一种美丽月见草种苗的繁育方法与流程

1.本发明涉及植物栽培技术领域，尤其涉及一种美丽月见草种苗的繁育方法。


背景技术：

2.月见草是柳叶菜科月见草属多年生草本，又名山芝麻、夜来香、叶下香、待宵草等。因其通常在傍晚19-21时开花，故称月见草。月见草属全球有121余种，我国有10种，原产北美洲南部和南美洲北部，为重要的花卉植物，现分布于美洲温带至亚热带地区。我国浙江、江西、云南、贵州、四川等有栽培并逸为野生。中国植物志记载，粉花月见草又称美丽月见草，在我国生于海拔1000-2000m荒地草沟、沟边半阴处，根系发达，近木质化，耐旱、耐寒、耐酸性土壤、耐瘠薄，喜长日照和燥热气候，繁殖力强。
3.月见草整株可提取芳香化合物-芳樟醇，是香料、化妆品、肥皂日用品的良好植物，种子榨油食用，是高档食用油，是集油料、观赏、药材于一身的多功能植物。月见草能够治疗多种疾病，调节血液中类脂物质，对高胆固醇、高血脂引起的冠状动脉梗塞、粥样硬化及脑血栓等症有显著疗效。月见草油能够调整胃肠吸收功能，减少体内脂肪堆积；降低脂肪肝中三酰甘油含量，抑制脂肪肝的发生；对乌头碱中毒和氯化钡诱发的心律失常效果显著；能够抑制炎症、结缔组织增生和坏死；抑制血栓形成，活血通络作用显著。月见草制剂能够祛风除湿，强筋壮骨，营养神经，减轻病痛，作用显著。月见草根煮水口服，对于筋骨酸软、中风偏瘫、风湿麻痛、腹痛泄泻具有一定的作用，煮水清洗伤口、疮疡、湿疹等具有收敛作用。
4.目前，植物组织培养技术在植物离体快繁、苗木脱毒、细胞突变体筛选、基因(转基因)育种、种植资源保存等方面得到普遍应用。植物组织培养在基因转化方面的应用，主要是通过在植物细胞中导入外源基因，待其在植物体内表达并遗传，就能使植物性状发生定向改变，从而增强作物抵抗恶劣环境的能力，改良作物性状。植物组织培养利于选育细胞突变体，由于愈伤组织和细胞在培养过程中不断进行分生，受培养条件和外界环境的影响，经常有突变体出现。因此，急需开发一种美丽月见草种苗的繁育方法以期为美丽月见草通过植物组织培养方式培育新优品种提供技术依据。
5.有鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种美丽月见草种苗的繁育方法，操作简单，培养基配制方便，外植体材料容易获得，诱导率高，增殖系数高，生根率高，移栽成活率高，克服了季节对种苗繁育的限制，获得的再生植株能够有效保留母本的优良性状，实现了美丽月见草组培苗的植株再生，为美丽月见草通过植物组织培养方式进行分子育种工作提供了重要依据。
7.为了实现上述目的，本发明提供的一种美丽月见草种苗的繁育方法，包括如下步骤：
8.(1)外植体的选择和处理：于当年5-6月份选取无病虫害的幼枝作为外植体，去除多余叶片及叶柄，切分成1-2cm并带有节间的茎段，洗洁精浸洗，流水冲洗，灭菌剂灭菌2次，
无菌水冲洗；
9.(2)不定芽的诱导：将经过步骤(1)处理的外植体接种于诱导培养基中，光照培养4周，获得不定芽，培养条件为：温度(25
±
2)℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lx；
10.(3)增殖培养：将步骤(2)获得的不定芽切成1-2cm的茎段，切除多余的叶片，每个茎段带有一个节间且保留1-2片叶片，接种至增殖培养基中，培养4周，获得丛生芽，培养条件为：温度(25
±
2)℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lx；
11.(4)生根培养：将步骤(3)获得的丛生芽切分成单株，接种于生根培养基中，培养15天，获得生根苗，培养条件为：温度(25
±
2)℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lx；
