用于检测合成卡西酮MDPV的电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用

用于检测合成卡西酮mdpv的电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明属于电化学发光检测领域，具体涉及一种用于检测合成卡西酮 mdpv的电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用。


背景技术：

2.电子烟是模仿卷烟的电子产品，一直以来，商家都以电子烟不含焦油、悬浮微粒等有害成分为卖点大肆推广，甚至在产品介绍中打着“戒烟神器”“清肺”等旗号。世界卫生组织专门对电子烟进行了研究，并得出明确结论：电子烟有害公共健康，必须加强对其管制，更要杜绝对青少年和非吸烟者产生危害。
3.合成卡西酮mdpv是新精神活性物质的一种，它是一种类似“浴盐”的物质，通常吸毒者会通过吞咽、吸食或溶液注射的方法进行摄取。它作用与人的身体和大脑，短期内会使人心跳加快，暴躁易怒甚至产生幻觉。长期的服用会使人肌肉无力甚至出现肾脏和心脏方面的问题。电子烟掺杂毒品的问题已经严重影响到大众的人身健康安全，因此迫切的需要一种能够检测电子烟中精神活性物质的方法。目前，mdpv的检测方法主要有液相色谱法(lc)、气相色谱/ 质谱法(gc-ms)、液相色谱/质谱法(lc-ms)、荧光光谱(fl)和拉曼光谱(lrs) 等等，这些方法的准确度较高，但它们往往需要与红外(ft-ir)和核磁共振(nmr) 等方法联用，而且存在价格昂贵，检测限高等一系列问题，这些问题都将限制它们在实际监测中的应用，因此寻找简便快速灵敏的检测手法迫在眉睫。
4.电化学发光(ecl)是结合了化学发光电化学的优势而发展起来的一种方法，因其独特的优势而被广泛应用于生物分析以及表面分析等领域。它具有灵敏度高、背景低、易控制和检测时间短等优点，并且无需引入外部光源，相比于光致发光方法可有效地避免背景光源的干扰，通过高信噪比来提升检测灵敏度，从而达到对目标物进行痕量检测的目的。现在，检测mdpv用三电极体系，电化学发光方法的报道还很少。


技术实现要素：

5.针对合成卡西酮mdpv检测现有技术的不足，本发明提供了一种用于检测合成卡西酮mdpv的电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用。本发明利用in-mof@sn-tcpp纳米复合材料修饰玻碳电极表面，获得 in-mof@sn-tcpp/gce修饰电极，使得电化学发光的灵敏度和稳定性显著提高。将适配体sf负载于复合材料in-mof@sn-tcpp修饰的玻碳电极的表面，制得电化学发光适配体传感器。再加入检测物合成卡西酮mdpv后， sf/in-mof@sn-tcpp/gce电化学发光适配体传感器的ecl信号值出现明显下降，能够实现对mdpv的检测。加入其他干扰物后发现该适配体传感器具有良好的特异性。
6.一种用于检测合成卡西酮mdpv的电化学发光适配体传感器，所述电化学发光适配体传感器是由适配体sf负载于复合材料in-mof@sn-tcpp修饰的玻碳电极表面而成；复合材料in-mof@sn-tcpp为sn-tcpp(5,10,15,20-四(4-羧基苯基)锡卟啉包覆的in-mof；适配体
sf是含有 5'-gggtagggcgggaagttactgtcttactgtcg ta-3'碱基序列的适配体。
7.进一步的，复合材料in-mof@sn-tcpp修饰玻碳电极的制备方法，包括如下步骤：
8.(1)制备in-mof；
9.具体的，准确称量0.4082g in(no3)3、0.2g h2bdc和5ml dmf置于烧杯中，超声溶解形成无色透明溶液。将溶液转移至聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜中在100℃下反应24h，然后冷却至室温，离心，乙醇洗涤、干燥，得到的白色固体in-mof。
10.(2)in-mof@sn-tcpp复合材料的制备：将步骤(1)制备的in-mof分散在dmf和乙醇的混合溶液中，并加入5,10,15,20-四(4-羧基苯基)卟啉(tcpp) 及氯化亚锡和/或氯化亚锡水合物，充分溶解分散后，转移至聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜中，在反应温度下获得in-mof@sn-tcpp复合材料。
11.具体的，准确称取一定量的in-mof(10mg)、二水合氯化亚锡 (sncl2·
2h2o)(11mg)和5,10,15,20-四(4-羧基苯基)卟啉(tcpp)(8mg)溶于12mldmf和乙醇的混合溶液中。将溶液转移至聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜中在 100℃下反应24h，然后冷却至室温，离心收集砖红色沉淀，用dmf和乙醇分别洗涤并干燥，得到的暗红色固体即为in-mof@sn-tcpp复合材料。
