一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素综合定性方法

技术特征：
1.一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，主要包括如下步骤：第一步，采用衍生试剂对氧脂素标准品进行化学衍生化反应，氧脂素转化为带正电荷的衍生产物；第二步，将第一步所得氧脂素标准品的衍生产物在正离子模式下进行质谱分析，在质谱碰撞诱导裂解中丢失固定质量数的中性基团产生特征二级碎片；根据所得质谱谱图确认氧脂素衍生产物丢失的中性基团；第三步，根据第二步确定的中性丢失基团推导出不同类别氧脂素的质谱碎裂方式及中性基团丢失规律；第四步，采用校正剂对氧脂素标准品的衍生产物的保留时间进行校正，将保留时间转化为保留指数；第五步，将待测生物样本采用衍生试剂进行化学衍生化反应后，在正离子模式下进行质谱分析，所得谱图根据第三步确定的中性基团丢失规律和第四步确定的保留指数，对其中所含有的氧脂素进行定性分析。2.根据权利要求1所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，第一步和第四步中衍生试剂和衍生化反应的条件相同。3.根据权利要求1所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，所述衍生试剂为一端含有一个氨基，另一端含有一个叔胺基的化合物，通式表示为：nh
2-(ch2)n-nr2，其中，n取值范围是2～4，r基团为碳数少于2的烷基。4.根据权利要求3所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，所述衍生试剂为n，n-二乙基-1，3-丙二胺；衍生化反应中，衍生试剂与氧脂素的摩尔比大于＞500。5.根据权利要求1所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，化学衍生化反应的过程为：将氮吹干的氧脂素标准品或者氮吹干的待测生物样本提取液，加入衍生试剂，再依次加入缩合剂和催化剂，采用溶剂定容，混匀后室温反应20-40s即可完成衍生化反应。6.根据权利要求5所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，衍生化反应中，以n，n，n’，n
’‑
四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲和1-羟基苯并三氮唑水合物为缩合剂，三乙胺为催化剂，溶剂采用有机溶剂，反应温度为常温。7.根据权利要求1所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，第二步中，丢失的中性基团主要为nh-(ch2ch3)2和-h2o-nh-(ch2ch3)2；根据氧脂素不同种类结构，中性基团还有-(h2o)
2-nh-(ch2ch3)2或者-(h2o)
3-nh-(ch2ch3)2，含环类氧脂素衍生产物丢失的-h2o，还包括过氧基氧脂素衍生产物产生的特殊中性丢失基团nh-(ch2ch3)2、-h2o-nh-(ch2ch3)2、-oh-c
x-1
h
y
、-oh-c
x-1
h
y-nh-(ch2ch3)2、-ooh-c
x
h
y
和-ooh-c
x
h
y-nh-(ch2ch3)2；其中，x、y分别为过氧基氧脂素中-ooh所连接碳的邻近碳到甲基端碎裂中性部分的碳原子和氢原子数目。8.根据权利要求1所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，第三步中，当标准品不包括待测生物样本中所有的氧脂素时，根
据第二步中标准品衍生产物产生特征二级碎片的规律，推导出不同类别氧脂素的碎裂方式及中性丢失后产生的特征二级碎片，即中性基团丢失规律。9.根据权利要求1所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，第四步中，校正剂采用与氧脂素结构类似的c6～c17饱和脂肪酸，通过公式1对氧脂素标准品的保留时间进行校正处理；公式1：其中：riox：氧脂素衍生化产物的保留指数n:氧脂素衍生化产物洗脱之前的校正剂的碳数tx：氧脂素衍生化产物的保留时间tbx：氧脂素衍生化产物洗脱之前的校正剂的保留时间tax：氧脂素衍生化产物洗脱之后的校正剂的保留时间δn：氧脂素衍生化产物洗脱前后的校正剂的碳数差。10.根据权利要求1所述的一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，其特征在于，第五步中，所述待测生物样本为肝脏或者血浆；针对待测生物样品中没有标准品的氧脂素，依赖于中性基团丢失规律即可推测出其-ooh位置异构体，从而定性过氧基的氧脂素，不依赖于保留时间和保留指数。

技术总结
本发明公开了一种基于保留指数结合化学衍生化质谱特征二级碎片的氧脂素定性方法，第一步，对氧脂素标准品进行化学衍生化反应转化为带正电荷的衍生产物；第二步，将氧脂素标准品的衍生产物进行质谱分析，在质谱碰撞诱导裂解中丢失固定质量数的中性基团产生特征二级碎片；第三步，根据第二步确定的特征二级碎片推导出不同类别氧脂素的中性基团丢失规律；第四步，对氧脂素标准品的衍生产物的保留时间进行校正，将保留时间转化为保留指数；第五步，将待测生物样本经化学衍生化反应后进行质谱分析，所得谱图根据特征二级碎片和保留指数，对其中所含有的氧脂素进行定性分析。该方法通量高，操作简单，覆盖范围广，能够实现生物样本中氧脂素的综合定性。氧脂素的综合定性。


技术研发人员：魏芳 吴宗远 吕昕 饶缔 陈洪 黄凤洪
受保护的技术使用者：中国农业科学院油料作物研究所
技术研发日：2021.12.22
技术公布日：2022/4/15