一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法与流程

技术特征：
1.一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)接种新鲜培养物：取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌和沙门菌接种于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上进行培养，取白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上进行培养，取黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面上进行培养；(2)制备可计数菌悬液：a、分别取新鲜培养且生长良好的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、白色念珠菌的单菌落10～20个，充分磨匀于无菌的15～20％甘油水溶液中，得菌悬液；b、取新鲜培养且孢子丰富的黑曲霉斜面6～10只，采用15-20％甘油水溶液将黑曲霉孢子洗脱，得孢子菌悬液；(3)将菌悬液和孢子菌悬液分别混匀后分装，低温保存，即得到保存效期长的可计数菌株。2.根据权利要求1所述的一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法，其特征在于：所述步骤a具体为，分别挑取新鲜培养且生长良好的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、白色念珠菌的单菌落挑取15个，充分磨匀于150～200ml无菌的15％甘油水溶液中。3.根据权利要求1所述的一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法，其特征在于：所述步骤b具体为，取新鲜培养且孢子丰富的黑曲霉斜面8只，采用15％甘油水溶液将黑曲霉孢子洗脱，得孢子菌悬液。4.根据权利要求1所述的一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌和沙门菌的培养温度为30～35℃，培养时间为18～24小时；白色念珠菌的培养温度为20～25℃，培养时间为2～3天；黑曲霉的培养温度为20～25℃，培养时间为5～7天。5.根据权利要求1所述的一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中低温保存的温度≤-36℃。6.根据权利要求1所述的一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法，其特征在于：从步骤(2)开始至低温保存，操作时间小于1h。7.根据权利要求1所述的一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法，其特征在于：所述的可计数菌株采用10倍或100倍递增稀释法，直至菌落数量在30～300cfu之间，进行计数。

技术总结
本发明公开了一种低温下保存效期长的可计数菌株的制备方法，包括取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌和沙门菌接种于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上培养，取白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上培养，取黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面上培养；取培养的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、白色念珠菌的单菌落磨匀于甘油水溶液中，得菌悬液；取培养的黑曲霉，采用甘油水溶液将孢子洗脱，得孢子菌悬液；将菌悬液和孢子菌悬液分别混匀后分装，低温保存，得可计数菌株。本发明具有一次制备即可长期使用、方便准确控制得到菌落数量和使用时仅稀释即可马上进行实验的特点。特点。


技术研发人员：谢应梅 刘艳 王晓冬 吴玉春
受保护的技术使用者：贵州百灵企业集团制药股份有限公司
技术研发日：2021.12.27
技术公布日：2022/3/22