12.进一步的，dmf和乙醇的混合溶液中dmf和乙醇(v:v＝1:2)。
13.(3)将in-mof@sn-tcpp分散于dmf中，超声使其分散均匀，得到 in-mof@sn-tcpp分散液，然后底涂在洁净的玻碳电极表面，自然晾干得复合材料in-mof@sn-tcpp修饰玻碳电极。
14.进一步的，步骤(3)中洁净的玻碳电极的清洁方法包括：将玻碳电极抛光，依次用硝酸溶液、乙醇溶液和超纯水超声清洗，室温下吹干。
15.进一步的，in-mof@sn-tcpp的dmf分散液浓度为1mg/ml， in-mof@sn-tcpp的dmf分散液的滴涂量为4μl。
16.本发明还提供了上述用于检测合成卡西酮的电化学发光适配体传感器的制备方法，包括如下步骤：
17.通过静电吸附作用将适配体sf负载在in-mof@sn-tcpp复合材料修饰的玻碳电极表面，自然晾干，制得用于检测合成卡西酮的电化学发光适配体传感器 (sf/in-mof@sn-tcpp/gce)。
18.进一步的，将适配体sf负载在in-mof@sn-tcpp复合材料修饰的玻碳电极表面的具体方法为：首先向含有kcl、nacl、mgcl2和乙二胺四乙酸的tris-hcl 缓冲溶液中加入适配体sf，配制适配体sf浓度为0.5～5μm的适配体溶液，然后移取所述适配体溶液并将其滴涂在所述in-mof@sn-tcpp复合材料修饰的玻碳电极表面。
19.进一步的，适配体溶液中适配体sf的浓度为1μm，该浓度下便于保证更好的电化学发光强度。
20.本发明还提供了基于电化学发光适配体传感器检测合成卡西酮的方法，包括如下步骤：
21.以如上所述的电化学发光适配体传感器(sf/in-mof@sn-tcpp/gce)作为工作电极，ag/agcl为参比电极，铂丝电极为对电极组成三电极体系，样品中的 mdpv被定量固定到传感器的表面，通过产生的电化学发光信号用于检测。
22.进一步的，具体步骤为：
23.步骤1，含k2s2o8的pbs缓冲溶液的配制：
24.用ph为7.4的0.1mol/l的pbs缓冲溶液配制含0.05mol/l k2s2o8的pbs 缓冲溶液；
25.步骤2，不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液的配制：
26.配制mdpv溶液，然后将mdpv溶液用tris-hcl缓冲溶液稀释并加入与sf相同浓度的适配体lf(适配体lf浓度控制为与适配体sf按1:1的摩尔比结合)，得到一系列不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液，该标准溶液中 mdpv的浓度范围为1.0
×
10-14
～1.0
×
10-5
g/l；
27.步骤3，标准曲线的绘制：
28.将等量的按照步骤2配制的不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液修饰在所述电化学发光适配体传感器上并反应相同时间，使电化学发光适配体传感器结合mdpv，然后以lf/mdpv/sf/in-mof@sn-tcpp/gce作为工作电极， ag/agcl为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，以步骤1中的含k2s2o8的pbs缓冲溶液为电解液，在-1.7～0v的电化学窗口范围内，光电倍增管高压 800v，扫速0.1v/s，进行循环伏安扫描，记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合mdpv前后的发光强度差值(δecl)与mdpv标准溶液中的mdpv浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程；
29.步骤4，样品中mdpv的检测
30.所述样品先经过预处理，用tris-hcl缓冲溶液将样品进行稀释，按照步骤3 再将其修饰在电化学发光适配体传感器表面反应相同时间，使电化学发光适配体传感器结合mdpv，然后采用步骤3方法检测发光强度，再根据线性回归方程计算出样品中mdpv的浓度。
31.进一步的，步骤2中所述的适配体lf为含有5'-tacgactcaggctttgcc gggtatgactcaggctttgccgggtaacaggg-3'碱基序列的适配体，步骤 3中所述的mdpv的用量为4μl，反应时间为30min。
32.本发明的有益效果有：
33.本发明设计了一种基于卟啉的衍生物sn-tcpp与铟基金属有机框架in-mof 复合材料的电化学发光适配体传感器，两种材料在合成时通过静电相互作用结合，可以获得高效且稳定的电化学发光性能。该发明充分利用了适配体和电化学发光传感器的独特优势，通过mdpv对该体系ecl信号强度的猝灭效应，成功实现对mdpv的灵敏检测，实验证明该传感平台可特异性识别检测物mdpv。本发明的检测范围为1.0
