和77.5％。[
18
f]fn-peg
4-tz-tco-gk-peg
4-5f7在体外skov-3细胞中的摄取在1、2和4h时分别为输入活性的2.4
±
0.2％、2.3
±
0.3％和2.6
±
0.1％。共培养的异-[
125
i]sgmib-5f7获得了显著更高的值(25.9
±
1.5％、32.6
±
2.3％和40.8
±
0.8％)。与体外结果不同，[
18
f]fn-peg
4-tz-tco-gk-peg
4-5f7的skov3异种移植物摄取(在1h和3h时为2.6
±
2.0％id/g和3.7
±
1.4％id/g)没有显著不同于共注射的异-[
125
i]sgmib-5f7{分别为2.0
±
2.2％id/g和6.5
±
2.6％id/g，(p》0.05)}。因为肾脏中
18
f水平是其7分之一，[
18
f]fn-peg
4-tz-tco-gk-peg
4-5f7的肿瘤-肾脏比(t:k)在1h和3h时分别为0.6
±
0.2和4.6
±
2.0，显著高于(p《0.05)对于共注射的异-[
125
i]sgmib-5f7观察到的(0.1
±
0.1和1.3
±
1.2)那些。尽管sdab不同，但在本研究中对于[
18
f]fn-peg
4-tz-tco-gk-peg
4-5f7获得的t:k值远高于之前对于[
18
f]alf-nota-peg
4-tz-tco-gk-peg
4-2rs15d报道的那些(在1h和3h时分别为0.4
±
0.1和2.1
±
0.8；在3h时p《0.05)。
[0080]
结论：
[0081]
尽管四嗪部分通常被认为对于snar的标准
18
f标记条件是不稳定的，但我们通过减少碱量获得了最高达47％的rcy。将用tco部分和刷状缘酶可切割接头修饰的sdab 5f7使用[
18
f]2通过ieddar用
18
f标记，其产率高，同时保留了对her2的亲和力和免疫反应性。这种
18
f标记方法需要进一步研究以应用于sdab和其他类型的小蛋白质构建体。
[0082]
实施例2：用6-氟烟酰基部分的抗her2 sdab的氟18标记：通过包括肾刷状缘酶可切割接头的逆电子需求第尔斯-阿尔德反应(ieddar)
[0083]
目标：
[0084]
her2特异性sdab，5f7被如下衍生。首先，对5f7-ggc与马来酰亚胺基-peg
4-tz进行迈克尔加成，并且通过se-hplc分离5f7-ggc-mal-peg
4-tz的1:1缀合物。为了使用ieddar进行
18
f标记，合成了含
18
f标记的tco的试剂，该试剂还包含肾刷状缘酶(rbbe)可切割接头、peg4接头和6-[
18
f]氟烟酰基部分([
18
f]fn-peg
4-gk-tco)。还合成了具有三甲基三氟甲磺酸铵代替f的类似试剂(前体)。
18
f标记的剂[
18
f]fn-peg
4-gk-tco以47.8
±
9.4％(n＝10)的放射化学产率(rcy)从前体中获得。它以27.3
±
8.2％(n＝5)的产率与5f7-ggc-mal-peg
4-tz缀合。合成[
18
f]fn-peg
4-gk-tco-tz-peg
4-mal-5f7ggc(图2a)的总衰减校正产率为7-8％，并且标记的纳米抗体保持对her2的亲和力。来自[
18
f]fn-peg
4-gk-tco-tz-peg
4-mal-5f7ggc和异-[
125
i]sgmib-5f7的配对标记生物分布的肿瘤、肾脏、血液和肌肉中的摄取值如图2b所示。获得了
18
f对比于
125
i显著更高的肿瘤/肾脏和肿瘤/血液比率。具有bt474m1异种移植物的小鼠的mip图像如图2c所示。如假设的，在腹腔注射3h时观察到肝胆器官中的摄取非常少，并且基本上仅在肿瘤和膀胱中观察到摄取非常高的对比度图像。
[0085]
实施例3：用3-(1-(2-(2-(2-(2-[
18
f]氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-5-(胍基甲基)苯甲酸n-琥珀酰亚胺酯，一种替代的残留辅剂对单域抗体片段进行氟18标记
[0086]
目标：
[0087]
单域抗体片段(sdab)是用于免疫pet的有吸引力的载体。早前，我们使用残留辅剂3-((4-(4-[
18
f]氟丁基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-5-(胍基甲基)苯甲酸n-琥珀酰亚胺酯([
18
f]sfbtmgmb或[
18
f]rl-i用
18
f来标记抗her2 sdabs；vaidyanathan et al.,
2rs15d给出相当大的优势。[
18
f]rl-iii-2rs15d的体外和体内肿瘤摄取与共孵育/注射的[
125
i]sgmib-2rs15d相似，证明了[
18
f]rl-iii的残留能力。[
18
f]rl-iii-2rs15d的正常组织摄取与早前对于[
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f]rl-i-2rs15d看到的类似，尽管是在不同的模型中。这些结果表明，[
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f]rl-iii是一种比[
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f]rl-i更好的辅剂，并需要用进一步的结构修改进行进一步研究，以减少标记的sdab在一些正常组织中的活性摄取。在颅内肿瘤的背景下使用这种辅剂标记的sdab表明[
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f]rl-iii-sdab是一种很好的显像剂。
[0095]
实施例4：3-[
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f]氟-5-胍基甲基苯甲酸四氟苯基酯([
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f]tfpfgmb)的制备。
[0096]
目标：
[0097]
我们着手制备类似于sgmib的
18
f标记的残留剂(图5a)。特别地，我们瞄准了一种类似于异-sgmib的试剂，但包含四氟苯基(tfp)酯代替n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯(([
18
f]tfpfgmb；图5b)，具有可接受的pcy。
[0098]
方法：
[0099]
为此，合成了包含tfp酯的硼酸酯前体(9，如图5b所示)，其中胍基中的所有氮均被boc基团保护，并通过以下进行
18
f-氟脱硼基化：用[
18
f]四乙基氟化铵([
18
f]teaf)、cu(py)4(otf)2在dma中在～100℃下处理5-10min。产物(图5b的中间体2)通过正相hplc分离，具有18.0
±
7.0％(n＝4)的rcy。通过用tfa处理将所得标记中间体10脱保护。通过将5f7变体在硼酸盐缓冲液ph 8.5中的溶液与3在37℃下孵育20min，使5f7的纳米抗体变体(“5f7-变体”)与化合物11(如图5b所示)以4.7
±
0.2％；n＝2)的产率缀合。
[0100]
结果：
[0101]
根据单个实验表明，示出了在表达her2的bt474m1细胞与[
18
f]tfpfgmb-5f7-变体在37℃下孵育后1、2和4h时分别摄取了输入剂量的30.2
±
1.7％、40.1
±
1.5％、45.5
±
1.6％；在2h时确定的非特异性结合为6.9
±
0.3％。在这三个时间点细胞内捕获的活性分别为13.8
±
0.3％、17.1
±
1.0％和24.0
±
1.4％。
[0102]
说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均表示本发明所属领域的技术人员的水平。所有出版物、专利和专利申请均通过援引并入本文，其程度就好像每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地和单独地指明通过援引并入一样。尽管为了清楚理解的目的，已经通过说明和实例的方式对上述发明进行了一些详细的描述，但显而易见的是可以在实施方式的范围内进行某些改变和修改。