基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合、试剂盒和方法与流程

技术特征：
1.一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合，其特征在于，包括以下引物：1)针对ugt1a1基因(c.211g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:1所示的正向引物和seq id no:2所示的反向引物；2)针对gjb2基因(c.109g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:3所示的正向引物和seq id no:4所示的反向引物；3)针对gusb基因(c.104c>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:225所示的正向引物和seq id no:226所示的反向引物；4)针对slc26a4基因(c.919-2a>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:13所示的正向引物和seq id no:14所示的反向引物；5)针对abcg5基因(c.904 1g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:51所示的正向引物和seq id no:52所示的反向引物；6)针对ldlr基因(c.1747c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:37所示的正向引物和seq id no:38所示的反向引物；7)针对slc26a4基因(c.1692dupa)多态性位点的检测引物：如seq id no:131所示的正向引物和seq id no:132所示的反向引物；8)针对galt基因(c.821-7a>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:93所示的正向引物和seq id no:94所示的反向引物。2.如权利要求1所述的引物库组合，其特征在于，所述新生儿遗传病基因还包括abcd4、abcg8、acad8、acadm、acads、acadsb、acadvl、acat1、acsf3、ada、agl、ahcy、aldh7a1、aldob、apob、arg1、arsa、arsb、asl、ass1、atp7a、atp7b、auh、bckdha、bckdhb、btd、cbs、cps1、cpt1a、cpt2、cyp11b1、dbt、ddc、dld、etfa、etfb、etfdh、mut、ethe1、f9、fah、g6pc、g6pd、gaa、galc、gale、galk1、galns、gamt、gba、gcdh、gch1、gjb3、gla、glb1、gldc、gnmt、gnptab、hadha、hadhb、hbb、hexa、hlcs、hmgcl、hpd、hsd17b10、ids、idua、ivd、l2hgdh、ldlr、lmbrd1、mat1a、mccc1、mccc2、mmaa、mmab、mmachc、mmadhc、mthfr、mtr、mt-rnr1、mtrr、naglu、nags、npc1、npc2、otc、pah、pc、pcca、pccb、pcsk9、phgdh、phka2、pnpo、prodh、pts、pygl、qdpr、sgsh、slc10a1、slc12a3、slc22a5、slc25a13、slc25a15、slc25a20、slc37a4、slc6a8、smpd1、spr、suclg1、tat、th中的至少一种。3.如权利要求2所述的引物库组合，其特征在于，所述引物库组合还包括以下引物：针对slc10a1基因(c.800c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:5所示的正向引物和seq id no:6所示的反向引物；针对galc基因(c.1901t>c)多态性位点的检测引物：如seq id no:7所示的正向引物和seq id no:8所示的反向引物；针对slc25a13基因(c.852_855deltatg)多态性位点的检测引物：如seq id no:9所示的正向引物和seq id no:10所示的反向引物；针对prodh基因(c.1322t>c)多态性位点的检测引物：如seq id no:11所示的正向引物和seq id no:12所示的反向引物；针对slc22a5基因(c.1400c>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:15所示的正向引物和seq id no:16所示的反向引物；针对slc25a20基因(c.199-10t>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:17所示的正向引物和seq id no:18所示的反向引物；针对acadsb基因(c.1165a>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:19所示的正向引物和seq id no:20所示的反向引物；针对atp7b基因(c.2755c>g)多态
性位点的检测引物：如seq id no:21所示的正向引物和seq id no:22所示的反向引物；针对g6pd基因(c.1478g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:23所示的正向引物和seq id no:24所示的反向引物；针对pah基因(c.1174t>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:25所示的正向引物和seq id no:26所示的反向引物；针对gaa基因(c.752c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:27所示的正向引物和seq id no:28所示的反向引物；针对acads基因(c.1031a>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:29所示的正向引物和seq id no:30所示的反向引物；针对pts基因(c.259c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:31所示的正向引物和seq id no:32所示的反向引物；针对mmachc基因(c.609g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:33所示的正向引物和seq id no:34所示的反向引物；针对mt-rnr1基因(m.1555a>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:35所示的正向引物和seq id no:36所示的反向引物；针对apob基因(c.10579c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:39所示的正向引物和seq id no:40所示的反向引物；针对hlcs基因(c.1522c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:41所示的正向引物和seq id no:42所示的反向引物；针对gjb3基因(c.538c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:43所示的正向引物和seq id no:44所示的反向引物；针对mut基因(c.1663g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:45所示的正向引物和seq id no:46所示的反向引物；针对etfdh基因(c.250g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:47所示的正向引物和seq