×
10-12
～1.0
×
10-6
g/l，最低检测限为1.7
×
10-13
g/l。本发明检测mdpv的操作简单、选择性好、灵敏度高、检测范围宽，对推广适配体传感器在实际检测方面的应用具有重要的意义。
附图说明
34.图1为该发明中的电化学发光适配体传感器的制备及对mdpv的检测的简要流程图。
35.图2为实施例1中所构建的电化学发光适配体传感器在与不同浓度的 mdpv结合后的ecl响应图，其中mdpv的浓度从a到g依次为：(a)1.0
×
10-12 g/l；(b)1.0
×
10-11
g/l；(c)1.0
×
10-10
g/l；(d)1.0
×
10-9
g/l；(e)1.0
×
10-8
g/l； (f)1.0
×
10-7
g/l；(g)1.0
×
10-6
g/l；
36.图3为实施例1加入mdpv前后发光强度的差值(δecl)与mdpv浓度对数值的标准曲线；
37.图4是实施例1中制备的in-mof@sn-tcpp复合材料的扫描电镜图。
38.图5为in-mof@sn-tcpp修饰的玻碳电极的ecl响应随时间的变化图。
39.图6为nicop-mof@sn-tcpp修饰的玻碳电极的ecl响应随时间的变化图。
40.图7为in-mof修饰的玻碳电极的ecl响应随时间的变化图。
41.图8为nicop-mof修饰的玻碳电极的ecl响应随时间的变化图。
42.图9为本发明实施例中不同in-mof与tcpp质量下的in-mof@sn-tcpp 修饰的玻碳电极的ecl响应对比图。
具体实施方式
43.本发明不局限于下列具体实施方式，本领域一般技术人员根据本发明公开的内容，可以采用其他多种具体实施方式实施本发明的，或者凡是采用本发明的设计结构和思路，做简单变化或更改的，都落入本发明的保护范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
44.本发明将结合实施例作进一步详述：以下实施例中，含有5'
‑ꢀ
agatgggggttgaggctaagccga-3'碱基序列的适配体(sf)和含有 5'-tacgactcaggctttgccgggtatgactcaggctttgccgggtaacagg g-3'碱基序列的适配体(lf)均购自生工生物工程(上海)股份有限公司，将该适配体sf负载在in-mof@sn-tcpp复合材料修饰的玻碳电极表面的方法为：首先向含有kcl、nacl、mgcl2和乙二胺四乙酸的tris-hcl缓冲溶液中加入所述适配体，配制适配体溶液，然后移取所述适配体溶液并将其滴涂在所述的 in-mof@sn-tcpp复合材料修饰的玻碳电极表面。具体的：
45.步骤1，将采购的适配体开盖前先涡旋振荡5min，再以4000rpm离心15 min；
46.步骤2，打开管盖，依照管上的标注，分别在适配体sf和lf中加入735μl 和535μl含有0.2mol/l kcl、0.1mol/l nacl、5.0mmol/l mgcl2和1.0mmol/l 乙二胺四乙酸的0.05m tris-hcl缓冲溶液的储备溶液；
47.步骤3，充分振荡均匀，将适配体稀释到10μm的浓度并放于4℃冰箱冷藏待用。
48.以下实施例中不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液的配制方法为：配制mdpv溶液，然后用tris-hcl缓冲溶液稀释并加入与sf相同浓度的适配体lf，得到一系列不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液，本实施例中含适配体lf的mdpv标准溶液中mdpv的浓度分别为(a)1.0
×
10-12
g/l；(b)1.0
ꢀ×
10-11
g/l；(c)1.0
×
10-10
g/l；(d)1.0
×
10-9
g/l；(e)1.0
×
10-8
g/l；(f)1.0
×
10-7
g/l； (g)1.0
×
10-6
g/l；
49.实施例1：
50.(一)组装sf/in-mof@sn-tcpp/gce传感器
51.(1)in-mof与in-mof@sn-tcpp材料的制备：
52.准确称量0.4082g in(no3)3、0.2g h2bdc和5ml dmf置于烧杯中，超声溶解形成无色透明溶液。将溶液转移至聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜中在100℃下反应24h，然后冷却至室温，离心，乙醇洗涤、干燥，得到的白色固体in-mof。将其保存于4℃下。
53.准确称取一定量的in-mof(10mg)、二水合氯化亚锡(sncl2·
