尿液再生蛋白及其多肽片段在过敏性疾病中的应用的制作方法

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8.优选地，所述制剂为过敏性疾病患者尿液再生蛋白及其多肽片段检测试剂盒。
9.优选地，所述试剂盒包括抗原抗体反应的免疫方法及其试剂盒如能够特异性结合再生蛋白及其多肽片段的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种。
10.优选地，所述检测方法包括直接检测再生蛋白及其多肽片段的质谱等方法及其相关试剂盒。
11.优选地，所述检测方法包括直接检测再生蛋白及其多肽片段的相关核酸检测等方法及其相关试剂盒。
12.优选地，所述试剂盒还包括选自下组的成分：固相载体，稀释液，对照品，标准品，质控品，检测抗体，第二抗体、第二抗体稀释液，发光试剂，洗涤液、显色液、终止液中的任意一种或几种的组合。
13.优选地，所述标准品包括再生蛋白标准品、人源化标签抗体标准品；较佳地，所述质控品包括：再生蛋白质控品、人源化标签抗体质控品；较佳地，所述固相载体包括：微粒、微球、玻片、试纸条、塑料珠、液相芯片、微孔板或亲和膜等以及同等功能的其他载体。
14.优选地，所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺、纤维素中的任意一种及具有类似功能的载体。
15.发明人首先收集了健康人、过敏性疾病患者的尿液标本，4000r/min离心5min后，吸取上清，采用bradford法测定提取的蛋白浓度，进行sds-page酶解。尿液样本的label-free质谱分析由orbitrapfusion型质谱完成。将过敏性疾病组和正常对照组在质谱中得到的数据进行定量计算。以蛋白表达量差异在1.5倍以上且经统计检验p《0.05作为参考标准
筛选差异性多肽。然后发明人对具有统计学意义的差异性多肽进行鉴定，利用数据库检索得到差异蛋白再生蛋白。
16.本发明通过研究证实与健康人相比，再生蛋白及其多肽片段在过敏性疾病患者的尿液中呈低表达，与临床诊断有较好的一致性。从而提出检测尿液再生蛋白及其多肽片段可用于过敏性疾病的辅助诊断或病情监测。
17.本发明发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测尿液再生蛋白及其多肽片段。
18.为让本发明的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下。
附图说明
19.图1是尿液再生蛋白及其多肽片段在过敏性疾病组及健康对照组中含量图。
具体实施方式
20.实施例1 尿液标本的收集与处理选取过敏性疾病患者作为过敏性疾病组，选取同期健康体检者作为正常对照组。收集各组研究对象入院后的新鲜晨尿样本30ml，不能正常排尿者收集其早晨导尿管中尿液，置于干燥、洁净的容器内。将收集的尿液标本4000r/min离心5min后，吸取上清，每管2ml分装，-80℃冰箱保存。
21.实施例2 质谱分析和尿液多肽的筛选对尿液样品蛋白提取，并对提取的蛋白浓度进行测定。尿液样本的质谱分析由orbitrapfusion型质谱完成。将实验组和正常对照组在质谱中得到的数据进行定量计算。组间比较采用t-test进行差异分析，以蛋白表达量差异在1.5倍以上且经统计检验p《0.05作为参考标准筛选差异表达蛋白。
22.实施例3 差异多肽的鉴定及分析使用的数据库为uniprot_homo数据库，产生的质谱原始文件采用maxquant软件处理，检索参数设置见表1。
23.表1 max quant软件检索参数表
与健康人相比，再生蛋白在过敏性疾病患者的尿液中低表达，其在健康对照组和过敏性疾病组尿液中的含量如图1所示，再生蛋白在正常对照组和过敏性疾病组尿液中的表达具有显著性差异。
24.虽然本发明已以较佳实施例披露如上，然其并非用以限定本发明，任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的更动与改进，因此本发明的保护范围当视权利要求所界定者为准。