id no:48所示的反向引物；针对aldob基因(c.1013c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:49所示的正向引物和seq id no:50所示的反向引物；针对gcdh基因(c.1244-2a>c)多态性位点的检测引物：如seq id no:53所示的正向引物和seq id no:54所示的反向引物；针对gba基因(c.1448t>c)多态性位点的检测引物：如seq id no:55所示的正向引物和seq id no:56所示的反向引物；针对th基因(c.698g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:57所示的正向引物和seq id no:58所示的反向引物；针对naglu基因(c.1562c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:59所示的正向引物和seq id no:60所示的反向引物；针对cps1基因(c.2407c>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:61所示的正向引物和seq id no:62所示的反向引物；针对gale基因(c.505c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:63所示的正向引物和seq id no:64所示的反向引物；针对pygl基因(c.2467c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:65所示的正向引物和seq id no:66所示的反向引物；针对g6pc基因(c.648g>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:67所示的正向引物和seq id no:68所示的反向引物；针对ass1基因(c.1087c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:69所示的正向引物和seq id no:70所示的反向引物；针对mat1a基因(c.1070c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:71所示的正向引物和seq id no:72所示的反向引物；针对agl基因(c.1735 1g>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:73所示的正向引物和seq id no:74所示的反向引物；针对acadm基因(c.449_452delctga)多态性位点的检测引物：如seq id no:75所示的正向引物和seq id no:76所示的反向引物；针对smpd1基因(c.1133g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:77所示的正向引物和seq id no:78所示的反向引物；针对slc25a15基因(c.535c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:79所示的正向引物和seq id no:80所示的反向引物；针对sgsh基因(c.703g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:81所示的正向引物和seq id no:82所示的反向引
id no:143所示的正向引物和seq id no:144所示的反向引物；针对pcca基因(c.802c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:145所示的正向引物和seq id no:146所示的反向引物；针对tat基因(c.236-1g>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:147所示的正向引物和seq id no:148所示的反向引物；针对galk1基因(c.165 2t>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:149所示的正向引物和seq id no:150所示的反向引物；针对suclg1基因(c.460c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:151所示的正向引物和seq id no:152所示的反向引物；针对cbs基因(c.346g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:153所示的正向引物和seq id no:154所示的反向引物；针对btd基因(c.43a>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:155所示的正向引物和seq id no:156所示的反向引物；针对lmbrd1基因(c.247-2a>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:157所示的正向引物和seq id no:158所示的反向引物；针对ddc基因(c.1297dupa)多态性位点的检测引物：如seq id no:159所示的正向引物和seq id no:160所示的反向引物；针对asl基因(c.299t>c)多态性位点的检测引物：如seq id no:161所示的正向引物和seq id no:162所示的反向引物；针对f9基因(c.682g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:163所示的正向引物和seq id no:164所示的反向引物；针对phka2基因(c.1099c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:165所示的正向引物和seq id no:166所示的反向引物；针对otc基因(c.148g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:167所示的正向引物和seq id no:168所示的反向引物；针对dbt基因(c.1017 1g>c)多态性位点的检测引物：如seq id no:169所示的正向引物和seq id no:170所示的反向引物；针对mthfr基因(c.667g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:171所示的正向引物和seq id no:172所示的反向引物；针对l2hgdh基因(c.343c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:173所示的正向引物和seq id no:174所示的反向引物；针对fah基因(c.509g>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:175所示的正向引物和seq id no:176所示的反向引物；针对hadhb基因(c.739c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:177所示的正向引物和seq id no:178所示的反向引物；针对qdpr基因(c.710c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:179所示的正向引物和seq id no:180所示的反向引物；针对mtrr基因(c.1727t>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:181所示的正向引物和seq id no:182所示的反向引物；针对phgdh基因(c.385a>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:183所示的正向引物和seq