2h2o)(11mg)和 5,10,15,20-四(4-羧基苯基)卟啉(tcpp)(8mg)溶于12ml dmf和乙醇的混合溶液中。将溶液转移至聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜中在100℃下反应24h，然后冷却至室温，离心收集砖红色
沉淀，用dmf和乙醇分别洗涤并干燥，得到的暗红色固体即为in-mof@sn-tcpp复合材料。将in-mof@sn-tcpp分散于dmf 中，超声使其分散均匀，得到in-mof@sn-tcpp分散液，该分散液的浓度为1 mg/ml。
54.(2)检测mdpv的电化学发光适配体传感器的制备
55.首先将玻碳电极用抛光粉(al2o3)在麂皮上打磨成镜面后，依次用硝酸溶液、乙醇溶液和超纯水超声清洗，室温下吹干获得预处理后的玻碳电极。用微量注射器移取步骤(1)中制得的4μl 1mg/ml的in-mof@sn-tcpp的dmf分散液，待自然晾干后，再修饰4μl配制好的含适配体sf的tris-hcl缓冲溶液，自然晾干后，得到sf/in-mof@sn-tcpp/gce传感器，作为电化学发光测试的传感元件。
56.其中，适配体溶液中适配体sf的浓度为1μm。
57.(二)基于电化学发光适配体传感器检测mdpv的方法
58.(1)标准曲线的绘制
59.将等量的不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液修饰在如(一)所述电化学发光适配体传感器上并反应相同时间，使电化学发光适配体传感器结合 mdpv，然后以lf/mdpv/sf/in-mof@sn-tcpp/gce作为工作电极，ag/agcl 为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，以ph为7.4的含0.05mol/l k2s2o8的pbs缓冲溶液为电解液，在-1.7～0v的电化学窗口范围内，光电倍增管高压800v，扫速0.1v/s，进行循环伏安扫描，记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合mdpv前后的发光强度差值(δecl)与mdpv 标准溶液中的mdpv浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程；
60.δecl＝3980.50887 1006.6002lg c(ng/l)，检测范围为1.0
×
10-12
～1.0
×
10-6
g/l，检测限为1.7
×
10-13
g/l。
61.(2)样品的检测
62.取某品牌电子烟的烟液100μl于100μl tris-hcl缓冲溶液中，得到稀释液并将稀释液等量分成数份。将不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液加入到上述的稀释液中，充分反应后以3000rpm的转速离心5min，收集上清液。取 4μl上清液修饰在所制得的电化学发光适配体传感器表面，按步骤(1)所得的线性回归方程计算出待检测样品中mdpv的浓度，其结果列于表1中。
63.本实施例以in-mof@sn-tcpp为基底材料(形貌如图4)，利用in-mof和 sn-tcpp两者之间的静电相互作用稳定结合，能够大幅度提高单独材料的电化学发光强度，导电性良好，稳定性好，且传感器选择性好。
64.对比实施例1：
65.(1)sf/in-mof/gce传感器的制备
66.用微样注射器移取4μl 1mg/ml的in-mof的dmf分散液，滴涂到前处理过的玻碳电极(前处理方法同实施例1)表面，得到in-mof/gce化学修饰电极，自然晾干后待用，在in-mof/gce化学修饰电极表面再滴涂4μl 1μm适配体 sf，自然晾干后得到sf/in-mof/gce传感器，作为电化学发光测试的传感元件。 (单体测试修饰量与样品浓度与实施例保持单一变量)
67.(2)标准曲线的绘制
68.以步骤(1)制得的sf/in-mof/gce传感器作为传感元件，将等量的不同浓度的含适
配体lf的mdpv标准溶液修饰在传感器表面并反应30min，之后将其作为工作电极，ag/agcl为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，并以含有0.05mol/l k2s2o8的ph 7.4的0.1mol/l pbs缓冲液为电解液测定发光强度，在-1.7～0v的电化学窗口范围内，光电倍增管高压800v，扫速0.1v/s，进行循环伏安扫描，记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合mdpv前后的发光强度差值与mdpv标准溶液中的mdpv浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程。