12.(5)练苗、移栽：将步骤(4)获得的生根苗放在室温中预处理1周后，取出生根苗，清洗掉培养基，杀菌剂浸泡30min，种植于配制好的基质中，遮光练苗，空气湿度保持在60-70％之间，1周后置于自然光下，获得美丽月见草再生植株。
13.优选地，所述步骤(2)中，诱导培养基以ms培养基为基本培养基，添加6-ba浓度为0.5-2.0mg/l、naa浓度为0.1-1.0mg/l、蔗糖30g/l、琼脂7.0g/l，ph为5.8-6.2。
14.优选地，所述步骤(3)中，增殖培养基以ms培养基为基本培养基，添加6-ba浓度为0.5-1.5mg/l、naa浓度为0.1-1.0mg/l、蔗糖30g/l、琼脂7.0g/l，ph为5.8-6.2。
15.优选地，所述步骤(4)中，生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，添加iaa浓度为0.3-1.0mg/l、ac浓度为1.0g/l、蔗糖30g/l、琼脂7.0g/l，ph为5.8-6.2。
16.优选地，所述步骤(1)中，选取半硬化的幼枝作为外植体，灭菌剂分别为75％酒精和10％新洁尔灭，灭菌时间分别为30s和20min。
17.优选地，所述步骤(2)中，将经过处理的外植体切除部分伤口垂直接种于诱导培养基上，分清植物学上下端，下端插进诱导培养基中，上端暴露在诱导培养基上。
18.优选地，所述步骤(3)中，进行切段的不定芽株高为3-5cm。
19.优选地，所述步骤(4)中，进行切分的丛生芽株高为4cm以上。
20.优选地，所述步骤(5)中，预处理的方法为：打开瓶盖倒入蒸馏水，再将瓶盖盖在瓶口上，不拧紧，2-3天后拿掉瓶盖，放置在温室中弱光下2-3天，20-25℃保持瓶内有充足的蒸馏水；所述基质中各组分体积比为泥炭：珍珠岩：蛭石：稻壳炭＝6：2：1.5：0.5。
21.本发明提供的一种美丽月见草种苗的繁育方法，具有如下有益效果。
22.1.本发明以美丽月见草当年生的幼枝作为外植体材料，诱导产生不定芽，4周后可以获得具有母本优良性状的再生植株，克服了以往通过诱导愈伤再分化植株时，后代出现变异等问题。
23.2.本发明在外植体的培育过程中，在外植体生长的不同阶段采用不同细胞分裂素6-ba和生长素naa、iaa等激素浓度的配比，有利于外植体的生长发育，保障了美丽月见草生根苗的质量。
24.3.采用本发明的练苗、移栽技术对生根苗进行驯化，使其完全适应外部环境，移栽成活率可达100％，小苗质量好。
附图说明
25.图1为本发明实施例美丽月见草的不定芽。
26.图2为本发明实施例美丽月见草的丛生芽。
27.图3为本发明实施例美丽月见草的生根苗。
具体实施方式
28.下面结合具体实施例和附图对本发明做进一步说明，以助于理解本发明的内容。
29.本发明提供的一种美丽月见草种苗的繁育方法，包括如下步骤：
30.(1)外植体的选择和处理：于当年5-6月份选取无病虫害的幼枝(半硬化枝条)作为外植体，去除多余叶片及叶柄，切分成1-2cm左右大小并带有节间且保留一片1/3左右大小叶片的茎段，用洗洁精浸洗15min左右，流水冲洗2h，待用。在超净工作台上，先用75％酒精灭菌30s，再用10％新洁尔灭灭菌20min，无菌水冲洗5遍，然后用无菌滤纸吸干外植体表面的水分，外植体两端各切去1.0mm大小左右，待用。
31.(2)不定芽的诱导：将经过步骤(1)处理的外植体垂直接种于诱导培养基中，分清植物学上下端，下端插进诱导培养基中，上端暴露在诱导培养基上。正常光照培养4周左右，诱导出不定芽，诱导率可达327％。如图1所示，为本发明实施例美丽月见草的不定芽。培养条件为：温度(25
±