id no:184所示的反向引物；针对cpt1a基因(c.2071c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:185所示的正向引物和seq id no:186所示的反向引物；针对mmab基因(c.682delg)多态性位点的检测引物：如seq id no:187所示的正向引物和seq id no:188所示的反向引物；针对hpd基因(c.224g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:189所示的正向引物和seq id no:190所示的反向引物；针对gch1基因(c.662t>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:191所示的正向引物和seq id no:192所示的反向引物；针对npc2基因(c.363 1g>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:193所示的正向引物和seq id no:194所示的反向引物；针对hexa基因(c.1444g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:195所示的正向引物和seq id no:196所示的反向引物；针对npc1基因(c.3562g>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:197所示的正向引物和seq id no:198所示的反向引物；针对gamt基因(c.705dela)多态性位点的检测引物：如seq id no:199所示的正向引物和seq id no:200所示的反向引物；针对ethe1基因(c.488g>a)多态性位点的检测引物：如
seq id no:201所示的正向引物和seq id no:202所示的反向引物；针对etfb基因(c.249dela)多态性位点的检测引物：如seq id no:203所示的正向引物和seq id no:204所示的反向引物；针对mmadhc基因(c.438_442delagagt)多态性位点的检测引物：如seq id no:205所示的正向引物和seq id no:206所示的反向引物；针对abcg8基因(c.163c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:207所示的正向引物和seq id no:208所示的反向引物；针对spr基因(c.372g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:209所示的正向引物和seq id no:210所示的反向引物；针对ahcy基因(c.807_814deltaacattg)多态性位点的检测引物：如seq id no:211所示的正向引物和seq id no:212所示的反向引物；针对glb1基因(c.1734g>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:213所示的正向引物和seq id no:214所示的反向引物；针对idua基因(c.1861c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:215所示的正向引物和seq id no:216所示的反向引物；针对mccc2基因(c.197-2a>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:217所示的正向引物和seq id no:218所示的反向引物；针对arg1基因(c.703g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:219所示的正向引物和seq id no:220所示的反向引物；针对gnmt基因(c.296g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:221所示的正向引物和seq id no:222所示的反向引物；针对dld基因(c.140t>c)多态性位点的检测引物：如seq id no:223所示的正向引物和seq id no:224所示的反向引物；针对cyp11b1基因(c.1358g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:227所示的正向引物和seq id no:228所示的反向引物；针对gldc基因(c.2938a>g)多态性位点的检测引物：如seq id no:229所示的正向引物和seq id no:230所示的反向引物；针对auh基因(c.883c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:231所示的正向引物和seq id no:232所示的反向引物；针对slc6a8基因(c.321_323delctt)多态性位点的检测引物：如seq id no:233所示的正向引物和seq id no:234所示的反向引物；针对hsd17b10(c.397g>a)多态性位点的检测引物：如seq id no:235所示的正向引物和seq id no:236所示的反向引物；针对atp7a(c.2090c>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:237所示的正向引物和seq id no:238所示的反向引物；针对ids(c.421a>t)多态性位点的检测引物：如seq id no:239所示的正向引物和seq id no:240所示的反向引物。4.一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-3任一项所述的引物库组合。5.一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的方法，其特征在于，所述方法为非诊断用途。6.如权利要求1-3任一项所述的引物库组合在制备检测新生儿遗传病基因的试剂盒中的用途。7.一种采用如权利要求1-3任一项所述的引物库组合检测新生儿遗传病基因的方法，所述方法为非诊断方法，包括以下步骤：1)提取干血斑样本的dna；2)采用如权利要求1-3任一项所述的引物库组合进行第一轮pcr扩增，获得pcr扩增产物，然后进行测序pcr扩增，纯化及上机测序，分析测序结果。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)中第一轮pcr扩增的条件为：a、98℃ 30s；b、98℃ 10s；c、58℃ 30s；d、72℃ 1min；e、回到b循环30次；f、72℃ 5min；g、25℃，循
环。9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，测序pcr反应体系为：bdt v3.10.5μl、5x seq buffer 1.75μl、引物组1.0μl和水5.75μl。10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)中测序pcr扩增的条件为：a、96℃ 1min；b、96℃ 10s；c、50℃ 30s；d、60℃ 4min；e、回到b循环25次；f、25℃，循环。

技术总结
本发明涉及基因检测技术领域，具体公开了一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合、试剂盒和方法。本发明采用第一代测序技术，其中涉及120个基因及近千个不同位点的致病性突变，本发明可以根据需求，随机进行不同的基因检测验证，选择所需基因位点的引物组而无需进行相关引物设计，以及后续筛选，可以两步PCR，纯化后直接进行测序，可以一次性进行96个样本检测，很大程度上简化了检测过程，降低了检测成本，准确率较高。准确率较高。准确率较高。


技术研发人员：韩凯斌 陈佳 朱丽叶
受保护的技术使用者：广州盛安医学检验有限公司
技术研发日：2022.01.25
技术公布日：2022/4/29