69.(3)样品的检测
70.取某品牌电子烟的烟液100μl于100μl tris-hcl缓冲溶液中，得到稀释液并将稀释液等量分成数份。将不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液加入到上述的稀释液中，充分反应后以3000rpm的转速离心5min，收集上清液。取 4μl上清液修饰在所制得的电化学发光适配体传感器表面，按步骤(1)所得的线性回归方程计算出待检测样品中mdpv的浓度，其结果列于表1中。
71.对比实施例2：
72.(1)sf/sn-tcpp/gce传感器的制备
73.用微量注射器移取4μl 1mg/ml的sn-tcpp的dmf分散液，滴涂到前处理过的玻碳电极(前处理方法同实施例1)表面，得到sn-tcpp/gce化学修饰电极，自然晾干后待用，在sn-tcpp/gce化学修饰电极表面再滴涂4μl 1μm 适配体sf，自然晾干后得到sf/sn-tcpp/gce传感器，作为电化学发光测试的传感元件。(单体测试修饰量与样品浓度与实施例保持单一变量)
74.(2)标准曲线的绘制
75.以步骤(1)制得的sf/sn-tcpp/gce传感器作为传感元件，将等量的不同浓度的mdpv标准溶液修饰在传感器表面并反应30min，之后将其作为工作电极，ag/agcl为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，并以含有0.05mol/l k2s2o8的ph 7.4的0.1mol/l pbs缓冲液为电解液测定发光强度，在-1.7～0v 的电化学窗口范围内，光电倍增管高压800v，扫速0.1v/s，进行循环伏安扫描，记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合mdpv前后的发光强度差值与mdpv标准溶液中的mdpv浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程。
76.(3)样品的检测
77.取某品牌电子烟的烟液100μl于100μl tris-hcl缓冲溶液中，得到稀释液并将稀释液等量分成数份。将不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液加入到上述的稀释液中，充分反应后以3000rpm的转速离心5min，收集上清液。取 4μl上清液修饰在所制得的电化学发光适配体传感器表面，按步骤(1)所得的线性回归方程计算出待检测样品中mdpv的浓度，其结果列于表1中。
78.对比实施例3：
79.(1)sf/sn-tcpp/in-mof/gce传感器的制备
80.用微量注射器移取4μl 1mg/ml的in-mof的dmf分散液，滴涂到前处理过的玻碳电极(前处理方法同实施例1)表面，得到in-mof/gce化学修饰电极，自然晾干后，再滴涂4μl 1mg/ml的sn-tcpp的dmf分散液，自然晾干待用；在sn-tcpp/in-mof/gce化学修饰电极表面再滴涂4μl 1μm适配体sf，自然晾干后得到sf/sn-tcpp/in-mof/gce传感器，作为电化学发
光测试的传感元件。 (单体测试修饰量与样品浓度与实施例保持单一变量)
81.(2)标准曲线的绘制
82.以步骤(1)制得的sf/sn-tcpp/in-mof/gce传感器作为传感元件，将等量的不同浓度的mdpv标准溶液修饰在传感器表面并反应30min，之后将其作为工作电极，ag/agcl为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，并以含有0.05mol/l k2s2o8的ph 7.4的0.1mol/l pbs缓冲液为电解液测定发光强度，在-1.7～0v的电化学窗口范围内，光电倍增管高压800v，扫速0.1v/s，进行循环伏安扫描，记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合 mdpv前后的发光强度差值与mdpv标准溶液中的mdpv浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程。
83.(3)样品的检测
84.取某品牌电子烟的烟液100μl于100μl tris-hcl缓冲溶液中，得到稀释液并将稀释液等量分成数份。将不同浓度的含适配体lf的mdpv标准溶液加入到上述的稀释液中，充分反应后以3000rpm的转速离心5min，收集上清液。取 4μl上清液修饰在所制得的电化学发光适配体传感器表面，按步骤(1)所得的线性回归方程计算出待检测样品中mdpv的浓度，其结果列于表1中。
85.表1 某电子烟样品的测定结果
[0086][0087]
备注：a为三次测定的平均值
[0088]
