一种检测血清中25(OH)D2和25(OH)D3的液相色谱质谱串联检测方法与流程

技术特征：
1.一种检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，包括以下步骤：s1将待测血清样品与内标溶液混合，通过脂质去除分散固相萃取得到检测液；s2采用超高效液相色谱质谱串联技术结合同位素稀释法对检测液进行定量检测；所述同位素内标溶液为含有25(oh)d
2-d3和25(oh)d
3-d6同位素内标物的甲醇溶液；所述超高效液相条件为：流动相a为0.1％(v:v)甲酸水溶液；流动相b为0.1％(v:v)甲酸甲醇溶液；柱温为40℃；流动相梯度洗脱参数为：质谱条件为：离子化模式为正离子模式，检测采用多反应监测的质谱扫描模式。2.根据权利要求1所述的检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，所述质谱条件具体为：电离源为电喷雾离子源，其中气帘气流量为20psi，碰撞气流量为9psi，喷雾气流量为55psi，辅助加热气流量为66psi，离子喷雾电压为5500v，加热温度为600℃；质谱检测参数为：其中，*为定量离子。
3.根据权利要求1或2所述的检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，s1中，所述前处理为使用脂质去除分散固相萃取法进行前处理。4.根据权利要求3所述的检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，所述前处理具体包括：(1)向100-300μl待测血清中加入20μl混合内标，涡旋后在避光处静置半小时；(2)在混合液中加入600μl乙腈，涡旋后加入100-200μl饱和食盐水，震荡后在14000r/min离心3-8min得到样品上清液；(3)在预称量50-200mg脂质分散固相萃取填料的ep管中加入50-200μl水使填料活化，然后加入所述样品上清液500μl，涡旋后加入100μl饱和食盐水，震荡后14000r/min离心3-8min；(4)取上层清液，得到所述检测液。5.根据权利要求1或2所述的检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，结合s2得到检测结果和25(oh)d2、25(oh)d3的标准工作曲线，得到25(oh)d2和25(oh)d3在血清中的含量值。6.根据权利要求5所述的检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，所述25(oh)d2和25(oh)d3的标准工作曲线采用同位素内标定量法制得。7.根据权利要求6所述的检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，所述同位素内标定量法具体步骤包括：将已知且不同浓度的25(oh)d2和25(oh)d3的甲醇溶液和空白血清基质混合，经过前处理得到不同浓度的标准待测液，使用超高效液相色谱质谱串联技术对所述不同浓度的标准待测液分别进行检测，以标准检测液中25(oh)d2、25(oh)d3与内标物峰面积比为y轴，标准检测液中25(oh)d2和25(oh)d3浓度为x轴，得到25(oh)d2和25(oh)d3的标准工作曲线。8.根据权利要求7所述的检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，所述空白血清基质为1％(质量体积浓度)牛血清白蛋白磷酸盐缓冲溶液。9.根据权利要求1所述的检测血清中25(oh)d2和25(oh)d3的液相色谱质谱串联检测方法，其特征在于，所述色谱柱是hss t3。

技术总结
本发明涉及一种检测血清中25(OH)D2和25(OH)D3的液相色谱质谱串联检测方法，包括将待测血清样品与内标溶液混合，通过脂质去除分散固相萃取前处理得到检测液，采用超高效液相色谱质谱串联技术对所述检测液进行检测；本发明的方法操作简单，耗时少，灵敏度高，精密度高，有机试剂使用量少，对操作人员健康和环境友好，实际应用前景广阔。实际应用前景广阔。


技术研发人员：乔晓婷 谢洁 易可可 江游 黄泽建 刘梅英 戴新华 方向
受保护的技术使用者：中国计量科学研究院
技术研发日：2022.03.03
技术公布日：2022/6/28