2)℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lx；诱导培养基以ms培养基为基本培养基，添加6-ba浓度为0.5-2.0mg/l、naa浓度为0.1-1.0mg/l、蔗糖30g/l、琼脂7.0g/l，ph为5.8-6.2。优选地，所述诱导培养基为：ms 6-ba2.0mg/l naa0.5mg/l 蔗糖30g/l 琼脂7.0g/l。
32.(3)增殖培养：从步骤(2)获得的不定芽中选取分化良好、生长情况基本一致，株高3-5cm的不定芽切成1-2cm的茎段，切除多余的叶片，每个茎段带有一个节间且保留1-2片叶片，垂直接种至增殖培养基中，培养4周，获得丛生芽，增殖系数为3.8，不定芽生长健壮，叶片浓绿色。如图2所示，为本发明实施例美丽月见草的丛生芽。培养条件为：温度(25
±
2)℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lx；增殖培养基以ms培养基为基本培养基，添加6-ba浓度为0.5-1.5mg/l、naa浓度为0.1-1.0mg/l、蔗糖30g/l、琼脂7.0g/l，ph为5.8-6.2。优选地，所述增殖培养基为：ms 6-ba1.0mg/l naa0.5mg/l 蔗糖30g/l 琼脂7.0g/l。
33.(4)生根培养：从步骤(3)获得的丛生芽中选取分化良好、生长均匀，株高≥4cm的丛生芽切分成单株，垂直接种于生根培养基中，培养15天，获得生根苗，生根率可达100％，根系乳白色，富有弹性。如图3所示，为本发明实施例美丽月见草的生根苗。培养条件为：温度(25
±
2)℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lx；生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，添加iaa浓度为0.3-1.0mg/l、ac浓度为1.0g/l、蔗糖30g/l、琼脂7.0g/l，ph为5.8-6.2。优选地，所述生根培养基为：1/2ms iaa0.5mg/l ac 1.0mg/l 蔗糖30g/l 琼脂7.0g/l。
34.(5)练苗、移栽：将步骤(4)获得的生根苗放在室温中进行预处理，打开瓶盖倒入蒸馏水，再将瓶盖盖在瓶口上(不拧紧)，2-3天后拿掉瓶盖，20-25℃保持瓶内有充足的蒸馏水，放置在温室中弱光下2-3天。取出生根苗，清洗掉培养基，杀菌剂浸泡30min，种植于配制好的基质中，所述基质中各组分体积比为泥炭：珍珠岩：蛭石：稻壳炭＝6：2：1.5：0.5。自然光下练苗3周，成活率100％。获得月见草穴盘苗，小苗生长健壮。
35.本发明以美丽月见草当年生的幼枝作为外植体材料，诱导产生不定芽，4周后可以获得具有母本优良性状的再生植株，克服了以往通过诱导愈伤再分化植株时，后代出现变异等问题。本发明在外植体的培育过程中，在外植体生长的不同阶段采用不同细胞分裂素6-ba和生长素naa、iaa等激素浓度的配比，有利于外植体的生长发育，保障了美丽月见草生
根苗的质量。采用本发明的练苗、移栽技术对生根苗进行驯化，使其完全适应外部环境，移栽成活率可达100％，小苗质量好。
36.本发明操作简单，培养基配制方便，外植体材料容易获得，诱导率高，增殖系数高，生根率高，移栽成活率高，克服了季节对种苗繁育的限制，获得的再生植株能够有效保留母本的优良性状，实现了美丽月见草组培苗的植株再生，为美丽月见草通过植物组织培养方式进行分子育种工作提供了重要依据。
37.本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明构思的前提下，所做的任何显而易见的修改、等同替换或其他改进，均应包含在本发明的保护范围之内。