如表1所示，样品平行测定3次，加标回收率在98％～105％之间，相对标准偏差小于5％，表明回收效果较好。上述实验结果说明，不用in-mof@sn-tcpp 复合材料修饰而单独用in-mof、sn-tcpp或sn-tcpp/in-mof修饰玻碳电极后进一步组装传感元件均无法检测出mdpv，因此本发明的传感器是可用于检测电子烟中的mdpv。
[0089]
基于以上验证可知本发明基于mdpv对sf/in-mof@sn-tcpp/gce体系的电化学发光猝灭效应，构建了一种能够快速、灵敏检测mdpv的新方法。由于 in-mof与sn-tcpp具有良好的静电相互作用，能够形成电化学发光强度高且稳定性好的in-mof@sn-tcpp复合材料。当存在微量的mdpv时， sf/in-mof@sn-tcpp/gce体系中in-mof会富集检测物mdpv。与此同时，
溶液中的适配体lf会与传感器中的适配体sf进行碱基配对，将mdpv和适配体lf同时固定在电化学发光适配体传感器上，使得sf/in-mof@sn-tcpp/gce 的ecl信号显著降低。通过研究发现sf/in-mof@sn-tcpp/gce传感器系统 ecl信号的增强值(δecl)与mdpv的浓度呈现良好的线性关系。本发明使用的电化学发光法不仅具有灵敏度高、检测速度快、选择性好和线性范围宽等优点，而且对电子烟中mdpv的定量分析具有很大的应用潜力。
[0090]
此外，关于金属有机骨架的选择，本发明还进行了如下试验：首先对比了 nicop-mof与in-mof分别修饰的玻碳电极在相同条件下的电化学发光稳定性，结果表明二者稳定性相当。但是当与sn-tcpp复合后前者稳定性明显变差，具体如下：
[0091]
nicop-mof@sn-tcpp复合材料的制备：
[0092]
(1)nico-mof的制备：准确称量0.291g co(no3)3·
6h2o、0.66g 2-甲基咪唑和30ml甲醇置于烧杯中，室温搅拌24h后(至少24h)，离心，甲醇洗涤、干燥。得到的蓝紫色固体zif-67。
[0093]
准确称量50mg zif-67和15ml乙醇置于烧杯中，记为溶液a。然后准确称量200mg ni(no3)3·
6h2o和15ml乙醇置于烧杯中，记为溶液b。将溶液a 缓慢倒入溶液b中并将混合溶液转移至聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜中在 120℃下反应1h，然后冷却至室温，离心，乙醇洗涤、干燥，得到的绿色粉末 nico-mof。
[0094]
取上述20mg nico-mof与120mg nah2po2混合均匀后置于管式炉内，在氩气氛围下升温至300℃，升温速率为1-5℃/min，加热1h，得到灰色固体 nicop-mof。
[0095]
(2)nicop-mof@sn-tcpp复合材料的制备：准确称取一定量的 nicop-mof(10mg)、二水合氯化亚锡(sncl2·
2h2o)(11mg)和5,10,15,20-四(4-羧基苯基)卟啉(tcpp)(8mg)溶于12ml dmf和乙醇的混合溶液中。将溶液转移至聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜中在100℃下反应24h，然后冷却至室温，离心收集砖红色沉淀，用dmf和乙醇分别洗涤并干燥，得到的暗红色固体即为 nicop-mof@sn-tcpp复合材料。
[0096]
电化学发光稳定性测试方法为：将nicop-mof、in-mof、 nicop-mof@sn-tcpp分别按照复合材料in-mof@sn-tcpp修饰的玻碳电极制备方法制得nicop-mof修饰的玻碳电极、in-mof修饰的玻碳电极、 nicop-mof@sn-tcpp修饰的玻碳电极，然后各自作为工作电极，并以ag/agcl 为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，并以含有0.05mol/l k2s2o8的ph 7.4的0.1mol/l pbs缓冲液为电解液测定发光强度，具体测试条件参见实施例1，in-mof@sn-tcpp修饰的玻碳电极和nicop-mof@sn-tcpp修饰的玻碳电极ecl响应随时间的变化图分别详见图5和图6，nicop-mof修饰的玻碳电极和in-mof修饰的玻碳电极的ecl响应随时间的变化图见图7和图8。
[0097]
图9为本发明实施例中不同in-mof与tcpp质量下的in-mof@sn-tcpp 修饰的玻碳电极的ecl响应对比图，从图中可以看出in-mof与tcpp的质量比为8:8～16时，ecl响应效果较好，适用于制备本发明的传感器，但更优选8： 10～16。
[0098]
以上实施例仅用于本发明说明使用，并非对本发明的限制，有关领域的技术人员可在不脱离本发明的范围内，还可以作出相应的各种变化，因此所有等同替换或等效变型的方式形成的技术方案均属于本发明的保护范围。